Step 1. Prepare a slide with the cu

Step 1. Prepare a slide with the culture by transferring the specimen to be examined onto a drop of suspension medium (distilled water) using an inoculation loop. Spread the specimen on the slide to ensure that it is not clumped.
Step 2. Fix the culture by heating the slide over a Bunsen burner to evaporate the water -- make sure not to hold the slide over the flame too long or it will denature the specimen.
Step 3. Drop a few drops of crystal violet stain onto the fixed culture (enough to cover the specimen) and let it stand for 20 seconds. Then pour off the crystal violet stain and gently rinse the excess stain with distilled water.
The objective of this step is:
To allow the crystal violet stain to bind to the peptidoglycan molecules of the Gram + bacteria (if present). Remember, Gram + bacteria have a large peptidoglycan layer located outside the bacterial "inner membrane".
To allow the crystal violet stain to bind to the lipopolysaccharide molecules attached to the "outer membrane" of the Gram - bacteria (if present). Remember, while Gram + bacteria have no "outer membrane", Gram - bacteria have lipopolysaccharide molecules attached to their bacterial "outer membrane".
Step 4. Drop a few drops of iodine solution on the smear and let it stand for 20 seconds. Then pour off the iodine solution and rinse the slide with distilled water.
The objective of this step is to fix the crystal violet to the peptidoglycan molecules on the Gram + bacteria.
Step 5. Drop a few drops of decolorizer (acetone or ethanol) and let the solution trickle down off the slide until the decolorizer has removed enough of the color to drip off clear. Then IMMEDIATELY rinse the slide off with distilled water after 5 seconds. Note that pouring too much decolorier will cause the decolorization of the Gram + bacterial cells (in addition to the Gram - bacteria), and the purpose of staining will be defeated.
The objective of this step is to dissolve the lipopolysaccharide membraine in the Gram - bacteria and expose the thin peptidoglycan layer below.
Step 6. Drop a few drops of basic counterstain (fuchsin or safranin) on the slide and let it sit for 20 seconds, then wash off the solution with distilled water.
The objective of this step is to stain the peptidoglycan layer of the Gram - bacteria a pink / red color. Remember that the addition of iodine to the crystal violet in Step 4 binds the crystal violet stain in the Gram + bacteria, so the counterstain is unable to bind to the peptidoglycan wall in the Gram + bacteria in the specimen.
