2.4. Mitochondrial membrane potenti

2.4. Mitochondrial membrane potential, mitochondrial mass and
ROS detection
For FACS analysis, 1×105 cells were stained in PBS with the
indicated fluorescent dye for 25 min, washed, and resuspended in
200 μl PBS with 1% FCS. Individual cellular fluorescence signals were
then analyzed using a FACSCalibur (BD Biosciences). Mitochondrial
membrane mass and mitochondrial potential were measured by
staining with MitoTracker Green FM (60 nM; Invitrogen) and
MitoTracker Red (80 nM; Invitrogen), respectively, for 25 min.
Dihydrofluorescein diacetate (10 μg/ml) was used to stain for total
cellular hydrogen peroxide, dihydroethidium (80 μM) for cellular
superoxide, and MitoSox Red (5 μM; Invitrogen) for mitochondrial
superoxide. Antimycin A treatment was performed by treating cells
with vehicle (ethanol) or 20 μMantimycin A (250 μMstock in ethanol)
for 20 min followed by staining with MitoSox Red. Unstained cells
were analyzed as controls and used to gate on live cells for final
analysis using FlowJo software (TreeStar, Ashland, OR). Bar graphs
show combined median fluorescence values of three independent
cultures, with at least 3000 cells analyzed for each. Histograms show
the fluorescence-intensity distribution of cells as a percentage of total
gated cells (% max).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. ยลเมมเบรนมีศักยภาพ ยลมวล และตรวจจับ ROSสำหรับการวิเคราะห์ FACS ภาพ 1 × 105 เซลล์ใน PBS กับการระบุย้อมฟลูออเรสเซนต์ 25 นาที ล้าง และ resuspended ในPBS 200 μl กับ FCS 1% มีสารเรืองแสงมือถือแต่ละสัญญาณแล้ว วิเคราะห์โดยใช้ FACSCalibur (วิทยาศาสตร์ชีวภาพในระดับ BD) ยลศักยภาพโดยรวม และยลเมมเบรนถูกวัดโดยย้อมสี ด้วย MitoTracker เขียว FM (60 nM Invitrogen) และสีแดง MitoTracker (80 nM Invitrogen), ตามลำดับ สำหรับ 25 นาทีDihydrofluorescein diacetate (10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ใช้สีย้อมทั้งหมดเซลลูลาร์ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ dihydroethidium (80 ไมครอน) สำหรับมือถือซูเปอร์ออกไซด์ และสีแดง MitoSox (ระดับ 5 μ m Invitrogen) สำหรับยลซูเปอร์ออกไซด์ Antimycin A การรักษาทำ โดยการรักษาเซลล์ยานพาหนะ (เอทานอล) หรือ 20 μMantimycin (μMstock 250 ในเอทานอล)สำหรับ 20 นาทีตาม ด้วยการย้อมสีด้วยสีแดง MitoSox เซลล์ unstainedวิเคราะห์เป็นตัวควบคุม และใช้ประตูบนเซลล์สดสำหรับรอบสุดท้ายวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo (TreeStar แอชแลนด์ OR) กราฟแท่งแสดงค่าเรืองแสงค่าเฉลี่ยรวมของสามอิสระวัฒนธรรม วิเคราะห์สำหรับแต่ละเซลล์น้อย 3000 ดูฮิสโตแกรมการกระจายความเข้มของสารเรืองแสงของเซลล์เป็นเปอร์เซ็นต์ของผลรวมgated เซลล์ (%สูงสุด)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 เมมเบรนที่มีศักยภาพยลมวลยลและ
