To quantify the amount of HRP linke

To quantify the amount of HRP linked to each the activity was measured. The assay to probe the enzymatic activity of the HRP is based on measuring the oxidation rate of ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) GABTs) in the presence of For the absorbance at 414 nm meaversus time was sured for all the samples. 1 mM of ABTs (Sigma Aldrich HA1888) solution in 50 mM dium phosphate, pH 6. was prepared. Also a solution of o.1 M H (Sigma Aldrich. #21676-3) in milli Q water
was prepared. The 25 puL of the H2O2 solution were added to 2.5 mL of the ABTS solution. Then. o 5 mL of this mixture was poured into a spectrophotometer cuvette together with 50 uL of the sample (either PC. first (wi) or last (w3) PC washes) and the changes in the absorbance at 414 nm were recorded using UVlvis absorption spectroscopy (Agilent 8453 UVIvis) (d. Fig. 3 and the supporting Information). A kinetic study was performed by continuous spectrophotometric rate determination (d. Fig. 3 and the Supporting Information). The activity rate k was determined by the value of the slope in the linear range of the measurement k AA 14/At- Then the activity rate, k Imin '1. was plotted versus the HRP concentration from o to 5 ug/mL (Fig. 3 and Supporting Information)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่จะหาจำนวนปริมาณของ HRP ที่เชื่อมโยงกับแต่ละกิจกรรมวัด การทดสอบการสอบสวนเอนไซม์ของ HRP อยู่บนพื้นฐานของการวัดอัตราการเกิดออกซิเดชันของกรด ethylbenzthiazoline-6-sulfonic) GABTs) ในการปรากฏตัวของสำหรับการดูดกลืนแสงที่ 414 นาโนเมตร meaversus เวลาถูก sured สำหรับกลุ่มตัวอย่างทั้งหมด 1 มิลลิเมตร ABTS (Sigma Aldrich HA1888) วิธีการแก้ปัญหาในขนาด 50 มม dium ฟอสเฟตค่า pH 6. ถูกจัดทำขึ้น นอกจากนี้การแก้ปัญหาของ o.1 MH (Sigma Aldrich. # 21676-3) ในน้ำ Q พัน
ถูกจัดทำขึ้น 25 Pul ของการแก้ปัญหา H2O2 ที่ถูกเพิ่มถึง 2.5 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหา ABTS แล้วก็ o 5 มิลลิลิตรผสมนี้ถูกเทลงใน cuvette spectrophotometer ร่วมกับ 50 uL ของกลุ่มตัวอย่าง (ทั้ง PC. ครั้งแรก (WI) หรือที่ผ่านมา (W3) ล้าง PC) และการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 414 นาโนเมตรที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้สเปกโทรสโกดูดซึม UVlvis (Agilent 8453 UVIvis) (d. รูปที่. 3 และข้อมูลประกอบการ) การศึกษาเกี่ยวกับการเคลื่อนไหวได้ดำเนินการโดยการกำหนดอัตราสเปกต่อเนื่อง (d. รูปที่. 3 และข้อมูลประกอบการ) อัตรากิจกรรม K ถูกกำหนดโดยค่าของความลาดชันในช่วงเชิงเส้นของการวัด K AA 14 / AT-แล้วอัตรากิจกรรม, k Imin '1 พล็อตที่ถูกเมื่อเทียบกับความเข้มข้นของ HRP จาก o 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (รูปที่ 3. และข้อมูลประกอบการ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อหาปริมาณของ HRP เชื่อมโยงกับแต่ละกิจกรรมวัด ( การตรวจสอบเอนไซม์ของ HRP จะขึ้นอยู่กับการวัดอัตรา ethylbenzthiazoline-6-sulfonic ออกซิเดชันกรด ) gabts ) ในการแสดงตนของสำหรับการดูดกลืนแสงที่ 414 nm meaversus เวลาแน่นอนว่าตัวอย่างทั้งหมด 1 มม. Abbr ( ซิกม่า Aldrich ha1888 ) สารละลายฟอสเฟต เดียม 50 มิลลิโมลาร์พีเอช 6 . ที่เตรียมไว้ นอกจากนี้ โซลูชันของ o.1 M H ( ซิกม่า อัลดริช # 21676-3 ) ในน้ำพันคิวที่เตรียมไว้ 25 ปูลของ H2O2 โซลูชั่นเพิ่ม 2.5 ml ของ Abbr โซลูชั่น แล้ว o 5 มิลลิลิตร ผสมนี้ถูกเทลงในเครื่องคิวเวตต์ร่วมกับ 50 UL ของตัวอย่าง ( ทั้ง PC ก่อน ( WI ) หรือล่าสุด ( W3 ) PC ล้าง ) และการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 414 nm พบเทคนิคการวัดการดูดกลืน uvlvis ( Agilent 8453 uvivis ) ( D . รูปที่ 3 และสนับสนุนข้อมูล ) การศึกษาจลนศาสตร์การใช้อย่างต่อเนื่อง ) อัตราการ ดี รูปที่ 3 และสนับสนุนข้อมูล ) อัตรากิจกรรม k ถูกกำหนดจากค่าความชันในช่วงเชิงเส้นของการวัด K AA 14 / - แล้วกิจกรรมคะแนน , K imin " 1 กำลังวางแผนกับ HRP ความเข้มข้นจาก O 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร ( รูปที่ 3 และสนับสนุนข้อมูล )