PCR reactions were performed in a 25 mL final volume containing
approximately 50e80 ng of extracted DNA, 1 standard
reaction buffer (New England Biolabs, UK), 2.0 mM MgCl2, 200 mM
dNTPs (each), 200 nM primers (each), and 1.25 U of Taq DNA polymerase
(NewEngland Biolabs, UK), using an MJ Research PTC-200
programmable thermal cycler (BioRad Laboratories, USA). The
amplification conditions consisted of an initial denaturation step at
94 C for 5 min, followed by 40 cycles (35 cycles for ITS) of 30 s at
94 C, 30 s at 60 C (53 C for ITS) and 20 s at 72 C, and a final
extension step at 72 C for 7 min
ดำเนินปฏิกิริยา PCR ในการ 25 มล.ปริมาตรสุดท้ายที่ประกอบด้วยประมาณ 50e80 ng ของแยก DNA, 1 มาตรฐานบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (นิวอิงแลนด์ Biolabs, UK), 2.0 มม. MgCl2, 200 mMdNTPs (แต่ละ), 200 nM ไพรเมอร์ (แต่ละ), และ 1.25 U Taq DNA พอลิเมอเรส(NewEngland Biolabs, UK), ใช้เป็น MJ วิจัย PTC-200โปรแกรมร้อน cycler (ปฏิบัติ BioRad สหรัฐอเมริกา) ที่ขยายเงื่อนไขประกอบด้วยมีขั้นตอน denaturation เริ่มต้นที่C 94 สำหรับ 5 นาที ตาม ด้วย 40 รอบ (รอบที่ 35 สำหรับของ) 30 s ที่94 C, 30 s 60 C (53 C สำหรับของ) และ 20 s ที่ 72 C และตัวสุดท้ายขั้นตอนการขยายที่ 72 C ใน 7 นาที
การแปล กรุณารอสักครู่..

ปฏิกิริยา PCR ได้ใน 25 มล. ปริมาตรสุดท้ายประกอบด้วย
ประมาณ 50e80 นาโนสกัด DNA 1 มาตรฐาน
ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ ( อังกฤษ biolabs , อังกฤษ ) , MgCl2 2.0 มม. 200 มม.
dntps ( แต่ละ ) , 200 nm PCR ( แต่ละ ) , และ 1.25 U ของทัค DNA polymerase
( biolabs นิวอิงแลนด , อังกฤษ ) , ใช้
ptc-200 วิจัย MJ โปรแกรม cycler ความร้อน ( ห้องปฏิบัติการ , biorad USA )
เงื่อนไขแบบเป็นขั้นตอนเริ่มต้นที่ 94 (
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 40 รอบ ( 3 รอบ ) ) 30 s
94 C 30 เป็น 60 C ( 53 C ) และ 20 s 72 C , และสุดท้าย
ส่วนขยายขั้นตอนที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที
การแปล กรุณารอสักครู่..
