DiscussionIn this study, we uncover

Discussion

In this study, we uncovered that two related proteins REF and SRPP present in hevea latex and sharing sequence homology, present clearly different structures. Our results show that at least in vitro in physiological condition (pH 7.4), SRPP is an α-helical protein whereas REF is an amyloid. The pH of cytosol latex is usually neutral (6.9±0.4) but it also exists a direct relationship between slightly alkaline pH after tapping and increased rubber production [46]. So far amyloid proteins have never been characterized in latex, but various proteinic microhelices and microfibrils have been visualized in lutoids, which are a kind of lysosomic vacuoles present in latex [2], [47], [48]. Some of them were referred as “vegetative storage protein” [49].

In the last decade numerous amyloid fibers with functional activities have been identified in bacteria, fungi, insects, invertebrates and humans (for review see [50]). They fulfill crucial functions as for example adhesion to surface, cell aggregation, biofilm formation, molecular sequestration and storage [51]. Many amyloids are now recognized as important nanobiomaterials [52]. For example, Curli an amyloid produced extracellularly by many Enterobacteriaceae, generates a matrix for surface adhesion and interactions with other bacteria, conferring a colonizing advantage [53], [54]. Mod5, a tRNA isopentenyl transferase is a yeast prion which regulates acquired drug resistance and cellular adaptation to environmental stress [55]. Other amyloids called hydrophobins are small (about 100 amino acids) highly hydrophobic proteins produced by filamentous fungi, very surface active (as REF and SRPP) and able to form robust polymeric monolayers with coating properties [56], [57]. In latex, both proteins are really tighly bound to SRP and LRP, and their extraction from rubber particles requires strong treatments with detergents [12], [33]. From early studies, large rubber particles were thought to be completely coated by a “proteinaceous film” of REF, possibly in more than one layer [12], [58]. From our ellipsometric study, it seems also from the thickness and pressure that several layers of REF could be present through the monomembrane, but it would now be interesting to determine the structure of the inserted REF. Is it the amyloid form or amphipathic α-helices anchored and stabilized by the lipids? In fact, it is believed that many, if not all proteins are able to undergo this structural transition into amyloid when under the appropriate conditions [59], [60]. In addition, temperature, pH, surfaces and membrane composition clearly appear as key factors in triggering folding [61], [62], [63].

In the case of SRPP, we did not observed an amyloid state or aggregates, but SRPP from latex was also suspected of aggregation [8], [15]. In addition SRPP fragmentation was previously reported [8], [15] and it may occur at specific sites on the molecule [8], which could be corresponding to REF amyloid core as we confirmed by proteinase K treatment. The extra C-terminal part present on SRPP and the negative charge (−6) may therefore account for the relative stability of this protein. In addition, as a glycoprotein SRPP is also believed to contribute to latex coagulation by an agglutination mechanism [64], and rubber synthesis has been shown to be inhibited by hevein, a lectin present in lutoids and able to interact with SRPP [25].

