[0101] Summary of Methos -20-307900

[0101] Summary of Methos





-20-



307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-Induced
Target: Human Quantitation Method Spectrofluorimetric quantitation of
cell การเพิ่มจำนวน
กระสายยา: 0.4% DMSO Signif. Criteria Ag.: >50% Increase in การเพิ่มจำนวน
relative to VEGF165 response
Incubation Time/Temp: 2 days @ 37 °C Signif, Criteria Ant.: >50% Inhibition of VEGFiss
induced การเพิ่มจำนวน
Incubation buffer M199 Medium, 10% FBS,
101.1g/mL Heparin, pH7.4
[0102] Results
The results were shown in the following Table5. NGY-1 (รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย) shows antagonistic activity. 1001.tg/mL (final conc.) presents remarkable
5 antagonistic activity (140%).
[0103] Table 5: Summary of AK, DS-SMO, NYG-1 and SMO activities
Cat# Assay Name Batch Spec. Rep. Conc Criteria Ag. Ant. R
tissue Resp
Compound: AK, PT# :1154011 Meta
307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-induced 305353 hum 2 100 >50% ND 12%
hum 2 10 >50% ND 2%
Compound: DS-SMO,PT#:1154009 ng,/mL
307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-induced 305353 hum 2 100 >50% ND 14%
hum 2 10 >50% ND 0%
Compound: NYG-1, PT#:1151625 tg/mL
307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-induced 305353 hum 2 100 >50% ND 140%
hum 2 10 >50% ND 30%
Compound: SMO, PT1154010 nWmL
307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-induced 305353 hum 2 100 >50% ND 14%
hum 2 10 >50% ND 1%
[0104] The result of IC50/EC50 was shown in the following Table 6. The IC50/EC50
value of รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย was calculated at 0.12pM. SU5416 is a
known เอเจนต์ต้าน การสร้างหลอดเลือดใหม่ (antagonist).
10 [0105] Table 6: IC501ECso
Hist Concurrent
Cat# Assay Name Ref. Comp. 1C50/ECso Batch IC50/EC50
307900 Cell การเพิ่มจำนวน, VEGF-induced-Ant SU5416 0.48RM 305353 0.12uM
[0106] From the above, it is demonstrated that the รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย can suppress การเพิ่มจำนวน, activation and การสร้างหลอดเลือดใหม่ of VEGF induced cell in vascular endothelial cells.

15 Example 5
[0107] Anti-tumor activity of the รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย
(A) The รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย suppressed human hepatocarcinoma in the heterograft of nude mouse model.
[0108] Materials
20 NYG-1, รงควัตถุสีแดง from ปาล์มใบเลื่อย (Crystallized รงควัตถุสีแดง prepared in
Example 1)
Carcinoma cell line: Human hepatocarcinoma cell line MHCC-97L (the Liver Cancer Institute of Fudan University (Shang Hai, China))






- 21 -


Heterograft model: Nude mouse [0109] Methods
lx105 of MHC-97L cells (Human hepatocarcinoma cell line) were inoculated
subcutaneously into the right side of the nude mouse. One week later, 0.1mg/kg and 5 1mg/kg of NYG-1 were administered by intraperitoneal injection into the mice.
NYG-1 was injected in the same way one time each week for 3 weeks. Thereafter,
mice were sacrificed at day 25 and solid tumors were extirpated. The size of each
tumor was scaled by the Vernier caliper, after the last treatment of NYF-1 and the tumor
growth curve was drawn. The tumor size was calculated as follows; Scaling the minor 10 and major axis by Vernier caliper, then calculated as (minor axis)2 *major axis/2.
[0110] MHCC-97L cells were incubated in air atmosphere of 5% CO2 at 37°C. The culture medium used was DMEM (GIBCO, USA) supplemented with 10%v/v
heat-inactivated fetal bovine serum and 100IU/mL penicillin G and 10011g/mL
streptomycin.
15 [0111] Results
As shown in Fig.3 (A), in NYG-1 treatment group, tumor growth of the
heterograft mouse model was suppressed in a dose-dependent manner. In particular the group with lmg/mL of NYG-1 suppressed the tumor growth (about 50% of control, P

