Purification of phage particlesPhag

Purification of phage particles
Phage lysate (ca. 161010 PFU ml21) was centrifuged at
14,7006g for 30 min at 4uC, and then the supernatant was
filtered through a 0.22- mm filter. The filtered supernatant was
treated with nucleases (0.25 mg each of DNase and RNase per ml)
for 1 h at 37uC to digest the bacterial genomic DNA. Polyethylene
glycol (average molecular weight, 8000 Dalton) and NaCl were
added to the filtered phage suspension to yield final concentrations
of 3% and 0.33 M, respectively, and the mixture was stored at 4uC
for 2 h. The phage in the mixture were collected by centrifugation
at 14,7006g for 30 min at 4uC, and the pellet was resuspended in
PBS buffer. This condensed phage suspension was loaded onto a
discontinuous CsCl gradient diluted in PBS buffer and centrifuged
at 35,000 rpm for 9 h at 4uC in a Beckman L-90 ultracentrifuge
with a SW41Ti rotor. The banded phage particles were collected
and dialyzed against PBS buffer (1 h) three times. The purified
phage suspension was stored at 4uC until use.
In vitro test of optimal phage titer to challenge
bacterium
To determine the optimal titer for phage to decrease the
bacterial concentration was according to the previously described
[29]. An overnight host culture was transferred to 30 ml fresh LB
broth medium (OD600 =0.1) and grown at 37uC until the
concentration reached OD600= 1.0. Phage wkm18p at different
multiplicity of infection (MOI of 0.01, 0.1, 1 and 10) were
inoculated to the fresh culture (OD600= 1.0) separately and
incubated at 37uC. The phage-infected culture sample was
removed 1 ml at interval time and was centrifuged at 12,000 for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฟอกของอนุภาค phage
(ca. 161010 PFU ml21) lysate Phage ถูก centrifuged ที่
14, 7006g สำหรับ 30 นาทีที่ 4uC, supernatant ถูก
กรองผ่านตัวกรอง$ 0.22 mm Supernatant กรองถูก
รับ nucleases (0.25 mg แต่ละของ RNase DNase ต่อ ml)
สำหรับ h 1 ที่ 37uC ย่อย DNA genomic แบคทีเรีย เอทิลีน
glycol (เฉลี่ยน้ำหนักโมเลกุล 8000 ดาลตัน) และ NaCl
เพิ่มระงับ phage กรองเพื่อหาความเข้มข้นสุดท้าย
3% และ 0.33 M ตามลำดับ และส่วนผสมถูกเก็บไว้ที่ 4uC
สำหรับ 2 h Phage ในส่วนผสมจะถูกรวบรวม โดย centrifugation
ที่ 14, 7006g 30 นาทีที่ 4uC และเม็ดถูก resuspended ใน
PBS บัฟเฟอร์ ระงับ phage บีบนี้ถูกโหลดไป
CsCl ไล่ระดับที่ไม่ต่อเนื่องทำให้เจือจางในบัฟเฟอร์ PBS และ centrifuged
ที่ 35000 รอบต่อนาทีสำหรับ h 9 ที่ 4uC ใน ultracentrifuge Beckman L 90
ด้วยใบพัดแบบ SW41Ti มีการรวบรวมอนุภาค phage แถบ
และ dialyzed กับ PBS บัฟเฟอร์ (1 h) สามครั้ง ที่บริสุทธิ์
ระงับ phage ถูกเก็บไว้ที่ 4uC จนใช้
titer phage สุดท้าทดสอบใน
แบคทีเรีย
เพื่อดู titer สูงสุดสำหรับ phage ลดการ
แบคทีเรียความเข้มข้นได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[29] วัฒนธรรมการโฮสต์แรมถูกถ่ายโอนไป 30 ml ปอนด์สด
ซุปปานกลาง (OD600 = 0.1) และเติบโตที่ 37uC จนถึง
สมาธิถึง OD600 = 1.0 Wkm18p phage ที่แตกต่าง
มีมากมายหลายหลากของเชื้อ (อย 0.01, 0.1, 1 และ 10)
inoculated วัฒนธรรมสด (OD600 = 1.0) ต่างหาก และ
incubated ที่ 37uC ตัวอย่างวัฒนธรรมที่ติดเชื้อ phage ถูก
เอา 1 ml ช่วงเวลา และถูก centrifuged ที่ 12000 สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์ของอนุภาคทำลายจุลินทรีย์
