3. Results
3.1. Effect of BAP and NAA on the in vitro cultured leaf explants
BAP and NAA are plant growth regulators that are established forin duction of shoots and roots respectively in tissue culture procedures.
The leaf explants of S. ciliata were induced for shoots through a callus phase by culturing the leaf discs on media containing both BAP and NAA.
The effect of BAP and NAA alone or in combination on shoot regeneration from leaf explants is presented in Table 1.
In the presence of NAA alone, the explants showed formation of roots without an intervening callus (Table 1).
On MS basal medium supplemented with BAP alone, the leaf explants expanded upto twice their size in a week time but turned brown in the next 7 days.
In the presence of both BAP and NAA in culture medium, theex plants at the cut ends grew into a large dark green callus that covered the entire explants within next 21 days (Fig. 1).
A piece of callus from a four-week-old culture, on subculture to the media of same composition from which it was derived, differentiated pinkish shoot buds within a week.
By 7 days, these buds grew into multiple shoots with dark green leaves (Fig. 1).
At low concentration of NAA : BAP combinations, the callus induced formation of shoots without rooting while as on higher concentrations, the callus differentiated into well developed shoots and roots (Table 1).
Thoughthe shoot regeneration was observed in most of the combinations,maximum response (81%) with a mean number of 3.4 ± 0.62 shoots per explant in 6 weeks culture period was observed on MS medium supplemented with 4.40 M BAP + 5.40 M NAA (Fig. 2).
Also,75% shoot regeneration with mean of 2.2 ± 0.58 shoots/explant on medium supplemented with 13.2 M BAP + 5.40 M NAA was obtained (Fig. 2).
It was observed that although leaf disc inoculated on MS + BAP (22.0 M) + NAA (10.8 M) produced only about 37.2% of shoot regeneration; it produced highest number of shoots per explants (4.8 ± 0.37) with extensive rooting (Fig. 3).
The shoots when transferred to MS medium without any hormones produced roots within a week at 100% frequency.
Though overall regeneration pattern confirm the earlier reports, the frequency of shoot regeneration observed in the present study involving S. ciliata was observed to be on lower side as compared to the shoot regeneration in the related Spilanthes acmella reported earlier [20,26].
This difference could be attributed to the variation in genetic make up of the plant playing a role in the process of shoot regeneration.3.2. Acclimatization of tissue culture raised S. ciliata plant lets
The in vitro raised S. ciliata plant lets were washed with water to remove the adhering agar and transferred to the soil. The plants were acclimatized by covering the plants with polyethylene bags to maintain high humidity for 6–7 days and regularly irrigated.
After7 days, the polyethylene bags were removed and plants allowed to grow under natural conditions. Gradual hardening after transfer
3. ผลการทดลอง
3.1 ผลของ BAP และ NAA บนในหลอดทดลองเพาะเลี้ยงชิ้นใบ
BAP และ NAA มีการเจริญเติบโตของพืชที่มีการจัดตั้ง duction Forin ของหน่อและรากตามลำดับในขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ.
ชิ้นส่วนใบของเอส ciliata ถูกเหนี่ยวนำสำหรับการถ่ายภาพผ่านขั้นตอนการแคลลัสโดย การเพาะเลี้ยงแผ่นใบบนสื่อที่มีทั้ง BAP และ NAA.
ผลของ BAP และ NAA เดียวหรือร่วมในการถ่ายทำการฟื้นฟูจากชิ้นส่วนใบจะถูกนำเสนอในตารางที่ 1
ในการปรากฏตัวของ NAA เพียงอย่างเดียวชิ้นแสดงให้เห็นว่าการก่อตัวของรากโดยไม่ต้องมีการแทรกแซง แคลลัส (ตารางที่ 1).
ใน MS กลางฐานเสริมด้วย BAP คนเดียวชิ้นใบขยายได้ไม่เกินสองเท่าของขนาดของพวกเขาในเวลาหนึ่งสัปดาห์ แต่หันน้ำตาลใน 7 วันถัดไป.