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สรุป [0101] Methos -20-307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิดเป้าหมาย: Spectrofluorimetric วิธีการวิเคราะห์หาปริมาณมนุษย์การวิเคราะห์หาปริมาณเซลล์การเพิ่มจำนวนกระสายยา: 0.4% DMSO Signif เกณฑ์ Ag: > เพิ่มขึ้น 50% การเพิ่มจำนวนสัมพันธ์กับการตอบสนอง VEGF165คณะทันตแพทยศาสตร์เวลา/อุณหภูมิ: แอท 37 ° C Signif เงื่อนไข Ant. 2 วัน: > 50% ยับยั้ง VEGFissการเพิ่มจำนวนอาจคณะทันตแพทยศาสตร์บัฟเฟอร์ M199 กลาง 10% FBS101.1 g/mL เฮพาริน pH7.4ผลลัพธ์ [0102]ผลลัพธ์ได้แสดงใน Table5 ต่อไปนี้ NGY-1 (รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย) แสดงกิจกรรมต่อต้าน 1001.tg/mL (สุดท้าย conc.) นำเสนอความโดดเด่น5 ต่อต้านกิจกรรม (140%)[0103] ตาราง 5: กิจกรรมสรุป AK, DS SMO, NYG-1 และ SMOแมว # วิเคราะห์ชื่อชุดข้อมูลจำเพาะพนักงาน Conc เกณฑ์ Ag Ant. Rเนื้อเยื่อ Respสารประกอบ: AK, PT #: 1154011 Meta307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิด 305353 ครวญ 2 100 > ND 50% 12%ครวญ 2 10 > 50% ND 2%สารประกอบ: DS-SMO, PT#:1154009 ng, / mL307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิด 305353 ครวญ 2 100 > ND 50% 14%ครวญ 2 10 > ND 50% 0%สารประกอบ: NYG-1, PT#:1151625 tg/mL307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิด 305353 ครวญ 2 100 > 50% ND 140%ครวญ 2 10 > ND 50% 30%สารประกอบ: SMO, PT1154010 nWmL307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF เกิด 305353 ครวญ 2 100 > ND 50% 14%ครวญ 2 10 > 50% ND 1%[0104] ผลของ IC50/EC50 แสดงใน 6 ตารางต่อไปนี้ การที่ IC50 EC50มีคำนวณค่ารงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยที่ 0.12 น. SU5416 เป็นการเอเจนต์ต้านรู้จักการสร้างหลอดเลือดใหม่ (ปฏิปักษ์)10 [0105] ตาราง 6: IC501ECsoHist พร้อมกันแมว # วิเคราะห์ชื่ออ้างอิงประกอบ 1C 50/ECso ชุด IC50/EC50307900 เซลล์การเพิ่มจำนวน VEGF-เกิดมด SU5416 0.48RM 305353 0.12uM[0106] จากข้างต้น มันจะแสดงว่า รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยสามารถระงับการเพิ่มจำนวน เปิดใช้งานและการสร้างหลอดเลือดใหม่ของ VEGF เกิดจากเซลล์ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดของหลอดเลือดตัวอย่าง 15 5[0107] เนื้องอกต่อต้านกิจกรรมของรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย(A รงควัตถุสีแดง)จากปาล์มใบเลื่อยถูกระงับ hepatocarcinoma มนุษย์ใน heterograft รุ่นเมาส์เปลือยวัสดุ [0108]20 ที่ NYG-1 รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย (รงควัตถุสีแดงเตรียมในตกผลึกตัวอย่างที่ 1)Carcinoma เซลล์รายการ: รายการเซลล์มนุษย์ hepatocarcinoma MHCC - 97L (ตับมะเร็งสถาบันของโทรทัศน์ (Shang Hai จีน)) -21-รุ่น heterograft: Nude เมาส์วิธี [0109]มี inoculated lx105 ของเอ็มเอชซี - 97L เซลล์ (hepatocarcinoma มนุษย์เซลล์รายการ) ในด้านขวาของเมาส์เปลือย subcutaneously หนึ่งสัปดาห์ต่อมา 0.1 mg/kg และ 1 mg 5 กก. NYG-1 ถูกดูแล โดยฉีด intraperitoneal เป็นหนู NYG-1 ถูกฉีดเดียวครั้งเดียวแต่ละสัปดาห์ในสัปดาห์ที่ 3 หลังจากนั้น หนูได้เสียสละในวันที่ 25 และแข็งเนื้องอกถูก extirpated ขนาดของแต่ละ มีปรับ โดยปั้ม Vernier เนื้องอกหลังการรักษาครั้งล่าสุดของ NYF-1 และเนื้องอก มีวาดเส้นโค้งการเจริญเติบโต ขนาดเนื้องอกถูกคำนวณดังนี้ ขนาด 10 รองและแกนหลัก โดย Vernier ปั้ม คำนวณเป็น (แกนเล็ก) 2 * วิชา แกน/2[0110] MHCC - 97L เซลล์ถูก incubated ในอากาศ 5% CO2 ที่ 37 องศาเซลเซียส สื่อวัฒนธรรมใช้เป็น DMEM (GIBCO สหรัฐอเมริกา) เสริม ด้วย 10%v/v ยกเลิกความร้อนครรภ์วัวซีรั่มและ 100IU/mL ยาเพนนิซิลลิน G และ 10011g/mL streptomycin15 ผล [0111]แสดงใน Fig.3 (A), ในกลุ่มรักษา NYG-1 เนื้องอกเจริญเติบโตของการรูปแบบเมาส์ heterograft ถูกระงับไว้ในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณรังสี โดยเฉพาะ กลุ่มกับ lmg/mL 1 NYG ระงับการเจริญเติบโตของเนื้องอก (ประมาณ 50% ของตัวควบคุม P < 0.01)20 [0112] (B) รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยถูกระงับ VEGF นิพจน์hepatocarcinoma มนุษย์ในรูปแบบเมาส์เปลือย heterograft[0113] ตัวอย่างเนื้องอกของข้างต้นกล่าวถึง (A) หลังจากปรับ homogenized เป็นกลุ่ม และ centrifuged แล้ว จำนวนหลอดเลือดบุผนังหลอดเลือดขยายตัวปัจจัย (VEGF) ใน hepatocarcinoma มนุษย์ถูกวัด โดยการทดสอบ ELISA25 ผลลัพธ์ [0114]แสดงในฟิก 3(B) ในกลุ่มรักษา NYG-1 นิพจน์ของหลอดเลือดบุผนังหลอดเลือดเจริญเติบโตปัจจัย (VEGF) ใน hepatocarcinoma มนุษย์ในรูปแบบเมาส์เปลือย heterograft ถูกระงับไว้ในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ โดยเฉพาะ กลุ่มกับ lmg/มล NYG-1 ห้ามกิจกรรม VEGF มากกว่า 40% ของตัวควบคุมกลุ่มที่ 30 (P < 0.01)ตัวอย่างที่ 6องค์ประกอบ [0115] A ประกอบด้วยรงควัตถุสีแดงจากผลปาล์มใบเลื่อยเป็นการตามกำหนดเตรียมไว้กำหนดส่วนผสม (มิลลิกรัมต่อเม็ด)รงควัตถุสีแดงหรือ ethanolic สารสกัด 50แล็กโทส 110 -22-จุลเซลลูโลส 30ซิลิก้า (SiO2) 5แป้ง 5สุดท้ายน้ำหนัก 200ตัวอย่าง 7[0116] การทดสอบวิธีการระบุส่วนประกอบของรงควัตถุของรงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์จากปาล์มใบเลื่อยในตัวอย่าง 15 [0117] ตามคู่มือของ Constituents สารพฤกษเคมีของสมุนไพรดิกราส์และ พืชเศรษฐกิจอื่น ๆ (1992 เจมส์ A ดุ๊ค), (3-แคโรทีนและ tannins จะแสดงเป็นส่วนประกอบของรงควัตถุของปาล์มใบเลื่อยวัน ดังนั้น มีความเป็นไปได้ว่าสาร polyphenol เช่น flavonoid เช่นเป็นกลสารประกอบสองชนิดจะมีส่วนประกอบของรงควัตถุของปาล์มใบเลื่อย การทดสอบสอบ 10 สำหรับสารประกอบ 3 ชนิดดังกล่าวข้างต้นได้รับการดำเนินการ ระบุสารทดสอบตรวจสอบสาร carotenoid [0118] A)ไม่พบมีสาร carotenoid โดย chromatography บางชั้น (TLC) และประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) 15 [0119] B) tannins ทดสอบตรวจสอบ(1) ตรวจสอบทดสอบ โดยคคลอไรด์ III สารละลายสารละลาย III คคลอไรด์ (ส่วนยุบของ FeC13 - 6H 20 ใน 100 mL ของน้ำ 9 กรัม) ผลิตสีสีเขียวสีน้ำตาล ดังนั้น มันจะแนะนำที่รงควัตถุอาจ ประกอบด้วยบีบแทนนิน (proแอนโธไซยานิดิน) ในการทดสอบนี้ สีเขียวน้ำตาล 20 บ่งชี้บีบแทนนิน (proแอนโธไซยานิดิน) และสีน้ำเงินสีดำสีน้ำเงิน ระบุว่า แทนนิน hydrolysised(2) ตรวจสอบทดสอบ โดยสารละลายวานิลลินไฮโดรคลอไรด์สารละลายวานิลลินไฮโดรคลอไรด์ (0.5 มิลลิกรัมละลายวานิลลินใน 0.5 mL ของเอทานอล (95%) และเพิ่ม 0.5 mL ของน้ำ และ 3 mL ของ HC1) ผลิตเป็นสีส้ม ดังนั้น 25 รงควัตถุอาจจะประกอบด้วยแทนนิน สีแดงสีส้มในการทดสอบนี้ ระบุว่า แทนนิน(3) ทดสอบตรวจสอบ (proแอนโธไซยานิดิน) แทนนินจากบีบโดย TLC (I)ภายใต้เงื่อนไขตรวจสอบสำหรับคาทีชิน oroligo-โปรแอนโธไซยานิดิน(di-to tetramer) ของ TLC จุดที่ระบุจุดเริ่มต้นเท่านั้น ดังนั้น รงควัตถุ 30 อาจจะประกอบด้วยสูง polymerized บีบแทนนิน (proแอนโธไซยานิดิน)(4) ทดสอบตรวจสอบบีบแทนนิน (proแอนโธไซยานิดิน) โดย TLC (II)รงควัตถุที่ pretreated โดยกรดไฮโตรไลซ์ (เพิ่ม HC1 และรักษา 80° C ในอ่างน้ำ 30 นาที) ด้วยการระบุสีแดงใส -23-แนะนำแอนโธไซยานิดินที่ถูกสร้างขึ้น ด้วยการวิเคราะห์ โดย TLC ให้จุดสำหรับแอนโธไซยานิดิน ดังนั้น รงควัตถุเดิม (เช่นก่อนไฮโตรไลซ์) รวมแอนโธไซยานิดิน pro (Fig4)ผลลัพธ์ [0120]แนะนำข้อมูลดังกล่าวให้ เห็นรงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์จาก 5palmetto carotenoids ไม่ประกอบด้วย แต่อยู่สูง polymerized บีบแทนนิน (proแอนโธไซยานิดิน)ตัวอย่าง 810 [0121] วิเคราะห์เนื้อหาวางโพลีโพลีรวมวางเนื้อหาถูกวัด โดยใช้รีเอเจนต์ Folin Ciocalteu วิธีการวัดมี 25 มก.รงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์จากปาล์มใบเลื่อยในโปรแกรมประยุกต์ 1ละลายใน 100mL ของ 50%V/V เอทานอล และแตกออก 4 ครั้ง ด้วยน้ำกลั่น และตัวอย่าง 15 2 mL ใส่ในหลอดทดสอบ เพิ่ม 2mL ของ Folin Ciocalteu สารละลายผสม สองกับกลั่นน้ำ และกวน หลังจาก 3 นาที เพิ่ม 2mL 10%w/v โซเดียม ไบคาร์บอเนต (NaHCO3) สารละลาย และนั้นกระตุ้นทำที่ 25° C สำหรับ 60 นาที หลังจากนั้น การ absorbance ที่ 655nm ที่ถูกกำหนด โดยเครื่องทดสอบกรดด่าง มีเส้นโค้งมาตรฐาน เตรียมของ dilutions คาทีชินสารละลาย หลังจากนั้นเทียบเท่ากับเนื้อหา 20 คาทีชิน (มิลลิกรัม/100 กรัม) เป็นโพลีรวมวางเนื้อหาถูกคำนวณ ผลลัพธ์ [0122]30-40 %w/w โดยวิเคราะห์เนื้อหาวางโพลีรวมของรงควัตถุสีแดงบริสุทธิ์จากปาล์มใบเลื่อยได้อื่น ๆ ส่วนประกอบของรงควัตถุสีแดงไม่ใช่วางโพลี 25 ถือเป็นการดำรงอยู่ของไขมันที่เหลือตัวอย่าง 9[0123] ว่า NYG-1 ระบุ cytotoxicity hepatocyte ปกติจะได้รับการทดสอบ ที่ ผลของ NYG-1 การเจริญเติบโตของเซลล์ L-02 ได้รับการทดสอบ โดยใช้บรรทัดเซลล์ hepatocyte 30 L-02 NYG-1 ทำให้เกิดการเจริญเติบโตเซลล์ hepatocyte ปกติในพื้นที่ซึ่งมีทั้งแบบ และ เวลาขึ้นอยู่กับลักษณะ (Fig. 6)ตัวอย่าง 10[0124] ว่า NYG-1 บ่งชี้ว่า มีทดสอบผลเจริญเติบโตป้องกันมะเร็ง hepatocellular (คาร์โล) 35 มีสองหลัก hepatocellular มะเร็งเซลล์บรรทัด HepG2 และ MHCC97L ใช้ ในปริมาณสูง NYG-1 ถูกกระตุ้นการเติบโตของเซลล์คาร์โล (Fig. 7) เมื่อ -24คาร์โลเซลล์ที่ได้รับการรักษากับ NYG ที่ในปริมาณมากกว่า 100gg/mL ถูกสังเกตการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของคาร์โลเจริญเติบโตตัวอย่าง 115 [0125] ผลกระตุ้น NYG 1 เซลล์คาร์โลถูกสังเกต แล้วNYG-1 ว่า สามารถระงับการเจริญเติบโต การเคลื่อนย้าย และบุกรุกของหลอดเลือดบุผนังหลอดเลือด เซลล์ที่ถูกตรวจสอบ มีกิจกรรมการเจริญเติบโตของเซลล์ภายใต้แสง NYG-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

