DNA was extracted from legs slices

DNA was extracted from legs slices of Partial abdomen to avoid possible contamination by recent prey items. was extracted a high-sal extraction protocol modified from Pogson et al. (995) Anderson (2000). Extracted DNA pellets were stored The mitochondrial ochrome c oxidase subunit sequenced using universal primers COI/LCon from et al. O994) PCR am containing 1x HotStarTaq Mix (QIAGEN), 2.5 uL of 10 uM primer mix approximately 1 10 ng DNA template, and water. Reactions were run on a Stratagene RoboCycler with the following profile:95 Cfor 15 min: 35 cycles of 94 sc for 1 min, 40-45 C for l min C for 1 min 30 s; 72 oC for 7 mi PCR pr ere stored at -20 PC until further analysis gel-purified using 1% agarose gels and a QIAquick Gel Extraction Kit (QIA purified PCR products were sequenced in both directions using BigDye Terminator mix version 3.0 (PE Applied Biosystems) following modified protocol for and 1/8 reactions. Sequencing reactions were carried out either in 10-HL volumes containing 1 HL of 3.2 HM primer 4 HL BigDye of erminator mix, and a template/sterile water mixture containing 5-20 ng template or 20-HL volumes containing 1 HL of 3.2 HM primer, 1 HL of BigDye Terminator mix, 3.5 uL of 5x sequencing buffer, and a tem- plate/sterile water ontaining 5-20 ng template Cycle sequencing reactions were run on a GeneAmp PCR System 9700 thermal cycler (PE Applied Biosystems) following the manufacturer's protocol except that the number of cycles was increased to 99. Purification of the sequencing reactions was accomplished using Centri-Sep spin columns (Princeton Separations) packed with Sephadex G-50 Fine resin (Amersham Biosciences). Purified cycle-sequencing reactions were electro- phoresed on ABI PRISM 377 DNA sequencer (Applied Biosystems). Sequences of each haplotype present a available in GenBank under Accession nos AY790473- AY790532.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอถูกแยกจากชิ้นขาของท้องบางส่วนเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนได้ โดยเหยื่อรายการล่าสุด คือแยกโพรโทคอแซลสูงสกัดที่แก้ไขจาก Pogson et al. (995) แอนเดอร์สัน (2000) เม็ดสกัดดีเอ็นเอที่ถูกเก็บไว้ย่อย c oxidase ochrome ยลที่เรียงลำดับโดยใช้ไพรเมอร์สากล COI/LCon จาก O994 et al.) PCR:ประกอบด้วย 1 x HotStarTaq ผสม (QIAGEN), 2.5 uL 10 uM รองพื้นผสมประมาณ 1 10 ฉบับดีเอ็นเอต้นแบบ และน้ำ ปฏิกิริยาที่ถูกเรียกใช้บน RoboCycler การ Stratagene กับการต่อโปรไฟล์: 95 Cfor รอบ 15 นาที: 35 94 sc สำหรับ 1 นาที 40-45 C สำหรับลิตรนาทีสำหรับ 1 นาที 30 s; C 72 oC สำหรับ pr PCR 7 mi โบราณเก็บไว้ที่ -20 เครื่องคอมพิวเตอร์จนกว่าการ วิเคราะห์โดยใช้ 1% agarose เจบริสุทธิ์เจลและชุดสกัดเจ QIAquick (QIA บริสุทธิ์ PCR ผลิตภัณฑ์ถูกเรียงลำดับในทิศทางทั้งใช้เทอร์มิเนเตอร์ BigDye ผสมรุ่น 3.0 (ศาสตร์เชิงชีวภาพใช้ PE) ต่อไปนี้การปรับเปลี่ยนโพรโทคอลสำหรับและ 1/8 ปฏิกิริยา ลำดับปฏิกิริยาดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งในปริมาณ 10-HL ที่ประกอบด้วย HL 1 พื้น 3.2 HM 4 HL BigDye erminator ผสม และที่ประกอบด้วยแบบฉบับหรือ 20 HL วอลุ่มที่ประกอบด้วย HL 1 พื้น 3.2 HM, HL 1 ของเทอร์มิเนเตอร์ BigDye 5-20 ส่วนผสมน้ำหมันแม่ผสม uL 3.5 ของบัฟเฟอร์ลำดับ x 5 และ ontaining ยการแผ่น/ผ่านการฆ่าเชื้อน้ำที่ 5-20 ฉบับแม่วงจรลำดับปฏิกิริยาถูกเรียกใช้บน cycler 9700 GeneAmp PCR ระบบความร้อน (PE ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ) ตามโพรโทคอลผู้ผลิตยกเว้นว่าจำนวนรอบเพิ่มเป็น 99 บริสุทธิ์ของปฏิกิริยาลำดับสามารถทำได้โดยใช้คอลัมน์หมุน Centri Sep (Princeton Separations) บรรจุ ด้วยเรซิน Fine Sephadex G-50 (Amersham ออก) ปฏิกิริยาลำดับรอบบริสุทธิ์ถูก phoresed ไฟฟ้าบน 377 ปริซึม ABI DNA sequencer (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ) ลำดับของ haplotype ละปัจจุบันสามารถใช้ใน GenBank ภายใต้หมายเลขทะเบียน AY790473 - AY790532