Step 7. Observe the slide under light microscopy.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนที่ 1 เตรียมภาพนิ่งกับวัฒนธรรม โดยการถ่ายโอนสิ่งส่งตรวจจะถูกตรวจสอบบนหยดกลางระงับ (น้ำกลั่น) โดยใช้การวน inoculation กระจายตัวอย่างบนภาพนิ่งเพื่อให้แน่ใจว่า มันจะไม่ clumpedขั้นตอนที่ 2 แก้ไขวัฒนธรรม ด้วยความร้อนภาพนิ่งผ่านเครื่องเขียนบุนเซนเพื่อระเหยน้ำ - จะเก็บภาพนิ่งผ่านเปลวไฟยาวเกินไป หรือมันจะ denature สิ่งส่งตรวจขั้นตอนที่ 3 ปล่อยหยดของคริสตัลไวโอเลตคราบบนวัฒนธรรมถาวร (พอที่จะครอบคลุมในสิ่งส่งตรวจ) และปล่อยให้มันยืน 20 วินาที แล้ว เทออกคราบคริสตัลไวโอเลต และเบา ๆ ล้างคราบส่วนเกิน ด้วยน้ำกลั่นวัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือ:เพื่อให้คราบคริสตัลไวโอเลตเพื่อผูกกับโมเลกุลเปบทิโดไกลแคนกรัม +แบคทีเรีย (ถ้ามี) จำ กรัม + แบคทีเรียมีชั้นเปบทิโดไกลแคนขนาดใหญ่ตั้งอยู่นอกแบคทีเรีย "ภายในเมมเบรน"ให้คราบคริสตัลไวโอเลตเพื่อผูกกับโมเลกุล lipopolysaccharide แนบ "เยื่อนอก" ของกรัม - แบคทีเรีย (ถ้ามี) จำได้ ในขณะที่กรัม + แบคทีเรียได้ไม่ "นอกเยื่อ" กรัม - แบคทีเรียมีโมเลกุล lipopolysaccharide กับแบคทีเรียของ "เยื่อหุ้มภายนอก"ขั้นตอนที่ 4 ปล่อยหยดของไอโอดีนในแบบเลอะเปื้อน และปล่อยให้มันยืน 20 วินาที แล้วเทออกจากโซลูชันไอโอดีน และล้างสไลด์ ด้วยน้ำกลั่นวัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้จะแก้ไขม่วงคริสตัลให้โมเลกุลเปบทิโดไกลแคนกรัม +แบคทีเรียขั้นตอนที่ 5 ปล่อยหยดของ decolorizer (อะซิโตนหรือเอทานอล) และให้โซลูชันที่ไหลลงออกจากภาพนิ่งจน decolorizer ที่ได้เอาสีหยดปิดชัดเจนเพียงพอ แล้ว ทันทีล้างภาพนิ่งออก ด้วยน้ำกลั่นหลังจาก 5 วินาที ทราบว่า เท decolorier มากเกินไปจะทำให้การบำบัดกรัม +เซลล์แบคทีเรีย (นอกจากนี้กรัม - แบคทีเรีย วัตถุประสงค์ของการย้อมสีจะแพ้วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือการ ละลาย membraine lipopolysaccharide ในกรัม - แบคทีเรีย และแสดงเลเยอร์เปบทิโดไกลแคนบางด้านล่างขั้นตอนที่ 6 ปล่อยหยดของ counterstain พื้นฐาน (fuchsin หรือ safranin) บนภาพนิ่ง และปล่อยให้มันนั่ง 20 วินาที แล้วล้างออกจากโซลูชันที่มีกลั่นน้ำวัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้จะติดชั้นเปบทิโดไกลแคนของกรัม - แบคทีเรียสีชมพู / สีแดง จำไว้ว่า การเพิ่มไอโอดีนให้ม่วงคริสตัลใน 4 ขั้นตอน binds คราบคริสตัลไวโอเลตในกรัม + แบคทีเรีย เพื่อ counterstain ที่ไม่ผูกกับกำแพงเปบทิโดไกลแคนในกรัม + แบคทีเรียในตัวอย่างขั้นตอนที่ 7 สังเกตภาพนิ่งภายใต้แสง microscopy

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนที่ 1 เตรียมภาพนิ่งที่มีวัฒนธรรมโดยการโอนชิ้นงานที่จะตรวจสอบไปยังลดลงของกลางระงับ (น้ำกลั่น) โดยใช้ห่วงฉีดวัคซีน การแพร่กระจายของชิ้นงานบนภาพนิ่งเพื่อให้แน่ใจว่ามันจะไม่ clumped.
ขั้นตอนที่ 2 การแก้ไขปัญหาวัฒนธรรมด้วยความร้อนสไลด์กว่าแผดเผาเผาเพื่อระเหยน้ำ - ให้แน่ใจว่าไม่ถือสไลด์เหนือเปลวไฟที่ยาวเกินไปหรือมันจะทำให้ผิดลักษณะเดิม ตัวอย่าง.
ขั้นตอนที่ 3. วางไม่กี่หยดของคราบสีม่วงคริสตัลบนวัฒนธรรมคงที่ (พอที่จะครอบคลุมตัวอย่าง) และปล่อยให้ยืนเป็นเวลา 20 วินาที แล้วเทออกคราบสีม่วงคริสตัลและค่อยๆล้างคราบส่วนเกินด้วยน้ำกลั่น.
วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือเพื่อช่วยให้คราบสีม่วงคริสตัลที่จะผูกกับโมเลกุล peptidoglycan ของแกรม + แบคทีเรีย (ถ้ามี)
โปรดจำไว้ว่าแกรม + แบคทีเรียที่มีชั้น peptidoglycan ขนาดใหญ่ที่ตั้งอยู่นอกแบคทีเรีย "เยื่อหุ้มภายใน".
หากต้องการให้มีคราบสีม่วงคริสตัลที่จะผูกกับโมเลกุล lipopolysaccharide แนบมากับ "เยื่อหุ้มชั้นนอก" ของแกรม - แบคทีเรีย (ถ้ามี) โปรดจำไว้ว่าในขณะที่แกรม + แบคทีเรียไม่มี "เยื่อหุ้มชั้นนอก" แกรม - แบคทีเรียที่มีโมเลกุล lipopolysaccharide แบคทีเรียที่ติดอยู่กับพวกเขา "เยื่อหุ้มชั้นนอก".