Phage lysate (แคลิฟอร์เนียได้ 161,010 PFU ml21) ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่
14,7006 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4uC แล้วสารละลายที่
กรองผ่านตัวกรอง 0.22 มม. สารละลายที่กรองได้รับการ
รักษาด้วย nucleases (0.25 มิลลิกรัมแต่ละ DNase และ RNase ต่อมิลลิลิตร)
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37uC การย่อยดีเอ็นเอของแบคทีเรีย เอทิลีน
ไกลคอล (น้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 8000 ดาลตัน) และโซเดียมคลอไรด์ที่ถูก
เพิ่มเข้ามาในระบบกันสะเทือนทำลายจุลินทรีย์ที่ผ่านการกรองเพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย
ของ 3% และ 0.33 M ตามลำดับและส่วนผสมที่ถูกเก็บไว้ที่ 4uC
เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ทำลายจุลินทรีย์ในส่วนผสมที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง
ที่ 14,7006 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4uC และเม็ดถูก resuspended ใน
บัฟเฟอร์พีบีเอส นี้ระงับการทำลายจุลินทรีย์ย่อถูกโหลดลงบน
ลาด CSCL ต่อเนื่องเจือจางใน buffer พีบีเอสและหมุนเหวี่ยง
ที่ 35,000 รอบต่อนาที 9 ชั่วโมงที่ 4uC ในเบคค์ L-90 ultracentrifuge
กับโรเตอร์ SW41Ti อนุภาคทำลายจุลินทรีย์รวมตัวถูกเก็บรวบรวม
และ dialyzed กับบัฟเฟอร์พีบีเอส (1 ชั่วโมง) สามครั้ง บริสุทธิ์
ระงับทำลายจุลินทรีย์ที่ถูกเก็บไว้ที่ 4uC จนใช้
ในการทดสอบในหลอดทดลองของ titer ทำลายจุลินทรีย์ที่ดีที่สุดที่จะท้าทาย
แบคทีเรีย
เพื่อตรวจสอบ titer ที่เหมาะสมสำหรับการทำลายจุลินทรีย์เพื่อลด
ความเข้มข้นของแบคทีเรียถูกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า
[29] วัฒนธรรมเป็นเจ้าภาพในชั่วข้ามคืนก็ถูกย้ายไป 30 มล. สด LB
กลางน้ำซุป (OD 600 = 0.1) และเติบโตใน 37uC จน
เข้มข้นถึง OD 600 = 1.0 wkm18p ทำลายจุลินทรีย์ที่แตกต่างกัน
หลายหลากของการติดเชื้อ (MOI 0.01, 0.1, 1 และ 10) มี
เชื้อกับวัฒนธรรมสด (OD 600 = 1.0) แยกต่างหากและ
บ่มที่ 37uC ตัวอย่างวัฒนธรรมทำลายจุลินทรีย์ที่ติดเชื้อถูก
ลบออก 1 ml ที่ช่วงเวลาและได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลิตอนุภาคฟาฟา
lysate ( ประมาณ 161010 พีเอฟยู ml21 ) คือระดับที่
147006g สำหรับ 30 นาทีที่ 4uc แล้วถูกกรองผ่านตัวกรองสูง
0.22 - อืม กรองนำมัน
ถือว่า nucleases ( 0.25 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และแต่ละตรวจหา ADNase เลส )
1 H ที่ 37uc ย่อยดีเอ็นเอจีโนมของแบคทีเรีย โพลีเอทธิลีนไกลคอล (
น้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 8 , 000 ดอลตัน , NaCl )
)เพิ่มกรองฟาระงับผลผลิตความเข้มข้น
3 % และ 0.33 เมตร ตามลำดับ และส่วนผสมที่ถูกเก็บไว้ใน 4uc
2 H . ว่าในส่วนผสมมีจำนวน 3
ที่ 147006g สำหรับ 30 นาทีที่ 4uc และการผลิตใน resuspended
PBS buffer นี่ย่อว่าช่วงล่างถูกโหลดไปยัง
ลาดแลกเปลี่ยนความเจือจางใน PBS buffer ไฟฟ้า
อยู่ที่ 35 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 9 ชั่วโมง ที่ 4uc ในระ l-90 Ultracentrifuge
กับใบพัด sw41ti . แถบฟาเก็บและอนุภาคผ่านกับ PBS buffer (
1 H ) 3 ครั้ง และถูกเก็บไว้ใน 4uc
ฟาสะเทือนจนใช้ .
ในหลอดทดลองทดสอบระดับที่เหมาะสมที่จะท้าทาย

ว่าแบคทีเรียเพื่อกำหนดระดับที่เหมาะสมเพื่อลด
ฟาแบคทีเรียความเข้มข้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 29 ] วัฒนธรรมเป็นเจ้าภาพคืนถูกย้ายไปกลางน้ำซุป LB
สด 30 ml ( od600 = 0.1 ) และปลูกใน 37uc จนกว่า
ความเข้มข้นถึง od600 = 1.0 ฟา wkm18p ที่หลายหลากแตกต่างกัน
ของการติดเชื้อ ( Moi 0.01 , 0.1 , 1 และ 10 )
เชื้อวัฒนธรรมสด ( od600 = 1.0 ) แยกต่างหาก และบ่มที่ 37uc
.ว่าติดเชื้อวัฒนธรรมตัวอย่าง
ลบออก 1 มิลลิลิตร ในช่วงเวลาและระดับที่ 12 , 000 สำหรับ