The PCR reaction consistedof 10 ll

The PCR reaction consisted
of 10 ll of Real Time 2 HS-PCR Mix SYBR A (A&A Biotechnology,
Poland), 1 ll of each forward and reverse primers (2 ll in the case
of mcrA), and 2 ll of DNA template (1 ng/ll), with sterile double
distilled water added to achieve a total volume of 20 ll. The initial
denaturation lasted 3 min at 95 C and was followed by 40 cycles
of the following incubation cycle: denaturation for 15 s at 95 C,
primer annealing for 30 s at 55 C (61 C for dsrA and mcrA), and
then product elongation for 30 s at 72 C. SYBR Green fluorescence
detection was performed at the end of each primer annealing step.
Amplicon specificity was confirmed via melting curve analysis of
the qPCR end products

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย10 จะของเวลาจริง 2 HS-PCR ผสม SYBR A และเทคโนโลยีชีวภาพโปแลนด์), 1 ll ของไพรเมอร์แต่ละข้างหน้า และย้อนกลับ (2 จะในกรณีของ mcrA), และ 2 จะของดีเอ็นเอแม่แบบ (1 ฉบับ/จะ), กับคู่ที่เป็นหมันกลั่นน้ำเพิ่มเพื่อให้ได้ปริมาตรรวม 20 จะ การเริ่มต้นdenaturation กินเวลา 3 นาทีที่ 95 C และตามมา ด้วย 40 รอบของรอบการกกไข่ต่อไปนี้: denaturation 15 s ที่ 95 Cรองพื้นหลอม 30 s ที่ 55 C (61 C สำหรับ dsrA และ mcrA), และแล้วผลิตภัณฑ์ยืด 30 s ที่ 72 C. SYBR เขียวเรืองแสงดำเนินการตรวจสอบที่จุดสิ้นสุดของแต่ละขั้นตอนรองพื้นหลอมความ Amplicon ได้รับการยืนยันผ่านโค้งวิเคราะห์จุดหลอมเหลวผลิตภัณฑ์สิ้น qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย
10 LL ของ Real Time 2? HS-PCR ผสม SYBR A (A & A เทคโนโลยีชีวภาพ
โปแลนด์) 1 LL ของแต่ละข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ (2 LL ในกรณีที่
ของ mcrA) และ 2 LL ของแม่แบบดีเอ็นเอ (1 ng / LL) ด้วยการฆ่าเชื้อคู่
น้ำกลั่นเพิ่ม เพื่อให้บรรลุปริมาณรวมของ 20 LL เริ่มต้น
denaturation กินเวลา 3 นาทีที่ 95 C และตามมาด้วย 40 รอบ?
ของวงจรการบ่มต่อไปนี้:? denaturation สำหรับ 15 วินาทีที่ 95 C,
? หลอมไพรเมอร์เป็นเวลา 30 วินาทีที่ 55 C (61 องศาเซลเซียสเป็นเวลา dsrA และ mcrA) และ
จากนั้นยืดตัวสินค้าเป็นเวลา 30 วินาทีที่ 72 องศาเซลเซียส SYBR เรืองแสงสีเขียว
การตรวจสอบได้ดำเนินการในตอนท้ายของแต่ละขั้นตอนการอบไพรเมอร์.
Amplicon เฉพาะเจาะจงได้รับการยืนยันที่ผ่านการวิเคราะห์เส้นโค้งการละลายของ
ผลิตภัณฑ์ปลาย qPCR