Therefore, if REF and SRPP take part in the rubber biosynthesis process, we may suspect their intervention in the coagulation of rubber particles via mechanisms of agglutination or aggregation more than via an enzymatic activity. But it is not excluded that they also could participate in the recruitment of rubber enzymes to the surface of latex globules.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สนทนาในการศึกษานี้ เราค้นพบว่าโปรตีนที่เกี่ยวข้องสอง REF และ SRPP ที่อยู่ในน้ำยาง hevea และแบ่งลำดับ homology มีโครงสร้างแตกต่างกันอย่างชัดเจน ผลลัพธ์ที่แสดงน้อยในหลอดทดลองในสภาวะทางสรีรวิทยา (pH 7.4), SRPP โปรตีนมีลานαในขณะที่การอ้างอิงเป็น amyloid การ ค่า pH ของน้ำยางไซโตซอลจะเป็นกลาง (6.9±0.4) แต่ก็ยังมีความสัมพันธ์โดยตรงระหว่างด่างเล็กน้อยค่า pH หลังจากแตะ และเพิ่มผลิตยาง [46] จนเคยได้รับลักษณะโปรตีน amyloid ในน้ำยาง ได้ proteinic microhelices และ microfibrils ต่าง ๆ มีการมองเห็นใน lutoids ซึ่งเป็นชนิดของ lysosomic vacuoles ในยาง [2], [47], [48] บางส่วนของพวกเขาถูกเรียกว่า "โปรตีนของพืชเก็บ" [49]ในทศวรรษที่ ได้รับการระบุเส้นใย amyloid มากมายกับกิจกรรมการทำงานแบคทีเรีย เชื้อรา แมลง ไม่มีกระดูกสันหลัง และมนุษย์ (สำหรับดูรีวิว [50]) พวกเขาทำหน้าที่ที่สำคัญสำหรับตัวอย่างการยึดเกาะกับพื้นผิว การรวมเซลล์ สร้าง biofilm อายัดโมเลกุล และการเก็บ [51] ขณะนี้มีการรับรู้มีการสะสมมากเป็นสำคัญ nanobiomaterials [52] เช่น Curli amyloid การผลิต extracellularly โดย Enterobacteriaceae มาก สร้างเมทริกซ์สำหรับยึดเกาะพื้นผิวและโต้ตอบกับแบคทีเรียอื่น ๆ ต่อการให้อนุญาตโดยเป็นประโยชน์ colonizing [53], [54] Mod5 การป้องกันสลาย isopentenyl transferase เป็นพรีออนของยีสต์ที่ควบคุมได้รับยาต้านและถือการปรับตัวความเครียดสิ่งแวดล้อม [55] มีการสะสมอื่น ๆ เรียกว่า hydrophobins มีขนาดเล็ก (กรดอะมิโนประมาณ 100) แบบสูงโปรตีนที่ผลิต โดยเชื้อราด้าย พื้นผิวมาก (เป็นการอ้างอิงและ SRPP) และการทนทานเมอร์ monolayers มีคุณสมบัติเคลือบ [56], [57] ในน้ำยาง โปรตีนทั้งสองเป็นจริงกับ SRP และ LRP tighly และการสกัดจากอนุภาคยางต้องรักษาความแข็งแรง ด้วยผงซักฟอก [12], [33] จากการศึกษาต้น อนุภาคยางขนาดใหญ่กำลังคิดว่า จะต้องเคลือบอย่างสมบูรณ์ โดยการใช้ "โปรตีนฟิล์ม" ของ REF อาจเป็นในชั้นหนึ่ง [12], [58] จากการศึกษาของเรา ellipsometric เหมือนยังจากความหนาและความดันอ้างอิงหลายชั้นอาจจะมีอยู่ผ่านการ monomembrane แต่ตอนนี้จะน่าสนใจเพื่อกำหนดโครงสร้างของการอ้างอิงแทรก เป็น amyloid ฟอร์มหรือ amphipathic α-helices ยึด และเสถียร ด้วยโครงการหรือไม่ ในความเป็นจริง ทำให้เชื่อว่ามาก ถ้า ไม่โปรตีนทั้งหมดจะต้องปรับเปลี่ยนโครงสร้างเป็น amyloid เมื่อภายใต้เงื่อนไขเหมาะสม [59], [60] นอกจากนี้ อุณหภูมิ pH พื้นผิวและองค์ประกอบของเมมเบรนอย่างชัดเจนปรากฏเป็นปัจจัยหลักในการทริกเกอร์พับ [61], [62], [63]ในกรณี SRPP เราไม่ไม่ตรวจสอบสถานะ amyloid หรือผล แต่ยังถูกสงสัย SRPP จากน้ำยางของรวม [8], [15] นอกจากนี้ การกระจายตัวของ SRPP ได้รายงานไปก่อนหน้านี้ [8] , [15] และอาจเกิดขึ้นที่ไซต์ที่ระบุบนโมเลกุล [8], ซึ่งอาจตรงกับ REF amyloid หลักเราได้รับการยืนยัน โดยการรักษา proteinase K C-อาคารเสริมส่วนบน SRPP และประจุลบ (−6) ดังนั้นอาจหมายความเสถียรสัมพัทธ์ของโปรตีนนี้ นอกจากนี้ เป็นไกลโคโปรตีนเป็น SRPP ยังเชื่อว่าจะช่วยให้น้ำยางแข็งตัว โดยกลไกการมูก [64], และยางสังเคราะห์ได้รับการแสดงเพื่อจะถูกยับยั้ง โดย hevein ศึกษาอยู่ใน lutoids