2.5. MUG assay with filtered River

2.5. MUG assay with filtered River water
River Thames water was sampled at random time points and
transported to the lab, allowing particles to sediment for 30 min
at roomtemperature. Samples were removed by decanting and
then analysed for the presence of E. coli by three different
methods and the results compared. Water samples were
directly (without processing or concentration) assayed with
MUG substrate and the fluorescence measured after 30 min
using the hand-held fluorimeter. Sampleswere also filtered and
theneither cultivatedonselectivemedia or incubatedwithMUG
followed by analysis in a bench-top fluorimeter.
The following assay is essentially a MUG-based enzymatic
assay using locally optimised laboratory conditions. A 100 mL
sample of the collected river water was filtered as described
above and the filter was placed into a sterile 250 mL conical
flask containing 10 mLphosphate buffered saline (PBS, 136 mM
NaCl, 3 mM KCl, 8 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH 6.8) containing
10 mM 4-methylumbelliferone-glucuronide (MUG, Calbiochem,
Nottingham, UK). Four filtrations were carried out for
each collected river water sample, with three filters being
assayed with MUG and one being placed in a control flask
containing 10 mL PBS without MUG. One more flask was set up
withPBS/MUGas a control without adding a filter. All five flasks
were incubated with shaking at 37 Cfor 30 min.A5 mLsample
was removed from each flask and immediately mixed with
500 ml of 1 M NaOH to stop the reaction and bring the pH to 10.
Triplicates of 150 ml of each sample were transferred into the
wells of a black 96-well plate and the fluorescence (excitation
wavelength 355 nm, emission wavelength 450 nm) measured
with the FLUOstar OPTIMA plate reader. A reference curve was
recorded with 4-methylumbelliferone (4MU) diluted in PBS,
NaOHadded and transferred in triplicate in black 96-well plate.
Control experiments were performed where preparations of
b-D-glucuronidase in PBS were added to the substrate in PBS
solution. The reaction volume was 1 mL, incubation carried
out at 37 C for 30 min and 100 ml 1 M NaOH added to increase
the pH and stop the reaction. Triplicate samples were
analysed as described above. The data of all experiments were
analysed with the instruments analysis software MARS (BMG
Labtech).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 MUG วิเคราะห์น้ำน้ำกรองแม่น้ำเทมส์น้ำความสุ่มจุดเวลา และส่งตรวจ ให้อนุภาคกับตะกอนใน 30 นาทีที่ roomtemperature ตัวอย่างถูกเอาออก โดย decanting และanalysed สำหรับของ E. coli โดยที่สามแตกต่างกันวิธีการและผลการเปรียบเทียบ ตัวอย่างน้ำได้โดยตรง (โดยไม่ต้องประมวลผลหรือความเข้มข้น) assayed ด้วยพื้นผิว MUG และ fluorescence ที่วัดหลังจาก 30 นาทีใช้ fluorimeter มือถือ Sampleswere ยัง กรอง และtheneither cultivatedonselectivemedia หรือ incubatedwithMUGตาม ด้วยการวิเคราะห์ใน fluorimeter บนม้านั่งวิเคราะห์ต่อไปนี้เป็นหลักการ MUG ใช้เอนไซม์ในระบบassay โดยใช้ห้องปฏิบัติการบวมภายในเงื่อนไข 100 มลตัวอย่างน้ำเก็บน้ำถูกกรองตามที่อธิบายไว้ด้านบน และตัวที่อยู่ในกระบอก 250 mL ทรงกรวยหนาวประกอบด้วย 10 mLphosphate buffered น้ำเกลือ (PBS, 136 มม.ประกอบด้วย NaCl, 3 mM KCl, Na2HPO4, KH2PO4, 1.5 มม. 8 มม. pH 6.8)10 mM 4-methylumbelliferone-glucuronide (MUG, Calbiochemน็อตติงแฮม สหราชอาณาจักร) Filtrations 4 ได้ดำเนินการแต่ละเก็บน้ำแม่น้ำเป็นตัวกรองตัวอย่าง กับสามassayed MUG และหนึ่งถูกวางในหนาวควบคุมประกอบด้วย 10 mL PBS โดย MUG หนาวอย่างหนึ่งถูกติดตั้งwithPBS/MUGas ตัวควบคุมโดยไม่ต้องเพิ่มตัวกรอง นำทั้งหมด 5มี incubated ด้วยการสั่นที่ 37 Cfor นาที A5 mLsampleถูกเอาออกจากแต่ละหนาว และทันทีผสมกับขนาด 500 มล.ของ 1 M NaOH เพื่อหยุดปฏิกิริยา และให้ pH 10Triplicates 150 ml ของแต่ละอย่างได้ถูกโอนย้ายไปบ่อดี 96 จานดำและ fluorescence (ในการกระตุ้นnm ความยาวคลื่น 355 ปล่อยก๊าซความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร) วัดมีเครื่องอ่านแผ่นพติ FLUOstar อ้างอิงเส้นโค้งได้บันทึกไว้ ด้วย 4-methylumbelliferone (4MU) ผสมใน PBSNaOHadded และโอนย้ายใน triplicate ในจานดี 96 สีดำดำเนินการทดลองควบคุมที่เตรียมของb-D-glucuronidase ใน PBS เพิ่มพื้นผิวใน PBSการแก้ปัญหา ปริมาณปฏิกิริยา 1 mL คณะทันตแพทยศาสตร์ดำเนินการออกที่ 37 C 30 นาทีและ 100 มล 1 M NaOH เพิ่มเพื่อเพิ่มpH และหยุดปฏิกิริยา มีตัวอย่าง triplicateanalysed ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น มีข้อมูลการทดลองทั้งหมดanalysed กับเครื่องมือวิเคราะห์ซอฟต์แวร์ดาวอังคาร (BMGLabtech)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ทดสอบกับแก้วกรองน้ำแม่น้ำน้ำแม่น้ำเทมส์เป็นตัวอย่างที่จุดเวลาสุ่มและเคลื่อนย้ายไปยังห้องปฏิบัติการที่ช่วยให้อนุภาคตะกอนเป็นเวลา30 นาทีที่roomtemperature ตัวอย่างที่ถูกถอดออกจาก decanting และวิเคราะห์การปรากฏตัวของเชื้อE. coli โดยสามที่แตกต่างกันวิธีการและผลลัพธ์ที่ได้เมื่อเทียบกับ ตัวอย่างน้ำได้โดยตรง (โดยไม่ต้องประมวลผลหรือความเข้มข้น) assayed ที่มีพื้นผิวแก้วและวัดเรืองแสงหลังจาก30 นาทีโดยใช้fluorimeter มือถือ Sampleswere ยังกรองและtheneither cultivatedonselectivemedia หรือ incubatedwithMUG ตามด้วยการวิเคราะห์ใน fluorimeter ม้านั่งบน. การวิเคราะห์ต่อไปนี้เป็นหลักแก้วที่ใช้เอนไซม์ทดสอบที่ดีที่สุดในประเทศโดยใช้ห้องปฏิบัติการ 100 มิลลิลิตรตัวอย่างของน้ำในแม่น้ำที่เก็บรวบรวมได้ถูกกรองตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและตัวกรองที่ถูกนำมาวางเป็นหมัน250 มิลลิลิตรกรวยขวดมี10 mLphosphate บัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส 136 มิลลิโซเดียมคลอไรด์3 มิลลิ KCl, 8 มิลลิ Na2HPO4 1.5 มิลลิ KH2PO4, ค่า pH 6.8) ที่มี10 มิลลิ 4 methylumbelliferone-glucuronide (แก้ว, Calbiochem, น็อตติงแฮมสหราชอาณาจักร) สี่ filtrations ได้ดำเนินการสำหรับแต่ละแม่น้ำตัวอย่างน้ำที่เก็บสามกรองถูกassayed กับแก้วและหนึ่งถูกวางไว้ในขวดการควบคุมที่มีพีบีเอส10 มิลลิลิตรโดยไม่ต้อง MUG ขวดอีกหนึ่งถูกจัดตั้งขึ้นwithPBS / MUGas ควบคุมโดยไม่ต้องเพิ่มตัวกรอง ทั้งห้าขวดถูกบ่มด้วยการเขย่าที่ 37? 30 Cfor min.A5 mLsample ถูกลบออกจากแต่ละขวดและผสมทันทีด้วย500 มล. 1 M NaOH จะหยุดปฏิกิริยาและนำค่า pH ถึง 10 Triplicates 150 มล. ของแต่ละกลุ่มตัวอย่างเป็น ย้ายไปอยู่หลุมดำ96 แผ่นดีและเรืองแสง (กระตุ้นความยาวคลื่น355 นาโนเมตรความยาวคลื่น 450 นาโนเมตรปล่อยก๊าซเรือนกระจก) วัดกับผู้อ่านแผ่นFLUOstar OPTIMA เส้นโค้งการอ้างอิงที่ถูกบันทึกด้วย 4 methylumbelliferone (4MU) เจือจางในพีบีเอส NaOHadded และโอนในเพิ่มขึ้นสามเท่าในสีดำ 96 แผ่นกัน. การทดลองควบคุมที่ได้ดำเนินการเตรียมการของBD-glucuronidase ในพีบีเอสถูกเพิ่มเข้าไปในพื้นผิวพีบีเอสการแก้ปัญหา ปริมาณปฏิกิริยาถูก 1 มิลลิลิตรบ่มดำเนินการออกมาที่37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีและ 100 มล. 1 M NaOH เพิ่มเพื่อเพิ่มความเป็นกรดด่างและหยุดปฏิกิริยา ตัวอย่างเพิ่มขึ้นสามเท่าได้รับการวิเคราะห์ที่อธิบายข้างต้น ข้อมูลจากการทดลองทั้งหมดถูกวิเคราะห์ด้วย MARS ซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ตราสาร (BMG Labtech)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 เหยือกกรองน้ำใช้กับแม่น้ำ
แม่น้ำเทมส์น้ำตัวอย่างสุ่มเวลาและ
ส่งไป Lab ช่วยให้อนุภาคตะกอน 30 นาที
ที่อุณหภูมิห้อง . ตัวอย่างถูกกำจัดโดย รินและ
แล้ววิเคราะห์สถานะของ E . coli โดยสามวิธีที่แตกต่างกัน
และผลเปรียบเทียบ ตัวอย่างน้ำ
โดยตรง ( โดยไม่มีการประมวลผลหรือความเข้มข้นของเอนไซม์ด้วย
)วัสดุแก้วและการวัดหลังจาก 30 นาที
ใช้ fluorimeter มือถือ คนยังกรองและ
theneither cultivatedonselectivemedia หรือ incubatedwithmug
ตามด้วยการวิเคราะห์ในด้านบนม้านั่ง fluorimeter .
( ต่อไปนี้เป็นหลักโดยใช้เอนไซม์ในแก้ว
- ปฏิบัติการภายในเงื่อนไข
100 มล.ตัวอย่างของการเก็บน้ำถูกกรองตามที่อธิบายไว้ข้างต้นและกรอง
ถูกวางไว้ให้เป็นหมัน 250 ml ขวดกรวย
บรรจุ 10 mlphosphate ในน้ำเกลือ ( PBS 136 mm 3 mm
NaCl KCl 8 มม. na2hpo4 1.5 มม. kh2po4 pH 6.8 ) ที่มี 4-methylumbelliferone-glucuronide
10 มม. ( แก้ว calbiochem
, , น็อตติงแฮม , อังกฤษ ) สี่ filtrations ทดลองสำหรับ
แต่ละเก็บน้ำตัวอย่างกับสามตัวกรองถูก
assayed กับแก้วและหนึ่งถูกวางไว้ในขวดบรรจุ 10 ml ควบคุม
PBS โดยแก้ว . อีกหนึ่งขวด ตั้ง
withpbs / mugas การควบคุมโดยไม่ต้องเพิ่มตัวกรอง ทั้งหมด 5 ขวด
ถูกบ่มเขย่า ที่ 37  C เป็นเวลา 30 min.a5 mlsample
ถูกลบออกจากแต่ละขวดทันที 500 มิลลิลิตรผสมกับ
1 M NaOH เพื่อหยุดปฏิกิริยาและนำ pH 10
ล้อมของ 150 ml ของแต่ละตัวอย่างถูกโอนเข้าสู่
บ่อสีดำ 96 ดีจานและเรืองแสง ( i
ความยาวคลื่น 355 nm ความยาวคลื่น ที่ปล่อย 450 nm ) วัด
กับ fluostar Optima แผ่นอ่าน การอ้างอิงบันทึกด้วยเส้นโค้งถูก
4-methylumbelliferone ( 4mu ) เจือจางในพีบีเอส
naohadded และโอนทั้งสามใบสีดำ 96
ดีจานการทดลองควบคุมมีการปฏิบัติที่เตรียม
b-d-glucuronidase ใน PBS ถูกเพิ่มไปยังพื้นผิวใน PBS
โซลูชั่น ปฏิกิริยาปริมาณ 1 ml บ่มที่ 37 พก
 C นาน 30 นาทีและ 100 ml 1 M NaOH เพิ่มเพื่อเพิ่ม
pH และหยุดปฏิกิริยา ตัวอย่างทำสำเนาสามฉบับถูก
วิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ข้อมูลทั้งหมดของการทดลอง
วิเคราะห์ด้วยเครื่องมือวิเคราะห์ซอฟแวร์ดาวอังคาร ( BMG
labtech )