[0101] สรุปเมธอส-20- 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF-Induced เป้าหมาย: ปริมาณมนุษย์ปริมาณวิธี Spectrofluorimetric ของเซลล์การเพิ่มจำนวนกระสายยา: 0.4% DMSO signif เกณฑ์ Ag .:> 50% การเพิ่มขึ้นของการเพิ่มจำนวนเมื่อเทียบกับการตอบสนองVEGF165 บ่มเพาะเวลา / อุณหภูมิ: 2 วัน @ 37 ° C signif เกณฑ์มด .:> 50% การยับยั้งการ VEGFiss เหนี่ยวนำให้เกิดการเพิ่มจำนวนบัฟเฟอร์บ่มเพาะ M199 ขนาดกลาง 10% FBS, 101.1g / mL เฮ, pH7.4 [0102] ผลการผลการวิจัยแสดงให้เห็นในต่อไปนี้Table5 NGY-1 (รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย) แสดงให้เห็นกิจกรรมที่เป็นปฏิปักษ์ 1001.tg/mL (. เข้มข้นสุดท้าย) นำเสนอที่โดดเด่น5 กิจกรรมปฏิปักษ์ (140%). [0103] ตารางที่ 5: สรุป AK, DS-SMO, NYG-1 และกิจกรรม SMO แมว # Assay ชื่อ Spec ชุด Rep. Conc เกณฑ์ Ag มด. R เนื้อเยื่อ Resp Compound: AK, PT: 1154011 Meta 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF ที่เกิด 305353 ครวญเพลง 2 100> 50% ND 12% ครวญเพลง 2 10> 50% ND 2% Compound: DS-SMO, PT: 1154009 นาโนกรัม / มิลลิลิตร307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF ที่เกิด 305353 ครวญเพลง 2 100> 50% ND 14% ครวญเพลง 2 10> 50% ND 0% Compound: NYG-1 PT: 1151625 TG / mL 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน , VEGF ที่เกิด 305353 ครวญเพลง 2 100> 50% ND 140% ครวญเพลง 2 10> 50% ND 30% Compound: SMO, PT1154010 nWmL 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF ที่เกิด 305353 ครวญเพลง 2 100> 50% ND 14% ครวญเพลง 2 10> 50% ND 1% [0104] ผลมาจากการ IC50 / EC50 ถูกแสดงไว้ในตารางต่อไปนี้ 6. IC50 / EC50 ค่าของรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยที่คำนวณได้ที่ 12:12 SU5416 เป็นที่รู้จักกันเอเจนต์ต้านการสร้างหลอดเลือดใหม่(ศัตรู). 10 [0105] ตารางที่ 6: IC501ECso ชี่พร้อมกันแมว # Assay ชื่อ Ref คอมพ์ 1C50 / ECso IC50 Batch / EC50 307,900 เซลล์การเพิ่มจำนวน, VEGF ที่เกิด-มด SU5416 0.48RM 305,353 0.12uM [0106] จากข้างต้นก็จะแสดงให้เห็นว่ารงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยสามารถระงับการเพิ่มจำนวนการเปิดใช้งาน และการสร้างหลอดเลือดใหม่ของ VEGF เซลล์เหนี่ยวนำให้เกิดในเซลล์บุผนังหลอดเลือดหลอดเลือด. 15 ตัวอย่างที่ 5 [0107] กิจกรรมต่อต้านเนื้องอกของรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย(ก) รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยปราบปราม hepatocarcinoma มนุษยชนใน heterograft ของรูปแบบเมาส์เปลือย. [0108] วัสดุ20 NYG-1 รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย (เกล็ดรงควัตถุสีแดงที่เตรียมไว้ในตัวอย่างที่1) สายพันธุ์ของเซลล์มะเร็ง: เซลล์ hepatocarcinoma มนุษย์สาย MHCC-97L (ตับสถาบันมะเร็งมหาวิทยาลัย Fudan (ชางไห่จีน)) - 21 - รูปแบบ Heterograft: เมาส์เปลือย [0109] วิธีlx105 ของเซลล์ MHC-97L (สาย hepatocarcinoma เซลล์มนุษย์) ได้รับเชื้อใต้ผิวหนังลงไปทางด้านขวาของเมาส์เปลือย หนึ่งสัปดาห์ต่อมา 0.1mg / กิโลกรัมและ 5 1mg / กิโลกรัม NYG-1 เป็นยาฉีดเข้าช่องท้องโดยเข้าไปในหนู. NYG-1 ถูกฉีดในลักษณะเดียวกันเพียงครั้งเดียวในแต่ละสัปดาห์เป็นเวลา 3 สัปดาห์ หลังจากนั้นหนูถูกเสียสละในวันที่ 25 และเนื้องอกที่เป็นของแข็งถูก extirpated ขนาดของแต่ละเนื้องอกเป็นสัดส่วนโดย