DNA Enzymatic Hydrolysis. DNA was f

DNA Enzymatic Hydrolysis.
DNA was first denatured by heating at 95 °C for 5 min and then chilled on ice for 2 min.
After adding 1/10 volume of S1 nuclease buffer (30 mM CH3COONa, pH4.6, 280 mM NaCl, 1 mM ZnSO4) and 600 units of S1 nuclease, the mixture (20 μL) was then incubated at 37 °C for 1 h.
To the solution was subsequently added 1/10 volume of alkaline phosphatase buffer (50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, pH 9.0), 0.02 units of venom phosphodiesterase I, and 30 units of alkaline phosphatase, followed by incubation at 37 °C for an additional 1 h.
The resultant solution was successively extracted by phenol/chloroform (v/v, 1/1) and chloroform once.
The resulting aqueous layer was spun to dryness using SpeedVac and then reconstituted in water for the subsequent analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบ
ดีเอ็นเอก่อน denatured โดยความร้อนที่ 95 ° C สำหรับ 5 นาทีแล้ว แช่ในน้ำแข็ง 2 นาที
หลังจากเพิ่มปริมาณ 1/10 ของบัฟเฟอร์ nuclease S1 (30 มม. CH3COONa, pH4.6, 280 มม. NaCl, 1 mM ZnSO4) และ S1 nuclease 600 หน่วย ผสม (20 μL) ได้แล้ว incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 1 h.
เพื่อแก้ปัญหาในเวลาต่อมาเพิ่มปริมาตร 1/10 ของบัฟเฟอร์อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (50 mM ทริสเรทติ้ง HCl, 10 มม. MgCl2, pH 9.0), พิษ phosphodiesterase 0.02 หน่วยตามฉัน และอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส 30 หน่วย โดยบ่มที่ 37 ° C สำหรับการ h. 1 เพิ่มเติม
ผลแก่โซลูชันติด ๆ กันถูกสกัด ด้วยคลอโรฟอร์มวาง (v/v, 1/1) และคลอโรฟอร์มครั้ง
ชั้นอควีที่ได้ปั่นเพื่อความแห้งกร้านโดยใช้ SpeedVac แล้ว reconstituted ในน้ำสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอเอนไซม์ย่อยสลาย
ดีเอ็นเอเอทิลแอลกอฮอล์ครั้งแรกโดยความร้อนที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีแล้วเย็นบนน้ำแข็งเป็นเวลา 2 นาที
หลังจากที่เพิ่ม 1/10 ปริมาณของบัฟเฟอร์ Nuclease S1 (30 มิลลิ CH3COONa, pH4.6 280 มิลลิโมลา, 1 มิลลิ ZnSO4) และ 600 หน่วยของ S1 Nuclease ผสม (20 ไมโครลิตร) ถูกบ่มแล้วที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ในการแก้ปัญหาที่ถูกเพิ่มเข้ามาในภายหลัง 1/10 ปริมาณของบัฟเฟอร์ด่าง phosphatase (50 มิลลิ Tris-HCl, 10 มิลลิ MgCl2 ค่า pH 9.0) 0.02 หน่วยของพิษ phosphodiesterase ฉัน, และ 30 หน่วยของด่าง phosphatase ตามด้วยการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพิ่มเติม
การแก้ปัญหาผลที่ถูกสกัดอย่างต่อเนื่องโดยฟีนอล / คลอโรฟอร์ม (v / v, 1 / 1) และคลอโรฟอร์มเมื่อ
ชั้นน้ำผลก็หมุนตัวจะแห้งกร้านโดยใช้ SpeedVac แล้วละลายในน้ำสำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอเอนไซม์ .
ดีเอ็นเอเป็นครั้งแรกใช้โดยความร้อนที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีแล้วแช่เย็น น้ำแข็ง 2 นาที
หลังจากเพิ่ม 1 / 10 ปริมาณ S1 นิวเคลียสบัฟเฟอร์ ( 30 มม. ch3coona ph4.6 280 มม. , ขนาด 1 มม. znso4 ) และ 600 หน่วย S1 นิวเคลียส ผสม ( 20 μ L ) แล้ว บ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง
เพื่อแก้ปัญหาต่อมาได้เพิ่ม 1 / 10 ปริมาณอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส บัฟเฟอร์ ( 50 มม. โดย HCl ,ชุด 10 มม. , pH 9.0 ) 0.02 หน่วยของพิษ phosphodiesterase ชั้น และ 30 หน่วยของอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส รองลงมา คือ บ่มที่ 37 ° C เพิ่ม 1 h .
โซลูชั่นดังกล่าวมาสกัดด้วยฟีนอล / คลอโรฟอร์ม ( V / V , 1 / 1 ) และคลอโรฟอร์มครั้ง
ผลน้ำชั้นปั่นแห้งแล้วสามารถทำให้การใช้ในน้ำ สำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง