Initially DNA fragments are 32p end

Initially DNA fragments are 32p end labeled after which guanine and adenine nucleotides are methylated by treatment with dimethyl sulfate. Treatment with this chemical generally results in 1 modified base per DNA molecule (1). Next the protein of interested is incubated with the methylated DNA fragment. If the DNA is modified at nucleotides that are involved in protein binding, the protein will be unable to bind to the DNA. However, if methylation has occurred at nucleotides that are not important to protein binding, the protein will be able to bind to the DNA (1). DNA fragments that are bound by protein and those that are not bound by protein can be separated via electrophoretic mobility shift assay. Other common techniques used to separate bound and unbound DNA fragments include filter binding and immunoprecipitation (1). Next the DNA molecules are treated with an enzyme, such as piperidine, which will cleave the DNA molecules into smaller fragments. Piperidine cleaves DNA at modified bases. Finally the fragments are run on a denaturing gel along with a sequencing ladder. Because each DNA molecule is only methylated at a single position the sequencing ladder can be used to determine which nucleotide had been modified. Cleavage fragments that are generated from unbound DNA will differ from the fragments generated from DNA that was bound by protein. Thus the fragments generated from bound or unbound DNA can be used to determine the nucleotides that are important in protein binding.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เริ่มต้นชิ้นส่วนดีเอ็นเอมี 32p สิ้นชื่อหลังจาก methylated guanine และคือนิวคลีโอไทด์ โดยการรักษากับ dimethyl ซัลเฟต การรักษา ด้วยสารเคมีโดยทั่วไปผลใน 1 ปรับฐานต่อโมเลกุลดีเอ็นเอ (1) ต่อ โปรตีนของสนใจเป็นมบ่มเลี้ยง ด้วยส่วนดีเอ็นเอ methylated ถ้ามีการปรับเปลี่ยนดีเอ็นเอในนิวคลีโอไทด์ที่มีส่วนเกี่ยวข้องในโปรตีน โปรตีนจะไม่สามารถผูกเข้ากับดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตาม ถ้าเกิดปรับที่นิวคลีโอไทด์ที่ไม่สำคัญกับโปรตีน โปรตีนจะสามารถผูกเข้ากับดีเอ็นเอ (1) สามารถแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ถูกผูกไว้ โดยโปรตีนและที่ไม่ได้ผูกมัด โดยโปรตีน ผ่านทดสอบกะเคลื่อน electrophoretic เทคนิคอื่น ๆ ทั่วไปที่ใช้ในการแยกชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกผูก และรวมรวมตัวกรองและ immunoprecipitation จึง (1) ถัดไป รับการรักษาโมเลกุลดีเอ็นเอ ด้วยเอนไซม์ เช่น piperidine ซึ่งจะกระจายโมเลกุลดีเอ็นเอที่เป็นชิ้นส่วนขนาดเล็ก Piperidine แข็งกระด้างดีเอ็นเอที่ปรับฐาน สุดท้าย ส่วนกำลังเรียกใช้บนเจ denaturing พร้อมบันไดลำดับ เนื่องจากแต่ละโมเลกุลของดีเอ็นเอเป็น methylated เฉพาะตำแหน่งเดียวที่ บันไดลำดับสามารถใช้เพื่อกำหนดว่ามีการปรับเปลี่ยนนิวคลีโอไทด์ที่ บางส่วนของความแตกแยกที่สร้างขึ้นจากดีเอ็นเอที่ไม่ถูกผูกไว้จะแตกต่างจากชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นจากดีเอ็นเอที่ถูกผูกพัน โดยโปรตีน จึง สามารถใช้ชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นจากดีเอ็นเอที่ถูกผูก หรือไม่ผูกกำหนดนิวคลีโอไทด์ที่สำคัญในโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในขั้นต้นดีเอ็นเอจะ 32P end ที่มีป้ายกำกับหลังจากที่ guanine และ adenine นิวคลีโอจะ methylated โดยการรักษาด้วย dimethyl ซัลเฟต การรักษาด้วยสารเคมีนี้ผลโดยทั่วไปใน 1 ฐานการแก้ไขต่อโมเลกุลดีเอ็นเอ (1) ถัดไปของโปรตีนที่สนใจจะบ่มกับชิ้นดีเอ็นเอแอลกอฮอล์ หากดีเอ็นเอมีการแก้ไขที่นิวคลีโอที่มีส่วนร่วมในโปรตีนที่มีผลผูกพันโปรตีนจะไม่สามารถเชื่อมโยงกับดีเอ็นเอ แต่ถ้า methylation ได้เกิดขึ้นที่นิวคลีโอที่ไม่ได้เป็นสิ่งสำคัญที่จะมีผลผูกพันโปรตีนโปรตีนจะสามารถที่จะผูกกับดีเอ็นเอ (1) ดีเอ็นเอที่ถูกผูกไว้โดยโปรตีนและผู้ที่จะไม่ผูกพันตามโปรตีนสามารถแยกผ่านการเคลื่อนไหว electrophoretic กะทดสอบ เทคนิคทั่วไปอื่น ๆ ที่ใช้ในการแยกถูกผูกไว้และไม่ได้ผูกดีเอ็นเอรวมถึงการกรองผูกพันและ immunoprecipitation (1) ถัดไปโมเลกุลดีเอ็นเอรับการรักษาด้วยเอนไซม์เช่น piperidine ซึ่งจะแล่งโมเลกุลดีเอ็นเอเป็นเศษขนาดเล็ก แข็งกระด้าง piperidine ดีเอ็นเอที่ฐานการแก้ไข ในที่สุดชิ้นส่วนที่มีการทำงานในขั้นเปลี่ยนเจลพร้อมกับบันไดลำดับ เพราะแต่ละดีเอ็นเอโมเลกุล methylated เพียงตำแหน่งเดียวบันไดลำดับสามารถนำมาใช้เพื่อตรวจสอบว่าเบื่อหน่ายได้รับการแก้ไข เศษความแตกแยกที่เกิดจากดีเอ็นเอไม่ได้ผูกไว้จะแตกต่างจากชิ้นส่วนที่เกิดจากดีเอ็นเอที่ถูกพันธนาการด้วยโปรตีน ดังนั้นชิ้นส่วนที่เกิดจากดีเอ็นเอที่ถูกผูกไว้หรือไม่ได้ผูกไว้สามารถนำมาใช้ในการกำหนดนิวคลีโอที่มีความสำคัญในโปรตีนที่มีผลผูกพัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตอนแรก 32p ดีเอ็นเอเป็นสิ้นสุดข้อความหลังจากที่เสียงกรอบแกรบคำชี้แจงเป็น methylated และโดยการรักษากับไดเมทิลซัลเฟต การรักษาด้วยสารเคมีนี้มักผลใน 1 ปรับฐานต่อโมเลกุลดีเอ็นเอ ( 1 ) หน้าสนใจคือโปรตีนที่บ่มกับชิ้นส่วนดีเอ็นเอ methylated . ถ้า ดีเอ็นเอ มีการแก้ไขที่สำคัญที่เกี่ยวข้องกับโปรตีน ซึ่งโปรตีนจะไม่สามารถจับกับ DNA อย่างไรก็ตาม ถ้าร่างกายได้เกิดขึ้นที่สำคัญที่ไม่ได้สำคัญกับโปรตีน , โปรตีนจะสามารถจับกับดีเอ็นเอ ( 1 ) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ถูกผูกไว้โดยมีโปรตีนและผู้ที่ไม่ได้ผูกติดกับโปรตีนสามารถแยกออกจากกันผ่านยูไนเต็ดเปลี่ยนการทดสอบ เทคนิคอื่น ๆทั่วไปที่ใช้เพื่อแยกมัดและจับกับดีเอ็นเอรวมถึงตัวกรอง และ immunoprecipitation ( 1 ) ต่อไปจะได้รับการรักษาด้วยเอนไซม์ดีเอ็นเอโมเลกุล เช่น ไพเพอริดีน ซึ่งจะแยกเป็นชิ้นส่วนดีเอ็นเอของโมเลกุลเล็กลง ไพเพอริดีนคลีฟส์ ดีเอ็นเอ ที่ ฐาน แก้ไข ในที่สุดเศษวิ่งบนี่เจลพร้อมกับลำดับของบันได เพราะแต่ละโมเลกุลดีเอ็นเอเพียงตำแหน่งเดียว methylated ที่บันไดสามารถใช้เพื่อกำหนดลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ได้แก้ไข ชิ้นส่วนที่ถูกสร้างขึ้นจากการจับกับดีเอ็นเอจะแตกต่างจากชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นจากดีเอ็นเอที่ถูกผูกไว้โดยโปรตีน ดังนั้นชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นจาก ผูกพัน หรือจับกับดีเอ็นเอสามารถใช้เพื่อตรวจสอบไวรัสที่สำคัญในโปรตีน .