ในการปรากฏตัวของทั้งสอง BAP และ NAA ในอาหารเลี้ยงเชื้อ, พืช theex ที่ตัดปลายกลายเป็นแคลลัสขนาดใหญ่สีเขียวเข้มที่ครอบคลุมชิ้นส่วนทั้งหมดภายใน 21 วันถัดไป (รูปที่ 1)..
ชิ้นส่วนของแคลลัสจากวัฒนธรรมสี่สัปดาห์เก่าในวัฒนธรรมสื่อขององค์ประกอบเดียวกันจากที่ที่มัน ได้มา, ที่แตกต่างตายิงสีชมพูภายในสัปดาห์.
โดย 7 วัน, ตาเหล่านี้เติบโตเป็นหน่อหลายที่มีใบสีเขียวเข้ม (รูปที่ 1).
ที่ความเข้มข้นต่ำของ NAA:. รวมกัน BAP, แคลลัสเหนี่ยวนำให้เกิดการก่อตัวของยอดโดยไม่ต้องขจัดขณะที่ความเข้มข้นบนที่สูงขึ้นแคลลัสแตกต่างเข้าไปในยอดการพัฒนาที่ดีและราก (ตารางที่ 1)
Thoughthe ยิงฟื้นฟูเป็นข้อสังเกตในส่วนของชุด การตอบสนองสูงสุด (81%) มีจำนวนเฉลี่ย 3.4 ± 0.62 ยอดต่อชิ้นในระยะเวลาการเลี้ยง 6 สัปดาห์พบว่าในอาหารสูตร MS ที่เติม 4.40 m? BAP + 5.40 m? NAA (รูปที่. 2).
นอกจากนี้ 75% ยิง การฟื้นฟูที่มีค่าเฉลี่ย 2.2 ± 0.58 หน่อ / ชิ้นบนสื่อเสริมด้วย 13.2? M BAP + 5.40 m? NAA ได้ (รูปที่. 2).
มันถูกตั้งข้อสังเกตว่าแม้ว่าแผ่นดิสก์ใบเชื้อใน MS + BAP (22.0? M) + NAA (10.8 M) ผลิตเพียงประมาณ 37.2% ของการฟื้นฟูยิง; ผลิตจำนวนสูงสุดของยอดต่อชิ้น (4.8 ± 0.37) กับรากที่กว้างขวาง (รูปที่. 3).
หน่อเมื่อโอนไปยังสูตร MS โดยไม่ต้องฮอร์โมนที่ผลิตรากภายในสัปดาห์ที่ 100% ความถี่.
แม้ว่ารูปแบบการฟื้นฟูโดยรวมยืนยันรายงานก่อนหน้านี้ ความถี่ของการฟื้นฟูการถ่ายสังเกตในการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับเอส ciliata พบว่าจะเป็นด้านที่ต่ำกว่าเมื่อเทียบกับการงอกใหม่ของการถ่ายภาพในผักคราดเกี่ยวข้อง acmella รายงานก่อนหน้านี้ [20,26].
ความแตกต่างนี้สามารถนำมาประกอบกับการเปลี่ยนแปลงใน พันธุกรรมแต่งหน้าของพืชที่มีบทบาทในกระบวนการของการถ่าย regeneration.3.2 ที่ เคยชินกับสภาพของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชเอสยก ciliata ช่วย
ในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชยก ciliata เอสช่วยให้ได้รับการล้างด้วยน้ำเพื่อเอาวุ้นยึดมั่นและโอนไปยังดิน พืชที่ได้รับการปรับสภาพโดยครอบคลุมพืชที่มีถุงพลาสติกชนิดเพื่อรักษาความชื้นสูง 6-7 วันและชลประทานอย่างสม่ำเสมอ.
After7 วัน, ถุงพลาสติกถูกถอดออกและพืชได้รับอนุญาตให้เติบโตภายใต้สภาพธรรมชาติ แข็งค่อยเป็นค่อยไปหลังจากการถ่ายโอน
การแปล กรุณารอสักครู่..