We report a stable Gaussia lucifera

We report a stable Gaussia luciferase enterovirus 71 (Gluc-EV71) reporter virus to facilitate drug discovery. The Gluc-EV71 reporter virus was generated by engineering the Gaussia luciferase (Gluc) gene between the 5′ untranslated region and VP4 gene of the EV71 genome. We could recover Gluc-EV71 after transfection of Vero cells with the cDNA clone-derived RNA. The reporter virus efficiently infects and replicates in various cell types (Vero, human rhabdomyosarcoma, and HeLa cells), producing robust luciferase activity. The Gluc-EV71 virus replicates slower than the wild-type virus in cell culture. The reporter virus is stable in maintaining the Gluc gene after five rounds of continuous passaging in Vero cells. Using known EV71 inhibitors, we demonstrate that the reporter virus can be used for antiviral testing. However, the Gluc-EV71 infection assay cannot be adapted to a homogenous format for high throughput screen, mainly due to the secreted nature of the Gluc protein and the short half-life of the Gluc luminescence signal. The Gluc-EV71 and its infection assay could be useful for antiviral drug discovery as well as for studying EV71 replication and pathogenesis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรารายงานเสถียรภาพ Gaussia luciferase เอนเทอโรไวรัส 71 (Gluc EV71) โปรแกรมรายงานไวรัสเพื่อค้นหายาเสพติด ไวรัสโปรแกรมรายงาน Gluc EV71 ถูกสร้างขึ้น โดยยีน luciferase (Gluc) Gaussia ระหว่างภูมิภาค untranslated 5′ และยีน VP4 ของจีโนม EV71 วิศวกรรม เราสามารถกู้คืน Gluc-EV71 หลัง transfection ของเซลล์ Vero กับอาร์เอ็นเอ cDNA โคลนมา ไวรัสโปรแกรมรายงานติด และเหมือนกับในเซลล์ต่าง ๆ (Vero, rhabdomyosarcoma มนุษย์ และเซลล์ HeLa), ผลิตกิจกรรม luciferase ที่แข็งแกร่ง ไวรัส Gluc-EV71 เหมือนกับช้ากว่าไวรัสชนิดป่าในงานเพาะเลี้ยงเซลล์ ไวรัสโปรแกรมรายงานมีเสถียรภาพในการรักษายีน Gluc หลังจากรอบที่ห้าของ passaging อย่างต่อเนื่องในเซลล์ Vero เราใช้รู้จัก EV71 inhibitors แสดงว่า ไวรัสโปรแกรมรายงานสามารถใช้สำหรับการทดสอบยาต้านไวรัส อย่างไรก็ตาม วิเคราะห์เชื้อ Gluc EV71 ไม่สามารถปรับรูปแบบให้สำหรับจออัตราความเร็วสูง ส่วนใหญ่เนื่องจากธรรมชาติของโปรตีน Gluc secreted และ half-life สั้นสัญญาณ luminescence Gluc Gluc-EV71 และทดสอบการติดเชื้ออาจมีประโยชน์สำหรับการค้นพบยาต้านไวรัสเช่นสำหรับศึกษา EV71 จำลองและพยาธิกำเนิด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรารายงานที่มีเสถียรภาพ Gaussia luciferase enterovirus 71 (Gluc-EV71) ไวรัสนักข่าวเพื่อความสะดวกในการค้นพบยาเสพติด ไวรัสนักข่าว Gluc-EV71 ถูกสร้างขึ้นโดยวิศวกรรม luciferase Gaussia (Gluc) ยีนระหว่างภูมิภาค 5 'ไม่ได้แปลและยีน VP4 ของจีโนม EV71 เราสามารถกู้คืน Gluc-EV71 หลังจาก transfection ของเซลล์เวโรกับยีน RNA โคลนที่ได้มาจาก ไวรัสนักข่าวได้อย่างมีประสิทธิภาพและการติดเชื้อซ้ำในเซลล์ชนิดต่างๆ (เวโร, rhabdomyosarcoma มนุษย์และเซลล์ HeLa), การผลิตกิจกรรม luciferase ที่แข็งแกร่ง ไวรัส Gluc-EV71 ซ้ำช้ากว่าไวรัสชนิดป่าในเซลล์เพาะเลี้ยง ไวรัสนักข่าวมีเสถียรภาพในการรักษายีน Gluc หลังจากห้ารอบ passaging อย่างต่อเนื่องในเซลล์เวโร ที่รู้จักกันในการใช้สารยับยั้ง EV71 เราแสดงให้เห็นว่าไวรัสนักข่าวสามารถนำมาใช้สำหรับการทดสอบต้านไวรัส อย่างไรก็ตามการทดสอบการติดเชื้อ EV71-Gluc ไม่สามารถปรับให้เข้ากับรูปแบบที่เป็นเนื้อเดียวกันสำหรับหน้าจอที่ผ่านสูงส่วนใหญ่เนื่องจากลักษณะของการหลั่งโปรตีน Gluc และครึ่งชีวิตสั้น ๆ ของสัญญาณแสงเรือง Gluc Gluc-EV71 และทดสอบการติดเชื้อที่อาจจะมีประโยชน์สำหรับการค้นพบยาต้านไวรัสเช่นเดียวกับการศึกษาและการจำลองแบบ EV71 การเกิดโรค

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เรารายงาน gaussia เอนเทอโรไวรัส 71 มีเอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( gluc-ev71 ) นักข่าวไวรัสเพื่ออำนวยความสะดวกในการค้นพบยา การ gluc-ev71 นักข่าวไวรัสถูกสร้างขึ้นโดยวิศวกรรม gaussia เอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( gluc ) ยีนระหว่าง 5 ภูมิภาค และได้รับการแปล vp4 ยีนของ ev71 จีโนม . เราสามารถกู้คืน gluc-ev71 หลังจาก transfection ของเวโรเซลล์กับ cDNA โคลนได้ RNAรายงานไวรัสติดเชื้อในเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และซ้ำชนิดต่างๆ ( Vero , มนุษย์ rhabdomyosarcoma และ Hela เซลล์ ) , การผลิตกิจกรรมเอนไซม์ลูซิเฟอเรสที่แข็งแกร่ง การ gluc-ev71 ไวรัส replicates ช้ากว่าของไวรัสในเซลล์เพาะเลี้ยง รายงานไวรัสมีเสถียรภาพในการรักษา gluc ยีนหลังจากห้ารอบของ passaging อย่างต่อเนื่องในเวโรเซลล์ การใช้ยาที่รู้จักกัน ev71 ,เราแสดงให้เห็นว่านักข่าวไวรัสสามารถใช้สำหรับการทดสอบต่างๆ อย่างไรก็ตาม gluc-ev71 การติดเชื้อ ( ไม่สามารถปรับให้เป็นเนื้อเดียวกันสำหรับรูปแบบหน้าจอ throughput สูง ส่วนใหญ่เนื่องจากการหลั่งธรรมชาติของ gluc โปรตีนและค่าครึ่งชีวิตสั้นของ gluc เรืองแสงสัญญาณการ gluc-ev71 และการติดเชื้อโดยอาจจะมีประโยชน์สำหรับการค้นพบยาเสพติดต้านไวรัส ตลอดจนศึกษาและการเกิด ev71 .