2.5. Measurement of anti-oxidative

2.5. Measurement of anti-oxidative activity

Linoleic acid emulsion (50 mM) was prepared by mixing 0.284 g of linoleic acid, 0.284 g of Tween 20 and 50 mL of 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 7.0). For the oxidation test, we prepared a reaction mixture containing 0.5 mL of water, 2.5 mL of the linoleic acid emulsion, 2.0 mL of 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) and 0.5 mL of methanolic test samples in a 10-mL glass vial. The total reaction volume was fixed uniformly to 5.5 mL, and the final concentration of antioxidant was 90 μM. The glass vials containing Part of the reaction mixture was withdrawn at specific intervals, and analysed using a modified ferric thiocyanate method (Chen, Muramoto, Yamauchi, & Nokihara, 1996) as follows to evaluate antioxidative activities: reaction mixture (25 μL) was mixed with 1.175 mL of 75% ethanol, 25 μL of 20 mM FeCl2 in 3.5% HCl and 25 μL of 30% ammonium thiocyanate in a 1.5-mL Eppendorf tube. After exactly 3 min, the absorbance was determined at 500 nm, when the colour was developed by FeCl2 and thiocyanate and reached a maximum. Each assay was performed in triplicate and repeated three times.reaction mixture were capped with rubber septa, and kept at 50 °Cunder dark conditions for 48 h. As a negative control, methanol was added instead of the antioxidant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การวัดกิจกรรมต้าน oxidativeกรด linoleic อิมัลชัน (50 mM) ถูกเตรียม โดยผสม g 0.284 ของกรด linoleic, g 0.284 Tween 20 และ 50 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สำหรับการทดสอบออกซิเดชัน เราเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยา 0.5 mL ของน้ำ 2.5 mL ของอิมัลชันกรด linoleic, mL 2.0 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 0.5 มล.ของตัวอย่างทดสอบ methanolic ในคอนแทคแก้ว 10 มล. ปริมาณปฏิกิริยารวมได้คงที่สม่ำเสมอเมื่อเทียบเคียงกับ 5.5 mL และสุดท้ายความเข้มข้นของสารต้านอนุมูลอิสระถูก 90 μM Vials แก้วส่วนที่มีส่วนผสมของปฏิกิริยาคือถอนเวลา และ analysed โดยใช้วิธีปรับเปลี่ยนเฟอร์ thiocyanate (เฉิน Muramoto ยะมะอุชิ & Nokihara, 1996) ดังนี้เพื่อประเมินกิจกรรม antioxidative: ปฏิกิริยาผสม (25 μL) ถูกผสมกับ 1.175 mL ของ 75% เอทานอล μL 25 มม. 20 FeCl2 ใน 3.5% HCl และ μL 25 ของ 30% แอมโมเนีย thiocyanate ใน Eppendorf หลอด 1.5 mL หลังตรง 3 นาที absorbance ที่ถูกกำหนดที่ 500 nm สีถูกพัฒนาโดย FeCl2 thiocyanate และถึงสูงสุด วิเคราะห์แต่ละงานใน triplicate และส่วนผสม times.reaction สามซ้ำได้ปรบมือ ด้วยยาง septa และเก็บไว้ที่ 50 ° Cunder มืดสำหรับ 48 h เป็นตัวควบคุมค่าลบ เมทานอลถูกเพิ่มเข้ามาแทนที่สารต้านอนุมูลอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การวัดกิจกรรมการต้านออกซิเดชันไลโนเลอิมัลชั่กรด (50 มิลลิเมตร) ถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม 0.284 กรัมของกรดไลโนเลอิก 0.284 กรัม Tween 20 และ 50 มล 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สำหรับการทดสอบการเกิดออกซิเดชันที่เราเตรียมผสมปฏิกิริยาที่มี 0.5 มิลลิลิตรน้ำ 2.5 มิลลิลิตรของอิมัลชันกรดไลโนเลอิก 2.0 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 0.5 มิลลิลิตรตัวอย่างทดสอบเมทานอลในขวดแก้ว 10 มิลลิลิตร . ปริมาณการเกิดปฏิกิริยาโดยรวมได้รับการแก้ไขอย่างสม่ำเสมอ 5.5 มิลลิลิตรและความเข้มข้นสุดท้ายของสารต้านอนุมูลอิสระเป็น 90 ไมครอน ขวดแก้วที่มีส่วนหนึ่งของการผสมปฏิกิริยาถูกถอนออกในช่วงเวลาที่เฉพาะเจาะจงและวิเคราะห์โดยใช้วิธีการ thiocyanate ธาตุเหล็กมีการปรับเปลี่ยน (เฉินมูราโมโต้, Yamauchi และ Nokihara, 1996) ดังต่อไปนี้ในการประเมินกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ: ผสมปฏิกิริยา (25 ไมโครลิตร) ผสม เอทานอล 1.175 มิลลิลิตร 75%, 25 ไมโครลิตร 20 มิลลิ FeCl2 3.5% HCl และ 25 ไมโครลิตรของ thiocyanate 30% แอมโมเนียมในหลอด Eppendorf 1.5 มิลลิลิตร หลังจากที่ว่า 3 นาที, การดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดที่ 500 นาโนเมตรเมื่อสีได้รับการพัฒนาโดย FeCl2 และ thiocyanate และถึงสูงสุด ทดสอบแต่ละคนได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและซ้ำสามส่วนผสม times.reaction ถูกปกคลุมด้วย SEPTA ยางและเก็บไว้ที่ 50 ° Cunder ที่มืดเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เป็นตัวควบคุมเชิงลบเมทานอลถูกเพิ่มเข้ามาแทนสารต้านอนุมูลอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การวัดกิจกรรมต้านออกซิเดชัน

