Participants provided one or two hair strands with a diameter of 2—3 mm each. Hair strands were taken as close to the scalp as possible from a posterior vertex position. One scalp-near 2 cm hair segment was used for the analysis of HCC, which is assumed to reflect a 2-month period of hair growth. Wash and steroid extraction procedures followed the laboratory protocol described by Gao et al. (2013). Hair samples were washed with 2.5 mL isopropanol for 3 min and cortisol was extracted from 10 mg of whole, nonpulverized hair using 1800 L methanol in the presence of cortisol-d
as internal standard for 18 h at room temperature. Following centrifugation at 15,200 × g for 2 min and transferring of 1 mL of the clear supernatant into a new 2 mL tube, the alcohol was evaporated at 65
◦
4
C under a constant stream of nitrogen and reconstituted with 250 L double-distilled water. 200 L was subsequently
injected into a Shimadzu HPLC-tandem mass spectrometry system (Shimadzu, Canby, Oregon) coupled to an ABSciex API 5000 Turbo-ion-spray triple quadrupole tandem
mass spectrometer (AB Sciex, Foster City, California) with
purification by
on-line solid-phase extraction. Lower limits
of
quantification of this assay have been shown to be below 0.1 pg/mg cortisol, with inter- and intra-assay coefficients of variance between 3.7% and 8.8%
Participants provided one or two hair strands with a diameter of 2—3 mm each. Hair strands were taken as close to the scalp as possible from a posterior vertex position. One scalp-near 2 cm hair segment was used for the analysis of HCC, which is assumed to reflect a 2-month period of hair growth. Wash and steroid extraction procedures followed the laboratory protocol described by Gao et al. (2013). Hair samples were washed with 2.5 mL isopropanol for 3 min and cortisol was extracted from 10 mg of whole, nonpulverized hair using 1800 L methanol in the presence of cortisol-das internal standard for 18 h at room temperature. Following centrifugation at 15,200 × g for 2 min and transferring of 1 mL of the clear supernatant into a new 2 mL tube, the alcohol was evaporated at 65◦4C under a constant stream of nitrogen and reconstituted with 250 L double-distilled water. 200 L was subsequently injected into a Shimadzu HPLC-tandem mass spectrometry system (Shimadzu, Canby, Oregon) coupled to an ABSciex API 5000 Turbo-ion-spray triple quadrupole tandem mass spectrometer (AB Sciex, Foster City, California) with purification by on-line solid-phase extraction. Lower limits of quantification of this assay have been shown to be below 0.1 pg/mg cortisol, with inter- and intra-assay coefficients of variance between 3.7% and 8.8%
การแปล กรุณารอสักครู่..

ผู้เข้าร่วมกิจกรรมให้หนึ่งหรือสองเส้นผมที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 2-3 มมแต่ละ เส้นผมที่ถูกนำมาใกล้เคียงกับหนังศีรษะที่เป็นไปได้จากตำแหน่งหลังจุดสุดยอด หนึ่งในหนังศีรษะใกล้ 2 ซม. ส่วนผมถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของ HCC ซึ่งจะถือว่าสะท้อนเป็นระยะเวลา 2 เดือนของการเจริญเติบโตของเส้นผม ล้างและขั้นตอนการสกัดเตียรอยด์ใช้โปรโตคอลห้องปฏิบัติการอธิบายโดย Gao et al, (2013) ตัวอย่างผมถูกล้างด้วย 2.5 isopropanol มิลลิลิตรเป็นเวลา 3 นาทีและ cortisol ถูกสกัดจาก 10 มิลลิกรัมทั้งผม nonpulverized ใช้เมทานอล L 1800 ในการปรากฏตัวของคอร์ติซอ-d
เป็นมาตรฐานภายใน 18 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงที่ 15,200 ×กรัมเป็นเวลา 2 นาทีและถ่ายโอนจาก 1 มิลลิลิตรของสารละลายที่ชัดเจนเข้ามาใหม่ 2 มิลลิลิตรหลอดเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่ถูกระเหยที่ 65
◦
4
C ภายใต้กระแสคงที่ของไนโตรเจนและสร้าง 250 ลิตรน้ำสองครั้งที่กลั่น 200
ลิตรต่อมาฉีดเข้าไปในShimadzu HPLC-ควบคู่ระบบมวลสาร (Shimadzu, แคน, ออริกอน) ควบคู่ไปกับ ABSciex API 5000 เทอร์โบไอออนสเปรย์ quadrupole
สามควบคู่สเปกโตรมิเตอร์มวล(AB Sciex, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) กับปูรีไฟไอออนบวกโดยในบรรทัดสกัดของแข็งเฟส ข้อ จำกัดล่างของไอออนบวกสาย quanti ของการทดสอบนี้ได้รับการแสดงที่จะมีดังต่อไปนี้ 0.1 pg / มกคอร์ติซอกับสาย cients COEF ระหว่างภายในและการวิเคราะห์ความแปรปรวนระหว่าง 3.7% และ 8.8%
การแปล กรุณารอสักครู่..