Vernier caliper หลังจากการรักษาครั้งสุดท้ายของ NYF-1 และเนื้องอกอัตราการเจริญเติบโตถูกดึง ขนาดของเนื้องอกได้รับการคำนวณดังนี้ ปรับเล็กน้อย 10 และแกนหลักโดย Vernier caliper คำนวณแล้วเป็น (แกนน้อย) 2 * แกนหลัก / 2. [0110] เซลล์ MHCC-97L ถูกบ่มในบรรยากาศของ CO2 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สื่อที่ใช้วัฒนธรรมเป็น DMEM (GIBCO สหรัฐอเมริกา) เสริมด้วย 10% ปริมาตร / ปริมาตรความร้อนการใช้งานในซีรั่มวัวทารกในครรภ์และ100IU / mL penicillin G และ 10011g / mL streptomycin. 15 [0111] ผลดังแสดงในรูปที่3 (A) ในกลุ่มการรักษา NYG-1 เจริญเติบโตของเนื้องอกของรูปแบบเมาส์heterograft ถูกระงับในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ ในกลุ่มโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับ LMG / มิลลิลิตร NYG-1 ระงับการเจริญเติบโตของเนื้องอก (ประมาณ 50% ของการควบคุม, p <0.01). 20 [0112] (ข) รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยปราบปรามการแสดงออกของ VEGF ในhepatocarcinoma มนุษย์ รูปแบบเมาส์เปลือย heterograft. [0113] ตัวอย่างเนื้องอกดังกล่าวข้างต้น (A) หลังจากปรับเป็นปั่นและปั่น แล้วปริมาณของปัจจัยการเจริญเติบโตของหลอดเลือดหลอดเลือด (VEGF) ในมนุษย์ hepatocarcinoma โดยวัดจากการทดสอบ ELISA. 25 [0114] ผลดังแสดงในรูปที่3 (ข) ในกลุ่มการรักษา NYG-1 การแสดงออกของปัจจัยการเจริญเติบโตของหลอดเลือดหลอดเลือด (VEGF) ใน hepatocarcinoma มนุษย์ในรูปแบบเมาส์เปลือย heterograft ถูกระงับในลักษณะที่ขึ้นอยู่กับปริมาณ โดยเฉพาะอย่างยิ่งกลุ่มที่มี LMG / มิลลิลิตร NYG-1 ยับยั้งกิจกรรม VEGF มากกว่า 40% ของการควบคุม30 กลุ่ม (P <0.01). ตัวอย่างที่ 6 [0115] เป็นองค์ประกอบที่มีรงควัตถุสีแดงจากผลปาล์มใบเลื่อย เป็นสูตรต่อไปนี้ถูกจัดทำขึ้น. ส่วนผสมสูตร (mg / แท็บเล็ต) รงควัตถุสีแดงหรือเอทานอลสารสกัดจาก 50 แลคโตส 110 - 22 - ดีเซลลูโลสไมโคร30 ซิลิกา (SiO2) 5 แป้ง 5 น้ำหนักชิงชนะเลิศ 200 ตัวอย่าง 7 [0116] การทดสอบที่ได้รับการดำเนินการเพื่อระบุ รงควัตถุส่วนประกอบของบริสุทธิ์รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยในตัวอย่างที่ 1 5 [0117] อ้างอิงจากคู่มือขององค์ประกอบพฤกษเคมีของสมุนไพร GRAS และพืชเศรษฐกิจอื่น ๆ (1992 JAMES A, DUKE) (3 แคโรทีนและแทนนินจะมีการแสดง เป็นส่วนประกอบของรงควัตถุปาล์มใบเลื่อยถึงวันที่. ดังนั้นจึงมีความเป็นไปได้ว่าสารโพลีฟีนเช่น flavonoid เช่นเดียวกับการดังกล่าวข้างต้นสองชนิดของสารที่จะเป็นรงควัตถุส่วนประกอบของปาล์มใบเลื่อย. การทดสอบการตรวจสอบ 10 สำหรับข้างต้น กล่าวถึงสามชนิดของสารที่ได้รับการดำเนินการที่จะระบุสาร. [0118] A) การทดสอบการตรวจสอบสำหรับ carotenoid สารสารcarotenoid ใด ๆ ที่ไม่ได้ถูกตรวจพบโดยโคชั้นบาง ๆ(TLC) และประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC). 15 [0119] B ) การทดสอบการตรวจสอบสำหรับแทนนิน. (1) การทดสอบการตรวจสอบโดยคลอ III สารละลายเฟอร์ริกคลอไรด์III สารละลาย (ละลาย 9g ของ FeC13-6H20 ใน 100mL น้ำ) ผลิตสีเขียวสีน้ำตาล ดังนั้นจึงแนะนำว่ารงควัตถุอาจมีสารแทนนินข้น (โปรแอนโธไซยานิดิน) ในการทดสอบนี้สีเขียวสีน้ำตาล 20 บ่งชี้ว่าสารแทนนินข้น (โปรแอนโธไซยานิดิน) และสีฟ้าเป็นสีฟ้าเข้มบ่งชี้ว่าสารแทนนินhydrolysised. (2) การทดสอบการตรวจสอบโดยวานิล-ไฮโดรคลอไรสารละลายวานิล-ไฮโดรคลอไรสารละลาย(ละลาย 0.5mg