In vitro α-amylase inhibition study

In vitro α-amylase inhibition study (Apostolidis,
2007). Twenty-five microliters of 20% (v/v) AP
extract and 25 μl of 20 mM phosphate buffer pH 6.9,
containing porcine α-amylase (Cat. No. 10080, Sigma
Aldrich Chemical Co, Steinheim, Germany) at a concentration
of 0.5 mg/ml were incubated at 25°C for
10 min. After pre incubation, 25 μl of 0.5% starch
(R & M Chemicals, Essex, UK) solution in 20 mM
phosphate buffer, pH 6.9, was added. The reaction
mixtures were then incubated at 25°C for 10 min.
The reaction was stopped with 50 μl of 96 mM 3,5-
dinitrosalicylic acid (DNS) (Cat. No. D 0550, Sigma
Aldrich Chemical Co, USA) color reagent. The microplate
was then incubated in a boiling water bath
for 5 min and cooled to room temp. Absorbance (A)
was measured at 540 nm. Percent inhibition was calculated
as follows:
Control incubations represent 100% enzyme
activity and were conducted in a similar way by
replacing extracts with vehicle (25 μl dimethylsulfoxide
and distilled water). For blank incubation (to
allow for absorbance produced by the extract), enzyme
solution was replaced by buffer solution and
absorbance recorded. Separate incubation carried out
for reaction t = 0 was performed by adding samples
to DNS solution immediately after addition of the
enzyme. The concentration of the extract required to
inhibit the activity of the enzyme by 50% (IC50) was
calculated by regression analysis. Experiments were
performed in duplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Α-amylase ในยับยั้งการศึกษา (Apostolidis,
2007) ยี่สิบห้า microliters 20% (v/v) AP
สารสกัดและ μl 25 ของ 20 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.9,
ประกอบด้วยช่วงα-amylase (แมว หมายเลข 10080 ซิก
Steinheim เยอรมนี บริษัทเคมี Aldrich) ที่เข้มข้น
ของ 0.5 mg/ml มี incubated ที่ 25 ° C สำหรับ
10 นาที หลังจากฟักตัวก่อน μl 25 ของแป้ง 0.5%
(R & M เคมี เอสเซ็กซ์ โซลูชัน UK) ใน 20 มม.
เพิ่มฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 6.9 ปฏิกิริยา
น้ำยาผสมได้แล้ว incubated ที่ 25° C สำหรับ 10 นาที
หยุดปฏิกิริยา ด้วย μl 50 มม. 96 3,5-
dinitrosalicylic กรด (DNS) (แมว หมายเลข D 0550 ซิก
บริษัทเคมี Aldrich สหรัฐอเมริกา) รีเอเจนต์สี Microplate
incubated ถูกแล้วในน้ำน้ำเดือด
สำหรับ 5 นาที และระบายความร้อนด้วยการพักชั่วคราว Absorbance (A)
ถูกวัดที่ 540 nm มีคำนวณเปอร์เซ็นต์ยับยั้ง
ดัง:
incubations ควบคุมแทนเอนไซม์ 100%
กิจกรรม และได้ดำเนินการในลักษณะคล้ายกันโดย
แทนสารสกัดจากยานพาหนะ (25 μl dimethylsulfoxide
และกลั่นน้ำ) สำหรับคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ว่างเปล่า (การ
absorbance ที่ผลิต โดยการสกัดให้), เอนไซม์
โซลูชันถูกแทนที่ ด้วยโซลูชันบัฟเฟอร์ และ
absorbance ที่บันทึก แยกฟักตัวดำเนินการ
สำหรับปฏิกิริยา t = 0 มีดำเนินการ โดยการเพิ่มตัวอย่าง
เพื่อแก้ปัญหา DNS ทันทีหลังจากที่เพิ่ม
เอนไซม์ ความเข้มข้นของสารสกัดที่ต้อง
ยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์ 50% (IC50) ถูก
คำนวณ โดยการวิเคราะห์การถดถอย ได้ทดลอง
ทำสำเนา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอลฟาอะไมเลสในหลอดทดลองและศึกษา ( apostolidis
, 2550 ) ยี่สิบห้าตัวเลข 20 % ( ปริมาตร / ปริมาตร ) สารสกัดจาก AP
25 μลิตร 20 มิลลิเมตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.9
แอลฟาอะไมเลสผสมเลือดหมู ( แมว ไม่ 10080 , Sigma
อัลดริชเคมี Co , steinheim , เยอรมนี ) ที่ระดับความเข้มข้น 0.5 mg / ml
อุณหภูมิ 25 ° C
10 นาทีหลังจากที่ก่อนระยะเวลา 25 μ L 0.5% แป้ง
( R & M สารเคมี , เอสเซ็กซ์สหราชอาณาจักร ) โซลูชั่น 20 mm
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ พีเอช 6.9 , เพิ่ม ปฏิกิริยา
ผสมแล้วอุณหภูมิ 25 ° C 10 นาที
ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดด้วย 96 มม. จำนวน 50 μ L -
dinitrosalicylic acid ( DNS ) ( แมว ไม่ ดี 0550 , Sigma
อัลดริชเคมี Co , USA ) 3 สี ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
จากนั้นบ่มในอ่างน้ำเดือด
5 นาทีและเย็นที่อุณหภูมิห้อง การดูดกลืนแสง ( A )
วัด 540 นาโนเมตรเปอร์เซนต์คำนวณได้ดังนี้

incubations ควบคุมแสดงกิจกรรมของเอนไซม์
100% และได้ดำเนินการในลักษณะที่คล้ายกันโดย
แทนสารสกัดกับรถ ( 25 μไดเมทิลซัลฟอกไซด์ L
และน้ำกลั่น ) เพื่อใช้เวลาว่าง (

ให้การดูดกลืนแสงที่ผลิตโดยสกัดจาก เอนไซม์
โซลูชั่นถูกแทนที่ด้วยสารละลายบัฟเฟอร์และ
การดูดกลืนแสงที่บันทึกไว้ แยกไข่ออกมา
สำหรับปฏิกิริยา t = 0 ได้โดยการเพิ่มตัวอย่าง
DNS โซลูชั่นทันทีหลังจากเพิ่ม
เอนไซม์ ความเข้มข้นของสารสกัดต้อง
ยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์โดย 50% ( ic50 ) คือ
คำนวณโดยการวิเคราะห์สมการถดถอย การทดลอง
แสดงซ้ำ