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอที่สกัดจากขาหน้าท้องชิ้นของบางส่วนที่จะหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนที่เป็นไปได้โดยเหยื่อรายล่าสุด ถูกสกัดโปรโตคอลการสกัดสูง Sal ดัดแปลงมาจาก Pogson et al, (995) เดอร์สัน (2000) สกัดดีเอ็นเอเม็ดถูกเก็บไว้ยล ochrome c เด subunit ติดใจใช้ไพรเมอร์สากล COI / LCon จาก et al, O994) PCR กำลังมี 1x HotStarTaq Mix (QIAGEN) 2.5 uL 10 UM ไพรเมอร์ผสมประมาณ 1 10 NG ดีเอ็นเอแม่แบบและน้ำ ปฏิกิริยาวิ่งบน Stratagene RoboCycler กับรายละเอียดต่อไปนี้: 95 Cfor 15 นาที: 35 รอบของ 94 SC เป็นเวลา 1 นาที, 40-45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา L นาทีเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที 30 วินาที; 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 ไมล์ PCR PR ERE เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 PC จนการวิเคราะห์ต่อไปเจลบริสุทธิ์โดยใช้เจล agarose 1% และชุด QIAquick เจลสกัด (QIA บริสุทธิ์ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีลำดับขั้นตอนในทั้งสองทิศทางใช้ BigDye Terminator รุ่น 3.0 (PE Applied Biosystems ผสม ) ตามโปรโตคอลการแก้ไขและ 1/8 ปฏิกิริยา. ปฏิกิริยาลำดับได้ดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งใน 10 HL ไดรฟ์ที่มี 1 HL 3.2 HM ไพ​​รเมอร์ HL 4 BigDye ผสม erminator และแม่แบบ / สารผสมน้ำหมันมี 5-20 NG แม่แบบหรือ 20 HL ไดรฟ์ที่มี 1 HL 3.2 HM ไพ​​รเมอร์ HL 1 ของ BigDye ผสม Terminator 3.5 uL ของบัฟเฟอร์ลำดับ 5x และแผ่น tem- / น้ำหมัน ontaining 5-20 NG แม่แบบวงจรปฏิกิริยาลำดับถูกรันบนระบบ PCR GeneAmp 9700 Cycler ความร้อน (PE Applied Biosystems) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิตยกเว้นว่าจำนวนรอบที่เพิ่มขึ้นถึง 99 บริสุทธิ์ของปฏิกิริยาลำดับก็ประสบความสำเร็จโดยใช้ Centri ก.ย. คอลัมน์ปั่น (พรินซ์ตันแยก) เต็มไปด้วย Sephadex G-50 เรซินวิจิตร (Amersham ชีววิทยาศาสตร์) บริสุทธิ์ปฏิกิริยาวงจรลำดับถูก phoresed electro- บน ABI PRISM 377 ซีเควนดีเอ็นเอ (Applied Biosystems) ลำดับของแต่ละ haplotype นำเสนอที่มีอยู่ใน GenBank ภายใต้การภาคยานุวัติ Nos AY790473- AY790532

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอจากขาแว่นของท้องบางส่วนเพื่อเลี่ยงการปนเปื้อนจากรายการเหยื่อล่าสุด สารสกัดจากแซลสูงโปรโตคอลการพอกสัน et al . ( 995 ) แอนเดอร์สัน ( 2000 ) เม็ดสารสกัดดีเอ็นเอที่ถูกตัด ochrome ซีออกซิเดสหน่วยย่อยนี้ใช้ไพรเมอร์ที่สากล ลำปาง / lcon จาก et al . o994 ) ซึ่งเป็นส่วนผสมที่มี hotstartaq 1x ( เพิ่ม ) , 2.5 UL 10 ผสมรองพื้นอืมประมาณ 10 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ และน้ำ ปฏิกิริยาที่ถูกวิ่งบน robocycler stratagene ด้วยรายละเอียดต่อไปนี้ : 95 C เป็นเวลา 15 นาที 35 รอบ 94 ม 1 นาที 40-45 C L มิน C เป็นเวลา 1 นาที 30 วินาที ; 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 มิ PCR PR ก่อนเก็บไว้ที่ - 20 พีซีจนกว่าเจลการวิเคราะห์เพิ่มเติมบริสุทธิ์ใช้เจลและ qiaquick โรส 1 เปอร์เซ็นต์ เจลสกัดบริสุทธิ์ผลิตภัณฑ์ PCR Kit ( มั่นเป็นลำดับในทั้งสองทิศทาง ใช้รุ่นผสมหุ่น bigdye 3.0 ( PE Applied Biosystems ) ตามพิธีสารเพื่อแก้ไขและ 1 / 8 ปฏิกิริยา ปฏิกิริยาดังกล่าว ได้ดำเนินการทั้งใน 10-hl ปริมาณบรรจุ 1 HL 3.2 HM รองพื้น 4 HL bigdye ของ erminator ผสมและแม่แบบ / ฆ่าเชื้อน้ำผสมที่ประกอบด้วย 5-20 ของแม่แบบหรือปริมาณ 20-hl ประกอบด้วย 1 HL 3.2 หืม ไพรเมอร์ 1 HL ผสมหุ่น bigdye 3.5 UL ของ 5x การบัฟเฟอร์ และเท็มเพลท / ฆ่าเชื้อน้ำ ontaining 5-20 ของแม่แบบวงจรลำดับปฏิกิริยาวิ่งบน geneamp PCR ระบบ Thermal cycler 9700 ( PE Applied Biosystems ) ต่อไปนี้ของผู้ผลิต ( ยกเว้นที่จำนวนรอบเพิ่มขึ้นเป็น 99 การจัดลำดับของปฏิกิริยาได้ โดยใช้ centri ก.ย. ปั่นคอลัมน์ Sephadex G-50 พรินซ์ตันแยก ) ที่บรรจุด้วยเรซิน ( ปรับที่ Biosciences ) วงจรปฏิกิริยาการเป็นบริสุทธิ์โรง - phoresed ในปริซึมเป็น DNA sequencer ABI ( Applied Biosystems ) ลำดับของแต่ละพบ ปัจจุบัน ที่มีอยู่ในขนาดภายใต้การ ay790473 nos - ay790532 .