Reaction mixtures consisted of 2.5 ml 10X reaction buffer,0.5 ml of 10 mM dNTP mix, 2 mM of primer (Genosys Biotechnologies Inc.,USA),2ml of 25 mM MgCl2,0.5 ml of taq polymerase(Promega ,USA),1 ml genomic DNA and made up to 25 ml with sterile dirtilled water. Athermal cycler (Perkin Elmer Model 2400)was used for amplification. The reaction was sobjected to 45 cycle at 94 for 2 min,36 for 1 min amd 72 for 5 min. A final elongation step of 72 for 5 min was included. The PCR amplification product were visualized by running 10 ml of the reaction mixture on a 1.2% agarose gel,which was then stained with 5 mg/ml ethidium bromide and exmined over UV light. A 1 kb DNA ladder (promega,USA) was used as DNA size markers.
ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 2.5 มล. 10 เท่าบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา, 0.5 มล. 10 มม. ผสม dntp 2 มม. ของไพรเมอร์ (วิทยาการ GeNOsys inc., usa) 2ml จาก 25 มม. MgCl2, 0.5 มิลลิลิตร taq โพลิเมอร์ (Promega, สหรัฐอเมริกา) 1 มิลลิลิตร dna จีโนมและทำให้ได้ถึง 25 มล. กับน้ำ dirtilled ผ่านการฆ่าเชื้อ athermal Cycler (Perkin Elmer รุ่น 2400) ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย ปฏิกิริยาถูก sobjected ถึง 45 รอบที่ 94 เป็นเวลา 2 นาที,36 เป็นเวลา 1 นาที 72 เอเอ็มดีเป็นเวลา 5 นาที เป็นขั้นตอนสุดท้ายของการยืดตัว 72 เป็นเวลา 5 นาทีถูกรวม ผลิตภัณฑ์ขยาย pcr ถูกมองเห็นโดยใช้ 10 มิลลิลิตรผสมปฏิกิริยากับเจล agarose 1.2% ซึ่งได้รับการย้อมสีแล้วกับ 5 mg / ml ethidium โบรไมด์และ exmined กว่าแสงยูวี dna บันได 1 กิโลไบต์ (Promega, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้เป็นเครื่องหมายดีเอ็นเอขนาด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ปฏิกริยาส่วนผสมประกอบด้วย 2.5 มล. 10 x ปฏิกริยา buffer, 0.5 มล. 10 มม. dntp ผสม, 2 ม.ม.ของเชื้อปะทุ( genosys biotechnologies , Inc .,สหรัฐอเมริกา), 2 มล. 25 มม. mgcl 2,0.5 มล. taq polymerase ( promega ,สหรัฐอเมริกา), 1 มล. genomic ดีเอ็นเอและทำให้ได้ถึง 25 มล. dirtilled ฆ่าเชื้อขวดนมด้วยน้ำ. athermal cycler ( Perkin s Family Restaurant , Joint Commission รุ่น 2400 )ได้ถูกใช้สำหรับการขยายสัญญาณเสียง ปฏิกริยาที่เป็น sobjected ถึง 45 รอบที่ 94 สำหรับ 2 นาทีนาที 36 สำหรับ 1 นาที AMD 72 สำหรับ 5 นาทีสุดท้าย elongation ขั้นตอนของ 72 สำหรับ 5 ให้มา ผลิตภัณฑ์ การขยายสัญญาณเสียง pcr อยู่เคียงข้างโดยใช้ 10 มล.ของการผสมผสานกันระหว่างการตอบสนองในเจล agarose 1.2% ซึ่งก็แต้มสีพร้อมด้วย 5 มก./ ML ethidium ไม่น่าทึ่งและ exmined เหนือแสง UV 1 KB ดีเอ็นเอบันได( promega USA )ที่ได้เคยถูกใช้เป็นเครื่องหมายขนาดดีเอ็นเอ
การแปล กรุณารอสักครู่..