α-Tocopherol transfer protein (α-TTP) is a cytosolic protein that plays an important role in regulating concentrations of plasma α-tocopherol (the most bio-active form of vitamin E). Despite the central roles that α-TTP plays in maintaining vitamin E adequacy, we have only recently proved the existence of the α-TTP gene in sheep and, for the first time, cloned its full-length cDNA. However, the study of sheep α-TTP is still in its infancy. In the present study, thirty-five local male lambs of Tan sheep with similar initial body weight were randomly divided into five groups and fed with diets supplemented with 0 (control group), 20, 100, 200, 2000 IU•sheep−1•d−1vitamin E for 120 days. At the end of the experiment, the plasma and liver vitamin E contents were analyzed first and then α-TTP mRNA and protein expression levels were determined by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and Western-blot analysis, respectively. In addition, as no sheep α-TTP antibody was available, a specific monoclonal antibody (McAb) against the ovine α-TTP protein was prepared. The effect of vitamin E supplementation was confirmed by the significant changes in the concentrations of vitamin E in the plasma and liver. As shown by qRT-PCR and Western-blot analysis, dietary vitamin E does not affect sheep α-TTP gene expression, except for high levels of vitamin E supplementation, which significantly increased expression at the protein level. Importantly, the specific sheep anti-α-TTP McAb we generated could provide optimal recognition in ELISA, Western-blot and immunohistochemistry assays, which will be a powerful tool in future studies of the biological functions of sheep α-TTP
α-โทโคฟีรอโอนโปรตีน (α-TTP) เป็นโปรตีน cytosolic ที่มีบทบาทสำคัญในการควบคุมความเข้มข้นของพลาสม่าαโทโคฟีรอ (แบบชีวภาพที่ใช้งานมากที่สุดของวิตามินอี) แม้จะมีบทบาทกลางที่α-TTP เล่นในการรักษาวิตามินอีเพียงพอเราได้พิสูจน์แล้วว่าเมื่อเร็ว ๆ นี้การดำรงอยู่ของยีนα-TTP ในแกะและเป็นครั้งแรกที่โคลน cDNA เต็มความยาวของ อย่างไรก็ตามการศึกษาของแกะα-TTP ยังอยู่ในวัยเด็กของตน ในการศึกษาครั้งนี้สามสิบห้าลูกแกะเพศชายท้องถิ่นของแกะตาลที่มีน้ำหนักตัวเริ่มต้นที่คล้ายกันโดยแบ่งการทดลองออกเป็นห้ากลุ่มและที่เลี้ยงด้วยอาหารเสริมด้วย 0 (กลุ่มควบคุม), 20, 100, 200, 2000 IU •แกะ 1 • E-d 1vitamin 120 วัน ในตอนท้ายของการทดลอง, พลาสม่าและวิตามิน E ตับเนื้อหาวิเคราะห์ก่อนแล้วα-TTP mRNA และการแสดงออกของโปรตีนในระดับที่ถูกกำหนดโดยเชิงปริมาณแบบ real-time PCR (qRT-PCR) และตะวันตก-blot การวิเคราะห์ตามลำดับ นอกจากนี้ยังเป็นที่ไม่มีแอนติบอดีแกะα-TTP เป็นมีแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง (McAb) กับแกะα-TTP โปรตีนที่ถูกจัดทำขึ้น ผลของการเสริมวิตามินอีได้รับการยืนยันโดยการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในระดับความเข้มข้นของวิตามินอีในพลาสม่าและตับ ที่แสดงโดย qRT-PCR และการวิเคราะห์ตะวันตก blot, อาหารวิตามินอีไม่ได้ส่งผลกระทบต่อα-TTP แกะแสดงออกของยีนยกเว้นสำหรับระดับสูงของวิตามินอีเสริมที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในระดับการแสดงออกของโปรตีน ที่สำคัญแกะเฉพาะต่อต้านα-TTP McAb เราสร้างขึ้นจะให้ได้รับการยอมรับที่ดีที่สุดใน ELISA, ตะวันตก blot และตรวจ immunohistochemistry ซึ่งจะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในการศึกษาในอนาคตของการทำงานทางชีวภาพของแกะα-TTP
การแปล กรุณารอสักครู่..

แอลฟาโทโคเฟอรอล ( โอนโปรตีนแอลฟา cytosolic TTP ) เป็นโปรตีนที่มีบทบาทสำคัญในการควบคุมความเข้มข้นของพลาสม่า แอลฟาโทโคเฟอรอล ( ไบโอแอคทีฟมากที่สุดรูปแบบของวิตามิน E ) แม้บทบาทกลางที่แอลฟา TTP เล่นในการรักษาวิตามินอีเพียงพอ เราก็เพิ่งได้พิสูจน์การมีอยู่ของยีนแอลฟา TTP ในแกะและ , ครั้งแรก , โคลนของ cDNA แบบเต็มตัว . อย่างไรก็ตามการศึกษาของแอลฟาแกะ TTP ยังอยู่ในวัยทารก ในการศึกษาท้องถิ่นชายห้าลูกแกะของตาลแกะใกล้เคียงกับน้ำหนักเริ่มต้นสุ่มแบ่งออกเป็นห้ากลุ่ม และเลี้ยงด้วยอาหารเสริมด้วย 0 ( กลุ่มควบคุม ) , 20 , 100 , 200 , 2 , 000 IU - แกะ - D −− 1 1vitamin E เป็นเวลา 120 วัน เมื่อสิ้นสุดการทดลองพลาสมาและตับ วิตามิน อี เนื้อหา วิเคราะห์ก่อนจากนั้น mRNA TTP แอลฟาและระดับการแสดงออกของโปรตีนถูกกำหนดโดยปริมาณเรียลไทม์พีซีอาร์ ( PCR ข้าพเจ้า ) และ Western blot การวิเคราะห์ ตามลำดับ นอกจากนี้ยังเป็นไม่แกะแอลฟา TTP แอนติบอดีที่ใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง ( mcab ) กับ ovine โปรตีนแอลฟา TTP ที่เตรียมไว้ผลของการเสริมวิตามินอีที่ได้รับการยืนยันโดยการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในความเข้มข้นของวิตามินอีในเลือดและตับ ที่แสดงโดยวิธี PCR ข้าพเจ้าและการวิเคราะห์ Western blot , วิตามินอีอาหารไม่มีผลต่อการแสดงออกของยีนแอลฟาแกะเหมือน ยกเว้นระดับสูงของการเสริมวิตามินอี ซึ่งเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสําคัญทางสถิติที่ระดับการแสดงออกของโปรตีน ที่สำคัญแกะเฉพาะ anti - แอลฟา TTP mcab เราสร้างขึ้นสามารถให้เหมาะสม การรับรู้ใน Elisa , blot ตะวันตกและหลอดเลือด ซึ่งจะเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในการศึกษาในอนาคตของฟังก์ชันทางชีวภาพของแอลฟาแกะ TTP
การแปล กรุณารอสักครู่..
