2.5. Quantification of PCV2 DNAQuan

2.5. Quantification of PCV2 DNA
Quantification of the PCV2 viral load in serum, lymphoid organs,
lung and excretions was performed by qPCR as previously
described [14]. In brief, viral DNA was extracted using DNA/Viral
NA SV 1.0 kit. The amplification was performed in a reaction mixture
containing 10 ll extracted DNA, 1.5 ll (15 mM) of forward
primer (50
-TggCCCgCAgTATTTCTgATT-30
), 1.5 ll (15 mM) of reverse
primer) (50
-ggggAAAgggTgACgAACTg-30
), 2.0 ll (20 mM) DLHP
probe (50
-FAM-CCAgCAATCA-gACCCCgTTggAATg-TAMRA-30
), 5.0 ll
dNTPs (SphaeroQ), 1.0 ll SuperTaq (SphaeroQ) and 29 ll PCR buffer.
The reactions were performed in a real-time thermocycler with
the following cycling times: 1 cycle at 50 C for 120 s, 1 cycle at
95 C for 600 s, 40 cycles at 95 C for 15 s and at 60 C for 60 s.
To allow comparison of the viral load of different sample types
(serum, tissues, swabs) results of the viral load are expressed as
copies per ll DNA extract. During validation of the PCR, the limit

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. นับจำนวนดีเอ็นเอ PCV2นับจำนวนโหลดไวรัส PCV2 ในซีรั่ม lymphoid อวัยวะปอดและ excretions ทำ โดย qPCR เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย [14] สังเขป ไวรัสดีเอ็นเอที่ถูกแยกโดยใช้ดีเอ็นเอ/เชื้อไวรัสชุด NA SV 1.0 ทำการขยายสัญญาณในส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยดีเอ็นเอจะแยก 10, 1.5 ll (15 มม.) ของไปข้างหน้าสีรองพื้น (50-TggCCCgCAgTATTTCTgATT-30), 1.5 ll (15 มม.) ของย้อนกลับสีรองพื้น) (50-ggggAAAgggTgACgAACTg-30), 2.0 ll (20 มม.) DLHPโพรบ (50-กรุ๊ป-CCAgCAATCA-gACCCCgTTggAATg-TAMRA-30), 5.0 lldNTPs (SphaeroQ), 1.0 ll SuperTaq (SphaeroQ) และบัฟเฟอร์ PCR ll 29ดำเนินการในเครื่อง thermocycler แบบเรียลไทม์ด้วยปฏิกิริยาเวลาขี่จักรยานต่อไป: 1 รอบ 50 c เป็นเวลา 120 วินาที 1 รอบที่C 95 สำหรับ 600 s, 40 รอบที่ 95 C 15 s และ 60 c เป็นเวลา 60 sให้เปรียบเทียบโหลดไวรัสชนิดต่าง ๆ ตัวอย่าง(เซรั่ม เนื้อเยื่อ สวับ) จะแสดงผลของโหลดไวรัสเป็นสำเนาต่อดีเอ็นเอจะแยก ในระหว่างการตรวจสอบของ PCR ขีดจำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ปริมาณ PCV2 ดีเอ็นเอ
ปริมาณของไวรัสโหลด PCV2 ในซีรั่มอวัยวะต่อมน้ำเหลือง
ปอดและขับถ่ายได้ดำเนินการโดย qPCR ไว้ก่อนหน้านี้
อธิบาย [14] ในช่วงสั้น ๆ สารพันธุกรรมของไวรัสถูกสกัดโดยใช้ดีเอ็นเอ / Viral
NA SV 1.0 ชุด ขยายได้ดำเนินการในส่วนผสมปฏิกิริยา
ที่มี 10 LL DNA ที่สกัด 1.5 LL (15 มิลลิเมตร) ไปข้างหน้า
ไพรเมอร์ (50
-TggCCCgCAgTATTTCTgATT-30
) 1.5 LL (15 มิลลิเมตร) กลับ
ไพรเมอร์) (50
-ggggAAAgggTgACgAACTg-30
) 2.0 LL (20 มิลลิเมตร) DLHP
สอบสวน (50
-FAM-CCAgCAATCA-gACCCCgTTggAATg-Tamra-30
) 5.0 LL
dNTPs (SphaeroQ) 1.0 LL SuperTaq (SphaeroQ) และ 29 LL บัฟเฟอร์ PCR.
ปฏิกิริยาถูกดำเนินการในเวลาจริง thermocycler กับ
เวลาที่ขี่จักรยานต่อไปนี้: 1 รอบที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 วินาที, 1 รอบที่?
95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 600 s 40 รอบที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 และ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 s?.
ให้เปรียบเทียบระหว่างไวรัส ภาระของประเภทที่แตกต่างกันตัวอย่าง
(ซีรั่มเนื้อเยื่อ swabs) ผลของการโหลดไวรัสจะแสดงเป็น
ชุดต่อสารสกัดดีเอ็นเอ LL ระหว่างการตรวจสอบของ PCR ขีด จำกัด