MATERIALS AND METHODSFor most of th

MATERIALS AND METHODS
For most of the experiments, we used E. coli K-12
wild type. We also used strain 22-64, which lacks
citrate synthase (10), and strain 309-1, which lacks
a-ketoglutarate dehydrogenase (B. D. Davis et al.,
Federation Proc., p. 211, 1959); both are mutants of
the W strain and were obtained from B. D. Davis. The
strain of E. coli B was obtained from J. Teller of
Worthington Biochemical Corp., Freehold, N.J.
Mutants of K-12 which are unable to convert asparagine
to aspartic acid were isolated after mutagenesis
with ethylmethanesulfonic acid (18). After treatment
with the mutagen, cells were diluted and grown overnight
on membrane filters (Millipore Co., New Bedford,
Mass.) overlying solid growth media. These
filters were transferred to a detection medium, solidified
with 2% agar (Difco), containing 10 mM asparagine
and 20% sucrose. After incubation for 6 hr at
37 C, the membrane filters bearing the colonies were
removed, and the underlying detection medium was
carefully blotted for 1 min with Whatman no. 1 filter
paper in order to absorb amino acids. After drying,
these papers were dipped in 0.5% ninhydrin in acetone.
The conversion of asparagine to aspartic acid
was indicated by a blue spot given by aspartic acid
corresponding to the position of a colony. Blue spots
were distinguishable from the brownish background
given by unconverted asparagine. Absence of a blue
spot indicated the position of a colony with impaired
conversion. Eleven mutants were isolated from 1,500
colonies.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
สำหรับส่วนมากของการทดลองเราใช้อี coli k-12
ป่าประเภท เรายังใช้สายพันธุ์ที่ 22-64 ซึ่งขาด
เทสซิเตรต (10), และความเครียด 309-1 ซึ่งขาด
-ketoglutarate dehydrogenase (bd davis et al,,
สหพันธ์ proc พี 211, 1959...) ทั้งสอง มีการกลายพันธุ์ของสายพันธุ์
กว้างและได้รับจากข ง davis
สายพันธุ์ของอี coli ขที่ได้รับจากเจ พนักงานของ
วอร์ชิงตันคอร์ปทางชีวเคมี. โฮลด์, nj
กลายพันธุ์ของ k-12 ซึ่งไม่สามารถที่จะแปลง asparagine
กรด aspartic ถูกแยกหลังจากฉับ
กับกรด ethylmethanesulfonic (18) หลังการรักษาด้วย
mutagen เซลล์ถูกเจือจางและเติบโตขึ้นในชั่วข้ามคืน
เกี่ยวกับการกรองเมมเบรน (คร่วม. ฟอร์ดใหม่
มวล.) วางสื่อการเจริญเติบโตที่มั่นคง เหล่านี้
กรองถูกย้ายไปกลางการตรวจสอบที่ผลึก
2% วุ้น (difco) ที่มี 10 มิลลิเมตร asparagine
และ 20% น้ำตาลซูโครส หลังจากการบ่มเป็นเวลา 6 ชั่วโมงที่
37 C, กรองเมมเบรนที่มีอาณานิคมอยู่
ออกและสื่อการตรวจสอบเป็นพื้นฐาน
เปื้อนอย่างรอบคอบเป็นเวลา 1 นาทีด้วย Whatman ไม่มี 1 ตัวกรอง
กระดาษเพื่อดูดซับกรดอะมิโน หลังจากการอบแห้ง,
เอกสารเหล่านี้ถูกจุ่มลงใน 0.5% ninhydrin ในอะซิโตน.
แปลง asparagine กรด aspartic
ถูกระบุโดยจุดสีฟ้าที่ได้รับจากกรด aspartic
ที่สอดคล้องกับตำแหน่งของอาณานิคม จุดสีฟ้า
มีความแตกต่างจากพื้นหลังสีน้ำตาล
โดย asparagine เผล่ การขาดงานของสีฟ้า
จุดชี้ให้เห็นตำแหน่งของอาณานิคมที่มีความบกพร่อง
แปลง สิบเอ็ดกลายพันธุ์ที่แยกได้จาก 1,500
อาณานิคม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการและวัสดุ
ส่วนใหญ่ที่ทดลอง เราใช้ E. coli K-12
ชนิดป่า นอกจากนี้เรายังใช้ต้องใช้ 22-64 ซึ่งขาด
ซิเตรต synthase (10), และต้องใช้ 309-1 ซึ่งขาด
เป็น ketoglutarate dehydrogenase (B. D. ส et al.,
สหพันธ์ Proc., p. 211, 1959); ทั้งสองเป็นสายพันธุ์ของ
W สายพันธุ์ และได้รับจากส D. B. ใน
ต้องใช้ของ E. coli B ได้รับจาก J. Teller ของ
ธธิงชีวเคมี Corp. กรรมสิทธิ์ N.J.
