2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุ
โปรตีนข้าว ( Oryza sativa L . ) ที่แยกได้จาก energenetics International , Inc ( คีโอคุก , IA ) โปร validase FP มีสมาธิและการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสสมาธิก็กรุณาให้หุบเขาวิจัยองค์กร ( ใต้โค้งใน ) โปรติเอสเป็นกลาง ( NP ) โดยไบโอแมว INC ( ทรอย , VA )วาล เป็นเชื้อราที่ผลิตโดยการหมักในลูกเต้าของสายพันธุ์ A . oryzae และมีทั้ง endoprotease โซเพปทิเดสและกิจกรรม AP เป็นเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอสเตรียมจาก B . licheniformis ซึ่งครอบครองกิจกรรมโดเพปทิเดส . โดย np เป็นสำคัญ โดเพปทิเดสผลิตจาก B . subtilis . เอนไซม์เหล่านี้มีการใช้งานในช่วง pH ที่เป็นกลางเพื่อเหล่านี้ถูกเลือกเพราะพวกเขามีการใช้บ่อยในกระบวนการอุตสาหกรรมกับทดล ที่มีคุณภาพสูง ี่ 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic , กรด ( สาร ) และ dpph ซื้อมาจาก sigmaealdrich Chemical Co . ( St . Louis , MO , USA ) 2,20-azobis ( 2-amino-propane ) : ( aaph ) และ 220 azino ทวิ ( 3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ) diammonium เกลือถูกซื้อจาก Wako สารเคมี ( Richmond , VA ) สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดและตัวทำละลาย HPLC วิเคราะห์หรือเกรด ระบบกรอง ( แบบไม่ 8050 ) และ cellulosemembranes สำหรับการเตรียมของโปรตีน คือ ซื้อจากบริษัท มิลลิ ( โตเกียวมา )
2.2 . การเตรียมโปรตีนข้าวของ
สามทางจุลินทรีย์ วาล , AP , และ NP , ใช้สุดข้าวโปรตีนเปปไทด์แยกตามแนวทางจากผู้ผลิตที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โปรตีนเป็นครั้งแรกและถูกบดในน้ำ 50 กรัม / 500 กรัม และโดยทางที่บุคคลที่ความเข้มข้น 1 กรัม / 50 กรัม ( เอนไซม์ / แผ่น )เอนไซม์เอนไซม์จำนวน 6 H ในอ่างน้ำที่ 55 C ภายใต้สั่น สำหรับวาลและ NP , ปฏิกิริยา mixturewas ปรับ pH 7.0 ใช้ 0.5 ลิตรโมล NaOH เท่ากันหรือ 0.6 โมล / ลิตร hcl ในระหว่างการย่อยสลายเท่ากัน . สำหรับ การแก้ปัญหาคือการปรับให้พีเอชที่เหมาะสม 10 . ปฏิกิริยาของเอนไซม์ถูกยกเลิกโดยต้มผสม 5 นาที ส่วนผสมแต่ละ คือ ที่ระดับ 15 ,000 กรัม และส่วนที่ละลายน้ำแล้วกรองใช้กรองกระดาษ ( whatman 4 ) สำหรับส่วนเพิ่มเติม .
2.3 การกำหนดระดับของการย่อยสลาย ( DH )
DH ของโปรตีนข้าว โดยทั้งสามถูกกำหนดผ่านทางกรด trinitrobenzenesulfonic ( tnbs ) ปฏิกิริยาจากการก่อตั้งขึ้นก่อนหน้านี้โปรโตคอล ( Zhang Li &โจว , 2010 )
2.4 .การผสมของโปรตีนโปรตีนเป็นอัลตร้า
รวบรวมของกรองใช้กรองหน่วยเป็นมิลลิ 8050 ผ่านเซลลูโลสเมมเบรนที่มีน้ำหนักโมเลกุลแตกต่างกัน ( มหาชน ) จำกัดส่วนของถูกเจือจางด้วยน้ำและ Ultra กรองผ่านเยื่อด้วย 10 K ดาลตัน ( kDa ) น้ำหนักโมเลกุลตัดออก ( mwco 276 กิโลปาสคาล ) ภายใต้ก๊าซไนโตรเจนที่จะจ่ายสองเศษส่วน : รีเทนเทท ( เศษ 1 , F1 , เป็นตัวแทนของ 10 kDa ) และซึม ( MW < 10 กิโล ) การแผ่ซ่าน ลดลง 3 กิโล mwco เป็นพิเศษ กรองผ่านเมมเบรนเพื่อขอรับรีเทนเททวินาที ( เศษ 2 , F2 ,เป็นตัวแทนของระหว่าง 3 และ 10 kDa ) และเพอ . การแผ่ซ่านเพิ่มเติมพิเศษกรองผ่านเมมเบรน 1 กิโล mwco ให้ผลรีเทนเททที่สาม ( ส่วน 3 F3 แทนของระหว่าง 1 และ 3 กิโลดาลตัน ) และซึม ( เศษ 4 , F4 , เป็นตัวแทนของ < 1 กิโล ) retentates และแทรกซึมอยู่แห้งที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C จนถึงการวิเคราะห์ต่อไป
.
