Method 2 modified from Porebski et

Method 2 modified from Porebski et al (1997). Protocol:
1. Add 700 µL extraction buffer (100 mM Tris-HCl pH 8.0, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA pH 8.0, 2 % w/v CTAB, 0.05 % w/v Polyvinylpyrrolidone [PVP]) to the fine powder before some more grinding, and transferred to a microcentrifuge.
2. Add 1.4 µL (0.2 %) β-mercaptoetanol and 5 µL (10 mg/mL) RNaseA, mix and incubate at 65 ºC for 15 min.
3. Remove the protein contaminant by adding 500 µL of chloroform:isoamyl alcohol (24:1), mix well, and centrifuge at 8,800 rpm for 3 min. Transfer the supernatant to a new tube.
4. Recover DNA by adding 250 µL of 5 M NaCl and 2 volumes of ice-cold ethanol. Centrifuge at 10,000 rpm for 3 min. Rinse the pellet with 70 % ethanol and resuspend in 150 µL of TE. Store the DNA at -20 ºC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีที่ 2 แก้ไขจาก Porebski et al (1997) โพรโทคอล:1. เพิ่มบัฟเฟอร์สกัด µL 700 (100 mM ทริสเรทติ้ง HCl pH 8.0, 1.4 M NaCl, 20 มม. EDTA ค่า pH 8.0, 2% w/v CTAB, 0.05% w/v Polyvinylpyrrolidone [PVP]) กับผงก่อนบดบางมาก และโอนย้ายไปยังไมโคร2. เพิ่ม 1.4 µL (0.2%) Β-mercaptoetanol และ 5 µL (10 mg/mL) RNaseA ผสม และฟักที่ 65 องศาเซลเซียส 15 นาที3. เอาสารปนเปื้อนโปรตีน โดยเพิ่ม 500 µL แอลกอฮอล์คลอโรฟอร์ม: isoamyl (24:1), ส่วนผสม และ supernatant ไปเหวี่ยงที่ 8,800 rpm สำหรับ 3 นาทีหลอดใหม่4. กู้คืนดีเอ็นเอ โดยเพิ่มปริมาณเอทานอลฉ่ำ 2 µL 250 ของ 5 M NaCl เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาที 3 นาทีล้างเม็ด ด้วย 70% เอทานอล และ resuspend ใน 150 µL ของ TE เก็บดีเอ็นเอที่-20 ºC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีที่ 2 การแก้ไขจาก Porebski, et al (1997) โปรโตคอล:
1 เพิ่มบัฟเฟอร์สกัด 700 ไมโครลิตร (100 มิลลิเมตร Tris-HCl ค่า pH 8.0, 1.4 M NaCl, 20 มิลลิเมตร EDTA ค่า pH 8.0, 2% w / v CTAB, 0.05% w / v Polyvinylpyrrolidone [PVP]) เพื่อผงละเอียดก่อนบางบดมากขึ้น และโอนไปยังไมโครได้.
2 เพิ่ม 1.4 ไมโครลิตร (0.2%) β-mercaptoetanol และ 5 ไมโครลิตร (10 mg / ml) RNaseA ผสมและบ่มเพาะที่ 65 องศาเซลเซียสนาน 15 นาที.
3 ลบสิ่งปนเปื้อนโปรตีนโดยการเพิ่ม 500 ไมโครลิตรคลอโรฟอร์ม: เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isoamyl (24: 1) ผสมให้เข้ากันและหมุนเหวี่ยงที่ 8,800 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที โอนใสไปยังหลอดใหม่.
4 การกู้คืนดีเอ็นเอโดยการเพิ่ม 250 ไมโครลิตร 5 M NaCl และเล่ม 2 ของเอทานอลเย็น หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที ล้างอัดเม็ดที่มีเอทานอล 70% และ resuspend ใน 150 ไมโครลิตรของ TE เก็บดีเอ็นเอที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีที่ 2 การแก้ไขจาก porebski et al ( 1997 ) โปรโตคอล :1 . เพิ่ม 700 µผมใช้สาร ( 100 มม. หรือกรดไฮโดรคลอริก pH 8.0 1.4 M NaCl , 20 mM EDTA pH 8.0 , 2 % W / V ctab 0.05 % W / V พอลิวินิลไพร์โรลิโดน [ PVP ] ) ผงละเอียดก่อนหน่อยคัฟ และโอนไปยังไมโครเซนตริฟิวจ์ .2 . เพิ่ม 1.4 µ L ( 0.2% ) และบีตา - mercaptoetanol 5 µ L ( 10 mg / ml ) rnasea ผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 65 º C เป็นเวลา 15 นาที3 . เอาโปรตีนปนเปื้อน โดยการเพิ่ม 500 µชั้นคลอโรฟอร์ม : แอลกอฮอล์ในปริมาณ ( 24 : 1 ) ผสมให้เข้ากัน และเครื่อง 8800 rpm เป็นเวลา 3 นาที ส่งสูงกับหลอดใหม่4 . การกู้คืน ดีเอ็นเอ โดยเพิ่ม 250 µ L 5 M NaCl และ 2 ปริมาณเอทานอล น้ำแข็งเย็น เครื่องที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที บ้วนอาหารเม็ดที่มีเอทานอล 70% และ resuspend 150 µ L ของเต้ ร้าน ดีเอ็นเอ ที่ - 20 º C