การตรวจสอบ ROS
สำหรับการวิเคราะห์มาซึ่ง 1 × 105 เซลล์มีการย้อมในพีบีเอสกับ
สีย้อมเรืองแสงที่ระบุไว้ 25 นาทีล้างและ resuspended ใน
200 ไมโครลิตรพีบีเอสกับ 1% FCS บุคคลสัญญาณโทรศัพท์มือถือเรืองแสงได้รับการ
วิเคราะห์โดยใช้ FACSCalibur (BD ชีววิทยาศาสตร์) ยล
มวลเมมเบรนและศักยภาพยลถูกวัดโดย
การย้อมสีด้วย MitoTracker กรีนเอฟเอ็ม (60 นาโนเมตร; Invitrogen) และ
MitoTracker แดง (80 นาโนเมตร; Invitrogen). ตามลำดับสำหรับ 25 นาที
Dihydrofluorescein diacetate (10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ถูกใช้ในการเปื้อนสำหรับทั้งหมด
โทรศัพท์มือถือเปอร์ออกไซด์ไฮโดรเจน dihydroethidium (80 ไมครอน) สำหรับโทรศัพท์มือถือ
superoxide และ MitoSox แดง (5 ไมครอน; Invitrogen) สำหรับยล
superoxide Antimycin การรักษาที่ได้ดำเนินการโดยการรักษาเซลล์
กับยานพาหนะ (เอทานอล) หรือ 20 μMantimycin A (250 μMstockในเอทานอล)
เป็นเวลา 20 นาทีตามด้วยการย้อมสีด้วย MitoSox แดง ไม่มีรอยเปื้อนเซลล์
ถูกนำมาวิเคราะห์เป็นตัวควบคุมและใช้ในการประตูต่อเซลล์สดสุดท้าย
วิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo (TreeStar, แอชแลนด์, OR) กราฟแท่ง
แสดงรวมค่าการเรืองแสงเฉลี่ยของสามอิสระ
วัฒนธรรมที่มีอย่างน้อย 3000 เซลล์วิเคราะห์สำหรับแต่ละ Histograms แสดง
การกระจายการเรืองแสงความเข้มของเซลล์เป็นเปอร์เซ็นต์ของทั้งหมด
เซลล์รั้วรอบขอบชิด (% สูงสุด)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . เมมเบรนยลยลมวลและศักยภาพการตรวจหารอสสำหรับการวิเคราะห์ facs 1 × 105 เซลล์มีการเปรอะเปื้อนใน PBS ด้วยพบเรืองแสงสีย้อม 25 นาที ล้าง และ resuspended ใน200 μ L PBS กับ 1% FCS . สัญญาณมือถือของแต่ละบุคคลมีเรืองวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ facscalibur ( BD BIOSCIENCES ) ลเยื่อมวลและการวัดจากศักยภาพย้อมด้วยสีเขียว mitotracker FM ( 60 nm ; Invitrogen ) และmitotracker สีแดง ( 80 nm ; Invitrogen ) ตามลำดับ สำหรับ 25 นาทีได ซิเตท dihydrofluorescein ( 10 μ g / ml ) ใช้คราบสำหรับทั้งหมดเซลล์ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ dihydroethidium ( 80 μ M ) สำหรับโทรศัพท์มือถือซุปเปอร์ และ mitosox สีแดง ( 5 μ M ; Invitrogen ) สำหรับอุตสาหกรรมซุปเปอร์ . การปะแก้เฉพาะจุดที่จำเป็น การรักษาทำโดยเลี้ยงเซลล์กับรถ ( เอทานอล ) หรือ 20 μ mantimycin ( 250 μ mstock ในเอทานอล )20 นาที ตามด้วย mitosox ย้อมด้วยสีแดง ไม่มีรอยเปื้อน เซลล์ที่ได้มาวิเคราะห์การควบคุมและใช้ประตูที่เซลล์อยู่สุดท้ายการวิเคราะห์การใช้ซอฟต์แวร์ flowjo ( treestar แอชแลนด์ , หรือ ) บาร์กราฟแสดงการรวมค่ามัธยฐานค่าสามอิสระวัฒนธรรม อย่างน้อย 3 , 000 เซลล์วิเคราะห์แต่ละ ฮิสโตแกรมแสดงความเข้มของการเรืองแสงของเซลล์เป็นเปอร์เซ็นต์ของทั้งหมดgated เซลล์ ( % สูงสุด )