vanillin 0.5 มิลลิลิตรของเอทานอล(95%) และเพิ่ม 0.5mL ของน้ำและ 3ml ของ HC1) ผลิตสีส้ม. 25 ดังนั้นอาจจะเป็นรงควัตถุที่มีแทนนิน สีแดงเป็นสีส้มในการทดสอบนี้แสดงให้เห็นแทนนิน. (3) การทดสอบการตรวจสอบของแทนนินข้น (โปรแอนโธไซยานิดิน) โดย TLC (I) ภายใต้สภาพการตรวจสอบสำหรับคาทีชิน oroligo- โปรแอนโธไซยา นิดิน (ดิเพื่อtetramer) ของ TLC จุดที่ระบุไว้เพียงจุดเริ่มต้น ดังนั้นรงควัตถุ 30 อาจจะมีสารแทนนินข้น polymerized สูงกว่า (โปรแอนโธไซยานิดิน). (4) การทดสอบการตรวจสอบของแทนนินข้น (โปรแอนโธไซยานิดิน) โดย TLC (II) รงควัตถุปรับสภาพโดย การย่อยสลายกรด (เพิ่ม HC1 และการบำรุงรักษา 80 ° C ในอ่างน้ำเป็นเวลา 30 นาที) ไฮโดรไลแสดงให้เห็นเป็นสีแดงชัดเจน- 23 - บอกว่าแอนโธไซยานิดินอาจได้รับการสร้าง ไฮโดรไลวิเคราะห์โดย TLC ให้จุดสำหรับแอนโธไซยานิดินจึงเดิม (คือก่อนที่จะย่อยสลาย) รงควัตถุรวมถึงโปรแอนโธไซยานิดิน (Fig4) ได้. [0120] ผลการค้นหา5 ข้อมูลดังกล่าวข้างต้น แสดงให้เห็นว่าบริสุทธิ์รงควัตถุสีแดงจากเห็นต้นปาล์มชนิดเล็กที่มีนอยด์แต่มีสูงกว่า polymerized แทนนินข้น (โปรแอนโธไซยานิดิน). ตัวอย่าง 8 10 [0121] Assay สำหรับเนื้อหาฟีนอลโพลีรวมเนื้อหาฟีนอลโพลีโดยวัดจากโดยใช้น้ำยา Folin Ciocalteu วิธีการวัด25mg ของบริสุทธิ์รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยในการประยุกต์ใช้ 1 ถูกละลายในเอทานอล100mL 50% V / V และเจือจาง 4 ครั้งด้วยน้ำกลั่นและตัวอย่าง 2mL 15 วางไว้ในหลอดทดลอง เพิ่มแล้ว 2mL ของ Folin Ciocalteu สารละลายเจือจางสองครั้งด้วยน้ำกลั่นและกวน หลังจาก 3 นาทีเพิ่ม 2mL 10% w / v โซเดียมไบคาร์บอเนต(NaHCO3) สารละลายและตื่นเต้นที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที หลังจากนั้นการดูดกลืนแสงที่ 655nm ถูกกำหนดโดย spectrophotometer โค้งมาตรฐานถูกเตรียมไว้สำหรับชุดของเจือจางของคาทีชินสารละลาย หลังจากนั้นเทียบเท่า 20 คาทีชินเนื้อหา (มก. / 100 กรัม) ในขณะที่เนื้อหาของฟีนอลโพลีรวมที่คำนวณได้. [0122] ผลเนื้อหาฟีนอลโพลีทั้งหมดของบริสุทธิ์รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยเป็น30-40% w / w การ โดยการวิเคราะห์. องค์ประกอบอื่น ๆ ของรงควัตถุสีแดงอื่น ๆ นอกเหนือจากฟีนอลโพลี 25 ถือว่าเป็นการดำรงอยู่ของไขมันที่เหลือ. ตัวอย่าง 9 [0123] ไม่ว่า NYG-1 ที่จะแสดงให้เห็นความเป็นพิษตับปกติได้รับการทดสอบ ผลของ NYG-1 การเจริญเติบโตของ L-02 เซลล์ได้รับการทดสอบโดยใช้สายพันธุ์ของเซลล์ตับ 30 L-02 NYG-1 เหนี่ยวนำให้เกิดการเจริญเติบโตของเซลล์ตับปกติใน dose- และลักษณะที่ขึ้นกับเวลา(รูปที่. 6). ตัวอย่าง 10 [0124] ไม่ว่า NYG-1 แสดงให้เห็นฤทธิ์ต้านการเจริญเติบโตของมะเร็งตับ (HCC) 35 ได้รับการทดสอบ สองเซลล์มะเร็งตับที่สำคัญ HepG2 MHCC97L และถูกนำมาใช้ ในปริมาณที่สูง NYG-1 กระตุ้นการเจริญเติบโตของเซลล์มะเร็งตับ (รูปที่. 7) เมื่อ- 24 - เซลล์มะเร็งตับได้รับการรักษาด้วย NYG-1 ในปริมาณที่มากกว่า 100gg / mL เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของการเติบโตของมะเร็งตับพบว่า. ตัวอย่าง 11 5 [0125] ผลการกระตุ้นของ NYG-1 ต่อเซลล์มะเร็งตับเป็นที่สังเกตแล้ว , ไม่ว่าจะ NYG-1 สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตการอพยพและการรุกรานของเส้นเลือด endothelial เซลล์ถูกตรวจสอบ กิจกรรมเจริญเติบโตของเซลล์ภายใต้การสัมผัสกับ NYG-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