กรดไลโนเลอิอิมัลชัน ( 50 มม. ) เตรียมได้โดยการผสม 0.284 กรัมกรดไขมัน , 0.284 กรัม Tween 20 และ 50 มล. 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) สำหรับการทดสอบปฏิกิริยาออกซิเดชัน เราเตรียมส่วนผสมที่มี 0.5 มล. ของน้ำ 2.5 ml ของปริมาณกรดไขมัน , 2.0 มิลลิลิตร 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 05 ml ของตัวอย่างทดสอบเมทานอลใน 10 ml ขวดแก้ว . ปริมาณคงที่ โดยปฏิกิริยารวม 5.5 ml และความเข้มข้นของสารต้านอนุมูลอิสระμสุดท้าย 90 เมตร ขวดแก้วที่มีส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ถูกถอนในช่วงเวลาที่เฉพาะเจาะจง วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้วิธีการดัดแปลงเฟอริคไทโอไซยาเนต ( เฉิน มุราโมโตะผู้พัฒนา& nokihara , , ,1996 ) ดังนี้ เพื่อประเมินกิจกรรมต้านปฏิกิริยาผสม ( 25 μลิตร ) ผสมกับ 1.175 มิลลิลิตรเอทานอล 75% , 25 μ l fecl2 20 มม. HCl 3.5% และฉัน 25 μ 30% แอมโมเนียมไทโอไซยาเนตใน 1.5-ml เพนดอร์ฟหลอด หลังจากนั้น 3 นาที ค่ากำหนดที่ 500 นาโนเมตร เมื่อสีถูกพัฒนาขึ้น โดย fecl2 และไทโอไซยาเนตและถึงสูงสุดแต่ละวิธีมีการปฏิบัติทั้งสามใบซ้ำ 3 times.reaction ถูกปกคลุมด้วยส่วนผสมของยาง และเก็บไว้ที่ 50 องศา cunder มืดเงื่อนไขที่เวลา 48 ชั่วโมง เป็นชุดควบคุมลบ เมทานอล ได้เพิ่มแทนของสารต้านอนุมูลอิสระ