Circulating nucleic acid extraction

Circulating nucleic acid extraction was performed in triplicate from the sera of P (N = 12) and NP (N = 16) dairy cows. DNA concentration was measured in a microplate reader GENios Pro (Tecan) using Quant-iT dsDNA assay (Invitrogen). DNA samples were diluted to a final concentration of 1 pg/μL. We collected the serum samples and performed the CNA extraction as described in section 2.2. “DNA extraction and whole genome amplification.” After extraction and diluting the nucleic acids, we directly performed the qPCR assays using pure CNAs as templates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัดกรดนิวคลีอิกการหมุนเวียนงานใน triplicate จากนโยบายของ P (N = 12) และ NP (N = 16) นม ความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกวัดในอ่าน microplate GENios Pro (Tecan) ใช้เป็น Quant ทดสอบ dsDNA (Invitrogen) ตัวอย่างดีเอ็นเอถูกผสมให้เข้มข้นสุดท้ายของ pg 1 μL เราเก็บตัวอย่างซีรั่ม และดำเนินสกัด CNA ตามที่อธิบายไว้ในหัวข้อ 2.2 "การสกัดดีเอ็นเอและขยายทั้งจีโนม" หลังจากสกัดและ diluting กรดนิวคลีอิก เราโดยตรงทำ assays qPCR ใช้ CNAs บริสุทธิ์เป็นต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การไหลเวียนของกรดนิวคลีอิกสกัดที่ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าจากซีรั่มของ P (จำนวน = 12) และ NP (จำนวน = 16) โคนม ความเข้มข้นของดีเอ็นเอวัดในอ่าน microplate Genios P​​ro (Tecan) โดยใช้การทดสอบ Quant-iT dsDNA (Invitrogen) ตัวอย่างดีเอ็นเอถูกเจือจางความเข้มข้นสุดท้ายของ 1 พิโคกรัม / ไมโครลิตร เราเก็บตัวอย่างซีรั่มและดำเนินการสกัด CNA ตามที่อธิบายไว้ในส่วน 2.2 "การสกัด DNA และการขยายทั้งจีโนม." หลังจากการสกัดและการเจือจางกรดนิวคลีอิกเราโดยตรงดำเนินการตรวจ qPCR ใช้ CNAs บริสุทธิ์เป็นแม่แบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หมุนเวียนการสกัดกรดนิวคลีอิกเป็นการทำสำเนาสามฉบับจากเซรา P ( n = 12 ) และ NP ( n = 16 ) โคนม วัดความเข้มข้นของดีเอ็นเอในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน genios Pro ( TECAN ) โดยใช้การวิเคราะห์เชิงปริมาณมัน dsdna assay ( Invitrogen ) ตัวอย่างดีเอ็นเอเพื่อลดความเข้มข้นสุดท้าย 1 พิโคกรัม / ลิตรμเราเก็บซีรั่มตัวอย่าง และทำการสกัด ) ที่อธิบายไว้ในมาตรา 2.2 ." การสกัดดีเอ็นเอและทั้งจีโนมแบบ " หลังจากการสกัดและผสมกรดนิวคลีอิก เราโดยตรง โดยสามารถใช้ qpcr CNAS บริสุทธิ์เป็นแม่แบบ