AbstractWe previously described rep

Abstract
We previously described replication-competent feline leukemia virus (FeLV) vectors with high-level and stable expression of a green fluorescent protein (GFP) or a suicide transgene in cell cultures in vitro. Considering that FeLV might potentially be used to deliver therapeutic genes in vivo, we first evaluated the expression of the GFP gene introduced in cats by the FeLV, Rickard subgroup A (FRA) construct. Eight newborn kittens were either inoculated with pFRA-GFP plasmid DNA intradermally, or challenged intraperitoneally with FRA-GFP-infected feline fibroblasts. During a 12-week observation period, five cats were shown to be progressively viremic. Quantitative PCR and RT-PCR analyses of plasma and tissue samples from these cats showed that GFP was retained in FeLV DNA or RNA to a variable degree, ranging from 0.002 to 27.890%. Tissue DNA samples were analyzed by PCR for the status of GFP and the env-transgene complex. While the proviruses carrying the GFP transgene were shown to be minor species, all tissues, however, retained the full-length GFP transgene. Despite the occurrence of predominant species with various deletions in the viral genome, approximately 1–3% of the total cell population was GFP-positive in the lymphoid tissues as visualized by laser confocal microscopy. Co-localization of immunofluorescent cells indicated that CD3-positive T cells, dendritic cells and macrophages were the major targets for GFP expression. These findings on the detectable in vivo expression of GFP for as long as a period of 3 months could be viewed positively for contemplating a therapeutic strategy for control of FeLV infection in the cats.

Keywords
Feline leukemia virus; Green fluorescent protein; Replication competent retroviral vector; Domestic cat

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อก่อนหน้านี้เราอธิบายมะเร็งเม็ดเลือดขาวแมวจำลองแบบเชี่ยวชาญไวรัส (FeLV) เวกเตอร์ มีค่าสูง และมีเสถียรภาพของโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) หรือ transgene ฆ่าตัวตายในวัฒนธรรมเซลล์เพาะเลี้ยง เราต้องพิจารณาว่า FeLV อาจถูกใช้เพื่อส่งบำบัดยีนในสัตว์ทดลอง ประเมินนิพจน์ของยีน GFP นำในแมว โดย FeLV, Rickard กลุ่มย่อย A (FRA) สร้าง ลูกแมวทารกแปดได้ inoculated กับ pFRA GFP plasmid DNA intradermally หรือ intraperitoneally ท้าทายกับ fibroblasts แมว FRA-GFP-ติดเชื้อ ในระหว่างระยะเวลา 12 สัปดาห์สังเกต แมว 5 ถูกแสดงเป็น viremic ความก้าวหน้า วิเคราะห์เชิงปริมาณ PCR และ RT-PCR อย่างพลาสม่าและเนื้อเยื่อจากแมวเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า มีสะสม GFP FeLV ดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอระดับตัวแปร ตั้งแต่ 0.002% 27.890 ตัวอย่างเนื้อเยื่อดีเอ็นเอถูกวิเคราะห์ โดย PCR ของสถานะซับซ้อน env transgene และ GFP ในขณะที่ proviruses แบก GFP transgene ถูกแสดงเป็น สปีชีส์ย่อย เนื้อเยื่อทั้งหมด อย่างไรก็ตาม สะสม transgene GFP ปราศจาก ประมาณ 1 – 3% ของประชากรทั้งหมดเซลล์ถูกบวก GFP เนื้อเยื่อ lymphoid เป็น visualized โดยเลเซอร์ confocal microscopy แม้จะเกิดขึ้นกันพันธุ์กับลบต่าง ๆ ในกลุ่มไวรัส แปลร่วมของเซลล์ immunofluorescent ระบุว่า CD3 บวก T เซลล์ เซลล์ dendritic และบังเอิญมีเป้าหมายสำคัญสำหรับนิพจน์ GFP เหล่านี้พบในนิพจน์ในสัตว์ทดลองที่ตรวจของ GFP นานเป็นระยะเวลา 3 เดือนสามารถดูบวกการคิดกลยุทธ์การรักษาสำหรับการควบคุมติดเชื้อ FeLV แมวคำสำคัญมะเร็งเม็ดเลือดขาวแมวไวรัส โปรตีนเรืองแสงสีเขียว จำลองแบบเชี่ยวชาญ retroviral เวกเตอร์ แมว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
เราก่อนหน้านี้อธิบายซ้ำเชี่ยวชาญแมวลูคีเมียไวรัส ( felv ) เวกเตอร์ที่มีระดับสูงและมีการแสดงออกของโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( GFP ) หรือฆ่าตัวตายยีนในเซลล์เพาะเลี้ยงในอาหาร พิจารณาว่า felv อาจอาจใช้ในการส่งมอบยีนบำบัดในร่างกายเราก่อนการประเมินการแสดงออกของยีน GFP โดย felv แนะนำในแมว ,ริกกลุ่มย่อย ( ฟรา ) สร้าง แปดลูกแมวแรกเกิด ถ้าใส่ pfra พลาสมิดดีเอ็นเอ GFP intradermally หรือท้าทายต่อการติดเชื้อจากแมวกับฟรา GFP . ในช่วง 12 สัปดาห์ระยะเวลาการสังเกต 5 แมวถูกแสดงเป็น viremic ทุกทีเทคนิคเชิงปริมาณและวิธีวิเคราะห์ของพลาสมาและตัวอย่างเนื้อเยื่อจากแมวเหล่านี้ พบว่า ยังคง felv GFP ใน DNA หรือ RNA ให้ตัวแปรองศาตั้งแต่ 0.002 ถึง 27.890 % ตัวอย่างเนื้อเยื่อดีเอ็นเอวิเคราะห์โดยวิธี PCR สำหรับสถานะของ GFP และ Env ยีนที่ซับซ้อน ในขณะที่ proviruses แบกยีน GFP ถูกแสดงเป็นชนิดย่อยเนื้อเยื่อที่ทั้งหมด อย่างไรก็ตามสะสมยีน GFP เต็ม . แม้จะมีการเกิดขึ้นของเด่นชนิดลบต่างๆในจีโนมไวรัส ประมาณ 1 - 3 % ของประชากรทั้งหมดเป็นเซลล์ในเนื้อเยื่อน้ำเหลือง เช่น GFP บวกภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ด้วยเลเซอร์ . Co จำกัด immunofluorescent เซลล์พบว่าทันทีบวก t เซลล์และเซลล์แมคโครฟาจเป็นเป้าหมายหลักสำหรับการแสดงออกของ GFP . เหล่านี้พบได้ในสิ่งมีชีวิตในการแสดงออกของ GFP ได้นานเป็นระยะเวลา 3 เดือน สามารถดูได้ทางบวกสำหรับซอฟต์แวร์การรักษากลยุทธ์เพื่อควบคุมการติดเชื้อ felv ในแมว

คำสำคัญ
แมวลูคีเมียไวรัส ; โปรตีนเรืองแสงสีเขียว แบบเวกเตอร์ retroviral เชี่ยวชาญ แมวในประเทศ