2.5การวัดความจุของออกซิเจน Radical Absorbance ( ORAC )
( ORAC ศึกษาจลนศาสตร์ วัด peroxylradical การกิจกรรมของเปปไทด์ที่มีสารต้านอนุมูลอิสระเป็นมาตรฐาน ( Hogan , จาง , หลี่ หวัง &โจว , 2009 ) ี่ใช้เป็นโพรบเรืองแสงและ peroxyl อนุมูลอิสระถูกสร้างขึ้นจาก aaph 75 มิลลิโมล / ลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 )ค่า ORAC คือแสดงออกในไมโครโมของสารที่มีต่อกรัมน้ำหนักแห้งของ ( mmoles te / g )
2.6 การวัดผลของการจัดกิจกรรม dpph
( ดำเนินการตามรายงานก่อนหน้านี้ ขั้นตอนการใช้ dpph มั่นคง ( Zhou Yin & , ยู , 2005 ) ปฏิกิริยาที่ผสมบรรจุ 100 ml ของแต่ละตัวอย่างและ 100 มล. 0.2 มิลลิโมล / ลิตร dpph แก้ไขเตรียมไว้แล้วนในตอนนี้ nmwas วัดกับเปล่าคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ 40 นาทีและ 50 มิลลิโมล / ลิตรและกรดแอสคอร์บิกบาทใช้สำหรับการเปรียบเทียบ
2.7 . การวัดผลของการจัดกิจกรรมþ Abbr
( การปฏิบัติตามการรายงานก่อนหน้านี้โปรโตคอล ( โจว , ล็อกส์& , ยู , 2004 )Abbr þเตรียมออกซิไดซ์ 5 mmol / L สารละลายของ Abbr ด้วยแมงกานีสไดออกไซด์ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 1.0 มล. Abbr þที่มีค่าเริ่มต้นที่คุณประมาณ 0.7 nm และ 80 มิลลิลิตร หรือสารโปรตีนที่เป็นมาตรฐานของสารต้านอนุมูลอิสระ นที่คุณ nm วัดต่อไปนี้ 1 นาทีของปฏิกิริยาและสารเทียบเท่าคำนวณได้โดยใช้มาตรฐานโค้งเตรียมสาร .
2.8 . ศึกษาผลของโปรตีนในเนื้อสัตว์ที่เลือกของการออกซิเดชันของไขมัน
จากเศษส่วนที่มี ORAC แข็งแรงหรือ dpph การคัดเลือกและประเมินการจัดกิจกรรมเพิ่มเติมสำหรับต้านอนุมูลอิสระต้านการออกซิเดชันของไขมันในเนื้อดินเนื้อวัวสดจดจ้องที่ได้รับจากร้านขายของชำท้องถิ่นและพื้นดินผ่านจาน เนื้อคน ( 250 กรัม ) ต่อโฮโมมีหรือไม่มีโปรตีนสดโดยแมโครของเครื่องกำเนิดไฟฟ้าและวางลงใน 50 ml ขายขาด , ชั่งน้ำหนัก และไฟฟ้าเพื่อเอาอากาศเอาไว้ เพื่อส่งเสริมลิปิดออกซิเดชันเนื้อผสมสุกที่อุณหภูมิภายในของ 71 C ในการอาบน้ำ อุณหภูมิภายในถูกตรวจสอบโดย needlesize thermocouple แทรกเข้าไปในศูนย์ความร้อนของหลอด ในการปรุงอาหาร หลังจากเย็นเพื่ออุณหภูมิห้อง , บดและปรุงสุกเนื้อจำนวนวางไว้ในถาด , ปกคลุมด้วยฟิล์มพีวีซี และเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสขอบเขตของการออกซิเดชันของไขมันในเนื้อแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยเท่ากับกรดปฏิกิริยาสาร ( ปกติ ) ในวันที่ 1 , 8 และ 15 โพสต์อาหาร ( โฮแกน et al . , 2009 ) สุดท้ายกันได้กับเส้นโค้งปกติมาตรฐานและแสดงเป็นมิลลิกรัมของมาลอนไดอัลดีไฮด์ ( MDA ) เทียบเท่าต่อกิโลกรัมของตัวอย่าง ( มก. ( เทียบเท่า / กก. ) .
2.9 .
สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลค่าเฉลี่ยของค่าในแต่ละการทดสอบเปรียบเทียบโดยใช้ t-test twosample . ข้อมูลจะถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย SD ( ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ) ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ เมื่อค่า P คือ < 0.05 ( SPSS for Windows Version 10.0.5 . , 1999 ) สองหาง หาค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน ทดสอบ มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่าง หมายถึง
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)