Determination of effect of TSCE-W o

Determination of effect of TSCE-W on generation of lipid peroxidation in CCD-1064Sk cells —

The assay was evaluated by using thiobarbituric acid reactive substances assay according to the slightly
modified method of Chirdchupunseree and Pramyothin.
The cells were seeded at a density of 1× 105 cells/mL in a 6-well plate for 24 h. After themedium was removed, the cells were added with TSCE-W at various concentrations for 24 h.
The cells were washed twice with 1 mL of cold PBS and then lysed on ice with 300  of 2% SDS for 30 min.
Cell lysate was transferred into a glass tube and adjusted to 1 mL with 2% SDS.
A volume of 3 mL of the reaction mixture contained 950  of the cell lysate, 50 of
4% BHT, 1 mL of 10% phosphotungstic acid, and 1 mL of 0.7% TBA. The mixture was mixed and heated at 100  for 1 h, cooled and added 4 mL of n-butanol, centrifuged at 3600 rpm for 10 min.
The supernatant was measured by using a spectrofluorometer with an excitation wavelength at 515 nm and an
emission wavelength at 553 nm.
MDA level was calculated from a standard curve of TEP.
The results were expressed as nmol MDA/mg protein.
Protein content was determined by Bradford method26.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดลักษณะพิเศษของ TSCE W บนรุ่น peroxidation ของไขมันในเซลล์ CCD 1064Sk —

วิเคราะห์ถูกประเมินโดยการวิเคราะห์สารปฏิกิริยากรด thiobarbituric ตามเล็กน้อย
ปรับเปลี่ยนวิธีการ Chirdchupunseree และ Pramyothin
เซลล์ถูก seeded ที่ความหนาแน่นของ 1 × 105 เซลล์/มล.ในจาน 6-ดีสำหรับ 24 ชม หลังจากที่ลบออก themedium เซลล์เพิ่มกับ TSCE W ที่ความเข้มข้นต่าง ๆ สำหรับ 24 h.
เซลล์ล้างสองครั้ง ด้วย 1 mL ของ PBS ที่เย็น และ lysed แล้ว บนน้ำแข็งด้วย 300 ของ SDS 2% ใน 30 นาที
lysate เซลล์เป็นหลอดแก้ว และปรับ mL 1 กับ 2% SDS.
 950 ของเซลล์ lysate ประกอบด้วยปริมาตร 3 mL ของผสมปฏิกิริยาของ, 50 of
4% บาท 1 มิลลิลิตรของกรด phosphotungstic 10% และ 1 mL ของ TBA 0.7% ส่วนผสมผสม และความร้อนที่ 100 สำหรับ h 1 เย็น ๆ และเพิ่ม 4 mL ของเอ็นบิวทานอ centrifuged ที่ 3600 rpm สำหรับ 10 นาที
supernatant ถูกวัด โดยใช้ spectrofluorometer ที่มีความยาวคลื่นในการกระตุ้นการที่ 515 nm และ
ปล่อยก๊าซความยาวคลื่นที่ 553 nm
ระดับ MDA ถูกคำนวณจากเส้นโค้งมาตรฐานของ TEP
ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น nmol MDA/mg โปรตีน
โปรตีนถูกกำหนด โดย method26 แบรดฟอร์ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ผลของ tsce-w ในรุ่นของ lipid peroxidation ใน ccd-1064sk เซลล์ -

( จะถูกประเมินโดยใช้ปฏิกิริยาเท่ากับกรดสาร ( ตามวิธีของ chirdchupunseree ดัดแปลงเล็กน้อย

และ pramyothin . เซลล์มีเมล็ดในอัตราความหนาแน่น 1 × 105 เซลล์ / มล. ใน 6-well จานเป็นเวลา 24 ชั่วโมงหลังจากปานกลางคือ เอาออกเซลล์ที่ถูกเพิ่มด้วย tsce-w ที่ความเข้มข้นต่างๆเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
เซลล์ก็ล้างสองครั้ง 1 มิลลิลิตรของ PBS เย็นแล้ว lysed บนน้ำแข็งด้วย 300  2 % SDS 30 นาที
lysate โอนในเซลล์ท่อแก้ว และปรับ 1 ml มี 2 % t .
ปริมาณ 3 มล. ปฏิกิริยาของส่วนผสมที่มีอยู่ 950 ของเซลล์ lysate 50 ของ
4 % บาท 1 มิลลิลิตร ฟอสโฟทังสติกแอซิด 10% ,1 มิลลิลิตร และ 0.7% TBA . ผสมผสมและความร้อนที่ 100  1 H , เย็นและเพิ่ม 4 มิลลิลิตร n-butanol ระดับที่ 3600 รอบต่อนาที , สำหรับการ 10 นาที
น่านวัดโดยใช้ spectrofluorometer กับความตื่นเต้นที่ความยาวคลื่น 515 nm และความยาวคลื่นที่ปล่อย
553 nm . ระดับ
( คำนวณจากเส้นโค้งมาตรฐานของเทพ . ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็น ?

( ต่อมิลลิกรัมโปรตีนโปรตีนถูกกำหนดโดยแบรดฟอร์ด method26 .