Mutants ของ K-12 ซึ่งไม่สามารถแปลงเป็น asparagine
การ aspartic กรดถูกแยกหลัง mutagenesis
มีกรด ethylmethanesulfonic (18) หลังจากรักษา
mutagen เซลล์ถูกผสม และปลูกค้างคืน
บนแผ่นกรองเมมเบรน (จำกัดมาก ใหม่เบดฟอร์ด,
มวล.) เติบโตสื่อเหล่านั้น เหล่านี้
ตัวกรองถูกโอนย้ายไปยังสื่อตรวจสอบ หล่อ
กับ agar 2% (Difco), ประกอบด้วย 10 มม. asparagine
และซูโครส 20% หลังจากบ่ม 6 ชมที่
37 C ตัวกรองเมมเบรนแบริ่งอาณานิคมถูก
เอา และถูกสื่อตรวจสอบ
blotted อย่างใน 1 นาทีด้วยกรอง Whatman no. 1
กระดาษเพื่อดูดซับกรดอะมิโน หลังจากแห้ง,
กระดาษชนิดนี้ถูกจุ่มลงใน ninhydrin 0.5% ในอะซิโตน
การแปลง asparagine กรด aspartic
ถูกตามจุดสีฟ้าให้ ด้วยกรด aspartic
ที่สอดคล้องกับตำแหน่งของโคโลนี สีฟ้าจุด
ได้แตกต่างจากพื้นหลังน้ำตาล
โดย asparagine ยังไม่แปลงแล้ว ขาดงานเป็นสีฟ้า
จุดระบุตำแหน่งของโคโลนีที่มีความบกพร่องทางด้าน
แปลง 11 สายพันธุ์แยกต่างหากจาก 1, 500
อาณานิคม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีใดวิธีหนึ่ง
ซึ่งจะช่วยในการทดลองที่เราใช้งานมากที่สุดผล ประเภท K - 12
ป่า. นอกจากนั้นเรายังใช้ความเมื่อยล้า 22-64 ที่ขาด synthase
citrate ( 10 )และความเมื่อยล้า 309-1 ที่ขาด
- ketoglutarate alcohol dehydrogenase ( B . D .เดวิส et al . Proc
สภา . p . 211 1959 )ซึ่งทั้งสองเป็นข้าวเจ้าของความเมื่อยล้า W
ซึ่งจะช่วยได้และได้จากพ. D . Davis B
ซึ่งจะช่วยลดความตึงเครียดของผลที่ได้รับจากก.ศป.เป็นหมอดูของ
Worthington ทางชีวเคมีแบงกิ้งคอร์ปอเรชั่น freehold . N . J .
ข้าวเจ้าของ K - 12 เปิดห้องเรียนที่ไม่สามารถแปลงเมื่อได้รับความร้อนกรด aspartic
ซึ่งจะช่วยในการแยกเป็นผลผลิต
หลังจากด้วยกรด ethylmethanesulfonic ( 18 ) หลังจากการบำบัดด้วย
mutagen ที่เซลล์มีเจือจางและปลูกพักค้างคืน
ในแผ่นกรองเยื่อ( millipore . co . th ใหม่โรงแรม Bedford
จะมีมิสซา Quechua )ซึนามิน้ำทะเลมีเดียการเติบโตที่แข็งแกร่ง
ตัวกรองเหล่านี้จะถูกโอนไปยังการตรวจจับที่มีขนาดกลางตอกย้ำ
พร้อมด้วย 2% สาหร่ายทะเล( difco )ประกอบด้วย 10 ซูโครสเมื่อได้รับความร้อน
และ 20% มม. หลังจากแสดงระยะฟักตัวสำหรับ 6 ชั่วโมงที่
37 C แผ่นกรองเยื่อที่แบริ่งอาณานิคมที่มี
ซึ่งจะช่วยถอดออกและมีขนาดกลางการตรวจจับพื้นฐานที่เป็นลบ
อย่างละเอียดสำหรับ 1 นาทีพร้อมด้วย whatman ฉบับที่ กระดาษ 1 แผ่นกรอง
ซึ่งจะช่วยในการดูดซับเป็นกรดอะมิโน หลังจากการเป่าผมแห้ง
เอกสารเหล่านี้เป็นจุ่มใน ninhydrin 0.5% ในอะซีโทน.
การแปลงเมื่อได้รับความร้อนกรด aspartic
ซึ่งจะช่วยในการระบุไว้โดยมีจุดสีฟ้าที่ได้ให้ไว้โดยกรด aspartic
ที่ตรงกับตำแหน่งของอาณานิคม สีฟ้าจุด
ก็สามารถแบ่งได้จากพื้นสีน้ำตาลอ่อนที่
ซึ่งจะช่วยให้โดยเมื่อได้รับความร้อนที่ไม่แปลง ไม่มีสีฟ้า
ซึ่งจะช่วยจุดให้บริการที่ได้ระบุไว้ที่ตำแหน่งของดินแดนที่มีระบบการได้ยินบกพร่อง
การแปลง ร้านเซเว่นอีเลฟเว่นข้าวเจ้าก็แยกต่างหากจาก 1 , 500
อาณานิคม