[ 0101 ] สรุป methos





- 20 -




การเพิ่มจำนวน 307900 เซลล์ , และเป้าหมายการศึกษาเซลล์เซลล์ของมนุษย์ วิธีการ spectrofluorimetric เซลล์การเพิ่มจำนวน

กระสายยา : 0.4 % signif DMSO . เกณฑ์ AG : > เพิ่มขึ้น 50% เมื่อเทียบกับการตอบสนองในการเพิ่มจำนวน

เวลา / อุณหภูมิการบ่มเนื้อเยื่อผู้ป่วยมะเร็งลํา 2 วัน @ 37 ° C signif เกณฑ์ Related . :> 50% inhibition vegfiss

) การเพิ่มจำนวนบ่มบัฟเฟอร์เปรียบเทียบปานกลาง 10% FBS
101.1g/ml ใส่ยา ph7.4
[ ]
โดยพบผลลัพธ์ ผลลัพธ์ที่ได้แสดงใน table5 ดังต่อไปนี้ ngy-1 ( รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อย ) แสดงกิจกรรมปฏิปักษ์ 1001.tg/ml ( เข้มข้นสุดท้าย ) นำเสนอกิจกรรมน่าทึ่ง
5 ปฏิปักษ์ ( 140 บาท ) .
[ 0103 ] ตารางที่ 5 : สรุปและ ,ds-smo nyg-1 SMO , และกิจกรรม
แมว#ชื่อชุดว่า spec . Rep . วท. หลักเกณฑ์เอจี . มด R

ผสมเยื่อ resp : อลาสกา , PT # : 1154011 meta
307900 เซลล์การเพิ่มจำนวนการศึกษาต่อ , 305353 ฮัม 2 100 > 50 % และ 12 %
ฮัม 2 10 > 50% ครั้งที่ 2 %
) : ds-smo , PT # : 1154009 ng / ml
307900 เซลล์การเพิ่มจำนวนการศึกษาต่อ , 305353 ฮัม 2 100 > 50% ครั้งที่ 14 %
ฮัม 2 10 > 50% และ 0 %
: nyg-1 ผสม ,PT # : 1151625 TG / ml
307900 เซลล์การเพิ่มจำนวนการศึกษาต่อ , 305353 ฮัม 2 100 > 50% ครั้งที่ 140 %
ฮัม 2 10 > 50% และ 30%
ผสม : SMO pt1154010 nwml
307900 การเพิ่มจำนวน , เซลล์ , และการศึกษา 305353 ฮัม 2 100 > 50% ครั้งที่ 14 %
2 10 50 ฮัม ครั้งที่ 1 %
% [ 0104 ] ผล ic50 / ec50 แสดงตามตารางที่ 6 การ ic50 / ec50
คุณค่าของรงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยคำนวณที่ 0.12pm . su5416 เป็น
รู้จักเอเจนต์ต้านการสร้างหลอดเลือดใหม่ ( antagonist ) .
10 [ 0105 ] ตารางที่ 6 : ic501ecso

แมว# HIST พร้อมกัน ( ชื่ออังกฤษ คอมพ์ 1c50 / ecso ชุด ic50 / ec50
307900 เซลล์การเพิ่มจำนวนการศึกษาต่อ , มด su5416 0.48rm 305353 0.12um
[ 0106 ] จากข้างต้นมันแสดงให้เห็นว่ารงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยสามารถระงับการเพิ่มจำนวนการสร้างหลอดเลือดใหม่ของการศึกษาและการกระตุ้นเซลล์ในเซลล์บุผนังหลอดเลือดเซลล์

15 ตัวอย่าง 5
[ 0107 ] ต้านเนื้องอกปาล์มใบเลื่อย
รงควัตถุสีแดงจากกิจกรรมของ( ก ) รงควัตถุสีแดงจากปาล์มใบเลื่อยปราบมนุษย์ hepatocarcinoma ใน heterograft รูปแบบเมาส์เปลือย 0108
[ ]
20 nyg-1 รงควัตถุสีแดงจากวัสดุ , ปาล์มใบเลื่อย ( ตกผลึกรงควัตถุสีแดงเตรียม

ตัวอย่าง 1 ) เซลล์มะเร็ง :mhcc-97l Cell hepatocarcinoma มนุษย์ ( ตับมะเร็งสถาบันมหาวิทยาลัย Fudan ( Shang Hai , จีน ) )






- 21 -


heterograft แบบเปลือยเมาส์ [ 0109 ] วิธี
lx105 ของ mhc-97l เซลล์ ( Cell hepatocarcinoma มนุษย์ปลูกเชื้อ
subcutaneously ในด้านขวาของเมาส์ที่เปลือย หนึ่งสัปดาห์ต่อมา , 0