ขั้นตอนที่ 4 วางไม่กี่หยดของสารละลายไอโอดีนใน smear และปล่อยให้ยืนสำหรับ 20 วินาที แล้วเทออกแก้ปัญหาไอโอดีนและล้างสไลด์ด้วยน้ำกลั่น.
วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือการแก้ไขคริสตัลสีม่วงไปยังโมเลกุล peptidoglycan ในแกรม + แบคทีเรีย.
5 ขั้นตอนที่วางไม่กี่หยดของ decolorizer (อะซิโตนหรือเอทานอล) และ ให้แก้ปัญหาหยดลงมาจากสไลด์จน decolorizer ได้ลบออกเพียงพอของสีที่จะหยดออกที่ชัดเจน จากนั้นล้างออกทันทีสไลด์ออกด้วยน้ำกลั่นหลังจาก 5 วินาที โปรดทราบว่าเท decolorier มากเกินไปจะทำให้เกิดการลดสีของแกรม + เซลล์แบคทีเรีย (นอกเหนือไปจากแกรม - แบคทีเรีย).
และวัตถุประสงค์ของการย้อมสีจะพ่ายแพ้วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือการละลายlipopolysaccharide membraine ในแกรม - แบคทีเรียและแสดงชั้น peptidoglycan บางด้านล่าง.
6 ขั้นตอนที่วางไม่กี่หยดของ counterstain ระดับล่าง (ฟุหรือ safranin) ในภาพนิ่งและปล่อยให้นั่งเป็นเวลา 20 วินาทีแล้วล้างออกวิธีการแก้ปัญหาด้วยน้ำกลั่น.
วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือ คราบชั้น peptidoglycan ของแกรม - แบคทีเรียสีชมพู / สีแดง โปรดจำไว้ว่าการเพิ่มขึ้นของไอโอดีนกับคริสตัลสีม่วงในขั้นตอนที่ 4 ผูกคราบสีม่วงคริสตัลในแกรม + แบคทีเรียดังนั้น counterstain ไม่สามารถที่จะผูกกับผนัง peptidoglycan ในแกรม + แบคทีเรียในตัวอย่าง.
ขั้นตอนที่ 7. สังเกตสไลด์ ภายใต้กล้องจุลทรรศน์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอนที่ 1 เตรียมสไลด์กับวัฒนธรรม โดยการถ่ายโอนชิ้นงานที่จะตรวจสอบลงบนหยดพักกลาง ( น้ำกลั่น ) โดยใช้เชื้อวง แพร่กระจายตัวอย่างบนสไลด์เพื่อให้แน่ใจว่ามันไม่ได้เป็นโอกาส .
ขั้นตอนที่ 2แก้ไขวัฒนธรรมโดยร้อนเลื่อนผ่านตัวเตาระเหยน้ำ -- ให้แน่ใจว่าไม่ค้างสไลด์ผ่านเปลวไฟยาวเกินไป หรือจะปรับเปลี่ยนโครงสร้างทางโมเลกุลตัวอย่าง .
ขั้นตอนที่ 3 หยาดหยดของคริสตัลสีม่วงคราบบนแก้ไขวัฒนธรรม ( พอที่จะครอบคลุมชิ้นงาน ) และปล่อยให้มันยืนเป็นเวลา 20 วินาทีจากนั้นเทปิดผลึกสีม่วงคราบเบาๆ และล้างคราบส่วนเกิน ด้วยน้ำกลั่น
วัตถุประสงค์ของขั้นตอนนี้คือ :
ให้คริสตัลสีม่วงคราบเพื่อผูกกับเปปติโดไกลแคนโมเลกุลของแบคทีเรียแกรม ( ถ้ามี ) จำ , แกรมแบคทีเรียมีขนาดใหญ่เปปติโดไกลแคนชั้นอยู่ภายนอกแบคทีเรีย
" ชั้นใน "เพื่อให้คริสตัลสีม่วงคราบเพื่อผูกกับโมเลกุลสีดำเข้มแนบกับ " เยื่อหุ้มชั้นนอกของกรัม - แบคทีเรีย ( ถ้ามี ) จำไว้ว่าในขณะที่แบคทีเรียแกรมไม่มี " เยื่อหุ้มชั้นนอก " กรัม - โมเลกุลของแบคทีเรียมีสีดำเข้ม ติดเชื้อ " เยื่อหุ้มชั้นนอก " .
ขั้นตอนที่ 4 วางไม่กี่หยดสารละลายไอโอดีนบนรอยเปื้อนและปล่อยให้มันยืนเป็นเวลา 20 วินาที