The cholesterol removal was perform

The cholesterol removal was performed using procedures described by Wang et al[1]. In brief, freshly prepared MRS broth was supplemented with 0.30% oxigall (Sigma, MO, USA) as a bile salt. Water-soluble cholesterol (polyoxyethylene cholesteryl sebacate) was filter-sterilized and added to the broth at a final concentration of 200 to 300 µg/mL, inoculated with each strain and incubated anaerobically at 37 °C for 20 h. After the incubation period, cells were centrifuged and the remaining cholesterol concentration in the broth was determined using a modified colorimetric method as described by Wang et al[1]. The aliquot (100 µL) were added with 100 µL of KOH (33% w/v) and 200 µL of absolute ethanol, vortexed for 1 min, and heated at 37 °C for 15 min. After cooling, 200 µL of distilled water and 300 µL of hexane were added and vortexed for 1 min. The hexane layer (100 µL) was transferred into a glass tube and evaporated under nitrogen. The residue was immediately dissolved in 200 µL of o-phthalaldehyde reagent. After complete mixing, 50 µL of concentrated sulfuric acid were added and the mixture was vortexed for 1 min. Absorbance was read at 540 nm with ELISA reader (Multiskan EX, Labsystem, Gyeongbuk, Korea) after 10 min. All experiments were replicated twice.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกำจัดไขมันที่ดำเนินการโดยใช้กระบวนอธิบายโดย Wang et al [1] สังเขป ซุปนางลิ้มถูกเสริม ด้วย 0.30% oxigall (ซิก MO สหรัฐอเมริกา) เป็นเกลือน้ำดี ที่ละลายในไขมัน (polyoxyethylene cholesteryl sebacate) ถูก sterilized กรองเพิ่มซุปที่เข้มข้นสุดท้ายของ 200-300 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/mL, inoculated ด้วยต้องใช้ละ และ incubated anaerobically ที่ 37 ° C สำหรับ 20 h หลังจากระยะฟักตัว มี centrifuged เซลล์ และความเข้มข้นไขมันเหลือในซุปถูกกำหนดโดยใช้วิธีเทียบเคียงปรับเปลี่ยนตามที่อธิบายไว้โดย Wang et al [1] มีเพิ่มส่วนลงตัว (100 µL) ด้วย 100 µL ของเกาะ (33% w/v) และ 200 µL ของแอบโซลูทเอทานอล vortexed ใน 1 นาที และความร้อนที่ 37 ° C สำหรับ 15 นาที หลังจากทำความเย็น 200 µL ของน้ำกลั่นและ 300 µL ของเฮกเซนได้เพิ่ม และ vortexed ใน 1 นาที ชั้นเฮกเซน (100 µL) เป็นหลอดแก้ว และหายไปภายใต้ไนโตรเจน สารตกค้างได้ทันทีละลายใน 200 µL ของรีเอเจนต์ o-phthalaldehyde หลังจากผสมเสร็จสมบูรณ์ เพิ่ม 50 µL ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้น และส่วนผสมถูกอ่าน vortexed ใน 1 นาที Absorbance ที่ 540 nm กับ ELISA อ่าน (Multiskan EX, Labsystem, Gyeongbuk เกาหลี) หลังจาก 10 นาที การทดลองทั้งหมดถูกจำลองแบบสอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กำจัดคอเลสเตอรอลที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธีการอธิบายโดย Wang et al, [1] ในช่วงสั้น ๆ ที่ปรุงสดใหม่น้ำซุป MRS ได้รับการเสริมด้วย 0.30% oxigall (Sigma, MO, USA) เป็นเกลือน้ำดี คอเลสเตอรอลที่ละลายในน้ำ (polyoxyethylene Cholesteryl sebacate) ได้รับการกรองผ่านการฆ่าเชื้อและเพิ่มเข้าไปในน้ำซุปที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 200-300 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรเชื้อด้วยแต่ละสายพันธุ์และบ่มแบบไม่ใช้อากาศที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง หลังจากระยะฟักตัวเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยงและความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลที่เหลืออยู่ในน้ำซุปที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการปรับเปลี่ยนสีตามที่อธิบายไว้โดย Wang et al, [1] aliquot (100 ไมโครลิตร) ถูกเพิ่ม 100 ไมโครลิตรของเกาะ (33% w / v) และ 200 ไมโครลิตรของเอทานอลแน่นอนการ vortex เวลา 1 นาทีและน้ำอุ่นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที หลังจากที่ระบายความร้อน 200 ไมโครลิตรของน้ำกลั่นและ 300 ไมโครลิตรของเฮกเซนมีการเพิ่มและการ vortex เวลา 1 นาที ชั้นเฮกเซน (100 ไมโครลิตร) ถูกย้ายลงในหลอดแก้วและระเหยภายใต้ไนโตรเจน ที่เหลือก็เลือนหายไปทันทีใน 200 ไมโครลิตรของสาร o-phthalaldehyde หลังจากผสมสมบูรณ์ 50 ไมโครลิตรของกรดกำมะถันเข้มข้นมีการเพิ่มและส่วนผสมที่ได้รับการ vortex เวลา 1 นาที การดูดกลืนแสงได้อ่านที่ 540 นาโนเมตรกับผู้อ่านวิธี ELISA (Multiskan EX, Labsystem, Gyeongbuk เกาหลี) หลังจาก 10 นาที การทดลองทั้งหมดถูกจำลองแบบเป็นครั้งที่สอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คอเลสเตอรอลการกำจัดโดยใช้ขั้นตอนที่อธิบายโดย Wang et al [ 1 ] ในช่วงสั้น ๆ , เตรียมสดเสริมด้วยอาหารเหลว MRS 0.30 % oxigall ( Sigma , โม , USA ) เป็นเกลือน้ำดี . คอเลสเตอรอลละลายในน้ำ ( พอลีออกซีเอทิลีนคอเล sebacate ) คือ กรอง ฆ่าเชื้อ และเพิ่มน้ำซุปที่ความเข้มข้นสุดท้าย 200 ถึง 300 µกรัม / มิลลิลิตรที่ใส่แต่ละสายพันธุ์และบ่มที่ 37 ° C พ 20 ชั่วโมง หลังจากระยะเวลาที่เซลล์มีความเข้มข้นระดับคอเลสเตอรอล และที่เหลืออยู่ในน้ำซุป ตัดสินใจใช้วิธี Colorimetric ดัดแปลงตามที่อธิบายไว้โดย Wang et al [ 1 ] ในการเทศนา ( 100 µ L ) เพิ่ม 100 µ L ของเกาะ ( 33 % w / v ) และ 200 µลิตรแน่นอน เอทานอล vortexed เป็นเวลา 1 นาทีและความร้อนที่ 37 ° C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากเย็น 200 µ L ของน้ำกลั่นและ 300 µลิตรน้ำเพิ่ม vortexed 1 นาทีชั้นเฮกเซน ( 100 µ L ) ถูกย้ายเข้าไปในท่อแก้วและระเหยภายใต้ไนโตรเจน กากได้ทันทีละลาย 200 µ l o-phthalaldehyde เกิดปฏิกิริยา หลังจากเสร็จสิ้นการผสม50 µ L ของกรดซัลฟิวริกเข้มข้นเพิ่มส่วนผสม vortexed 1 นาที ค่าถูกอ่าน 540 nm ด้วยวิธี ELISA Reader ( multiskan EX labsystem , Gyeongbuk เกาหลี ) หลังจาก 10 นาทีทุกการทดลองซ้ำ 2 ครั้ง