Leaves and grain sucrose and starch

Leaves and grain sucrose and starch were quantified as
described (Smith and Zeeman, 2006) with some modifications.
Flag leaves were sampled from WW and after 3 days of WS
and immediately frozen in liquid-N. Grains were harvested at
the end of the experiment. Then 0.25 g of grain powder was
incubated in ethanol (80%) for 3 min at 95 C and centrifuged
‡3000 g 10 min, keeping supernatant (soluble carbohydrate
fraction). For sucrose quantification, the soluble
carbohydrate fraction dissolved in ethanol (80%) was evaporated
using a rotary evaporator. The samples were dissolved in
ddH2O and subsequently the sucrose was analysed by highperformance
anion-exchange chromatography (HPAEC) on
HPLC using a CarboPac PA 1 column (4 · 250 mm diameter)
and determined by pulsed amperometric detection (Dionex,
Sunnyvale, CA). For starch quantification, the yellowish pellet
(insoluble carbohydrate fraction) was incubated allowing ethanol
to evaporate and dissolved in ddH2O 10 min at 95 C.
0.5 mL of the gelatinized starch granules was transferred to a
tube with 0.5 mL 200 mM Na acetate (pH 5.5) and was
digested with six units of a-amyloglucosidase and two units of
a-amylase for 4 or 24 h at 37 C, for leaf or grain, respectively.
A solution of equivalent volume and composition was
incubated without the enzymes and used as control samples.
The release of glucose was determined at 340 nm using a
Glucose Assay (GAHK20; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) with a
spectrophotometer (DU-640; Beckman Coulter, Brea, CA,
USA). Starch content was calculated as 90% of glucose
content.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใบ และเมล็ดซูโครส และแป้งถูก quantified เป็นอธิบาย (สมิธและ Zeeman, 2006) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่างใบธงได้ตัวอย่าง จาก WW และ หลัง 3 วันของ WSและทันทีที่น้ำแข็งใน N. ของเหลว มีการเก็บเกี่ยวธัญพืชที่สิ้นสุดการทดลอง แล้ว 0.25 g ผงเมล็ดincubated ในเอทานอล (80%) ใน 3 นาทีที่ 95 C และ centrifuged‡3000 g 10 นาที รักษา supernatant (คาร์โบไฮเดรตละลายเศษส่วน) สำหรับนับซูโครส การละลายน้ำเศษส่วนคาร์โบไฮเดรตที่ละลายในเอทานอล (80%) ถูกหายไปใช้ evaporator โรตารี่ ตัวอย่างถูกละลายในddH2O และต่อมาซูโครสจะถูก analysed โดย highperformanceanion exchange chromatography (HPAEC) ในHPLC ที่ใช้คอลัมน์ CarboPac PA 1 (4 · 250 มม.เส้นผ่าศูนย์กลาง)และกำหนด โดยตรวจสอบการ amperometric พัล (DionexSunnyvale, CA) สำหรับนับแป้ง เม็ดสีเหลือง(คาร์โบไฮเดรตละลายเศษ) เป็น incubated ทำให้เอทานอลการระเหย และละลายใน 10 นาทีที่ 95 C. ddH2O0.5 mL ของเม็ดแป้ง gelatinized ได้โอนย้ายไปหลอดกับ 0.5 mL 200 mM acetate นา (pH 5.5) และไม่ต้องเป็น amyloglucosidase 6 หน่วยและหน่วยที่สองของa-amylase 4 หรือ 24 h ที่ 37 C ใบหรือเมล็ด ตามลำดับวิธีเทียบเท่าปริมาณและองค์ประกอบincubated ไม่ มีเอนไซม์ และใช้เป็นตัวอย่างควบคุมกำหนดของกลูโคสที่ 340 nm ใช้เป็นทดสอบกลูโคส (GAHK20 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) มีการเครื่องทดสอบกรดด่าง (ดู 640 Beckman Coulter, Brea, CAสหรัฐอเมริกา) เนื้อหาแป้งถูกคำนวณเป็น 90% ของกลูโคสเนื้อหา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใบและน้ำตาลธัญพืชและแป้งถูกวัดเป็นอธิบาย (สมิ ธ และ Zeeman 2006) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง. ใบธงถูกตัวอย่างจาก WW และหลังจากนั้น 3 วันของ WS และแช่แข็งทันทีในของเหลว-N เก็บเกี่ยวธัญพืชในตอนท้ายของการทดลอง แล้ว 0.25 กรัมผงเม็ดได้รับการบ่มในเอทานอล(80%) เป็นเวลา 3 นาทีที่ 95 ซีและปั่น‡ 3000 กรัม 10 นาทีทำให้ใส (คาร์โบไฮเดรตที่ละลายน้ำได้ส่วน) สำหรับปริมาณน้ำตาลที่ละลายน้ำได้ส่วนคาร์โบไฮเดรตที่ละลายในเอทานอล (80%) ได้รับการระเหยโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน กลุ่มตัวอย่างถูกกลืนหายไปในddH2O และซูโครสต่อมาได้รับการวิเคราะห์โดย highperformance โคแลกเปลี่ยนไอออน (HPAEC) บนHPLC ใช้ CarboPac PA 1 คอลัมน์ (4 · 250 มิลลิเมตร) และกำหนดโดยการตรวจสอบ amperometric ชีพจร (Dionex, ซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย) สำหรับปริมาณแป้งเม็ดสีเหลือง(ส่วนคาร์โบไฮเดรตที่ไม่ละลายน้ำ) ถูกบ่มที่ช่วยให้เอทานอลที่จะระเหยและละลายในddH2O 10 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียส0.5 มิลลิลิตรของเม็ดแป้ง gelatinized ถูกย้ายไปหลอด0.5 มิลลิลิตร 200 มิลลินาอะซิเตท (pH 5.5 ) และได้รับการย่อยด้วยหกหน่วยของ-amyloglucosidase และสองหน่วยงานของA-อะไมเลส 4 หรือ 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียสสำหรับใบหรือเมล็ดพืชตามลำดับ. วิธีการแก้ปัญหาของปริมาณเทียบเท่าและองค์ประกอบที่ถูกบ่มโดยไม่ต้องเอนไซม์และใช้เป็นตัวควบคุม. ตัวอย่างการเปิดตัวของกลูโคสถูกกำหนดที่340 นาโนเมตรโดยใช้กลูโคสAssay (GAHK20; Sigma-Aldrich เซนต์หลุยส์ MO) ด้วยspectrophotometer (DU-640; Beckman Coulter, เบรีย, CA, USA) ปริมาณแป้งที่คำนวณได้ถึง 90% ของน้ำตาลกลูโคสเนื้อหา