และสามารถโต้ตอบกับ SRPP [25]ดังนั้น ถ้า REF และ SRPP มีส่วนร่วมในกระบวนการสังเคราะห์ยาง เราอาจสงสัยว่าการแทรกแซงในการแข็งตัวของอนุภาคยางผ่านกลไกของมูกหรือรวมกว่าผ่านกิจกรรมเอนไซม์ แต่ไม่ได้แยกออกว่าพวกเขายังสามารถมีส่วนร่วมในการสรรหาบุคลากรของเอนไซม์ยางกับพื้นผิวของน้ำยางข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การอภิปรายในการศึกษาครั้งนี้เราค้นพบว่าทั้งสองโปรตีนที่เกี่ยวข้อง REF และ SRPP อยู่ในน้ำยางยางพาราและการแบ่งปันที่คล้ายคลึงกันตามลำดับปัจจุบันโครงสร้างที่แตกต่างอย่างเห็นได้ชัด ผลของเราแสดงให้เห็นว่าอย่างน้อยในหลอดทดลองในสภาพทางสรีรวิทยา (pH 7.4) SRPP เป็นโปรตีนα-ลานขณะ REF เป็น amyloid ค่าพีเอชของน้ำยางเซลล์เป็นปกติที่เป็นกลาง (6.9 ± 0.4) แต่มันก็ยังมีอยู่ความสัมพันธ์โดยตรงระหว่างค่าความเป็นกรดด่างเล็กน้อยหลังจากแตะและการผลิตยางเพิ่มขึ้น [46] เพื่อให้ห่างไกลโปรตีน amyloid ไม่เคยได้รับความโดดเด่นในน้ำ แต่ microhelices proteinic ต่างๆและ microfibrils ได้รับการมองเห็นใน lutoids ซึ่งเป็นชนิดของ vacuoles lysosomic อยู่ในน้ำยาง [2] [47], [48] บางส่วนของพวกเขาถูกเรียกว่า "การจัดเก็บโปรตีนพืช" [49]. ในทศวรรษที่ผ่านเส้นใย amyloid จำนวนมากที่มีกิจกรรมการทำงานได้รับการระบุในเชื้อแบคทีเรียเชื้อราแมลงสัตว์ไม่มีกระดูกสันหลังและมนุษย์ (สำหรับการตรวจสอบดู [50]) พวกเขาตอบสนองฟังก์ชั่นที่สำคัญตัวอย่างเช่นการยึดเกาะกับพื้นผิวการรวมมือถือรูปแบบไบโอฟิล์มอายัดโมเลกุลและการจัดเก็บ [51] amyloids หลายคนได้รับการยอมรับในขณะนี้เป็น nanobiomaterials สำคัญ [52] ยกตัวอย่างเช่น Curli amyloid ผลิต extracellularly โดยมาก Enterobacteriaceae สร้างเมทริกซ์สำหรับการยึดเกาะพื้นผิวและการมีปฏิสัมพันธ์กับเชื้อแบคทีเรียอื่น ๆ การหารือข้อได้เปรียบอาณานิคม [53], [54] Mod5 เป็น isopentenyl transferase tRNA เป็นพรีออยีสต์ซึ่งควบคุมการดื้อยาได้มาและการปรับตัวโทรศัพท์มือถือกับความเครียดสิ่งแวดล้อม [55] amyloids อื่น ๆ เรียกว่า hydrophobins มีขนาดเล็ก (ประมาณ 100 กรดอะมิโน) โปรตีนสูงไม่ชอบน้ำที่ผลิตโดยเชื้อรามากพื้นผิวที่ใช้งาน (เป็น REF และ SRPP) และสามารถที่จะสร้าง monolayers พอลิเมอแข็งแกร่งที่มีคุณสมบัติเคลือบ [56] [57] ในน้ำทั้งโปรตีนจริงๆ tighly ผูกไว้กับ SRP และ LRP, และการสกัดของพวกเขาจากอนุภาคยางต้องใช้การรักษาที่แข็งแกร่งกับผงซักฟอก [12] [33] จากการศึกษาในช่วงต้นของอนุภาคยางขนาดใหญ่ที่มีความคิดที่จะเคลือบสมบูรณ์ด้วย "ฟิล์มโปรตีน" ของ REF อาจจะมากกว่าหนึ่งชั้น [12], [58] จากการศึกษาของเรา ellipsometric ดูเหมือนว่ายังมาจากความหนาและความดันที่หลายชั้นของ REF อาจจะนำเสนอผ่าน monomembrane แต่ตอนนี้มันจะน่าสนใจเพื่อตรวจสอบโครงสร้างของ REF แทรก มันเป็นรูปแบบ amyloid หรือ amphipathic αเอนริเก้ทอดสมอและเสถียรภาพโดยไขมัน? ในความเป็นจริงก็เป็นที่เชื่อว่าหลายคนหากไม่ได้โปรตีนทั้งหมดสามารถที่จะได้รับการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างนี้เข้า amyloid เมื่ออยู่ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม [59], [60] นอกจากนี้อุณหภูมิความเป็นกรดด่าง, พื้นผิวและองค์ประกอบเมมเบรนได้อย่างชัดเจนปรากฏเป็นปัจจัยสำคัญในการเรียกพับ [61], [62], [63]. ในกรณีที่ SRPP เราไม่ได้สังเกตรัฐ amyloid หรือมวล แต่ SRPP จาก น้ำยางยังเป็นที่น่าสงสัยว่าการรวมตัว [8] [15] นอกจากนี้การกระจายตัวของ SRPP มีรายงานก่อนหน้านี้ [8] [15] และมันอาจเกิดขึ้นในสถานที่เฉพาะเจาะจงเกี่ยวกับโมเลกุล [8] ซึ่งอาจจะสอดคล้องกับหลัก Ref amyloid ที่เราได้รับการยืนยันโดยโปรรักษา K พิเศษส่วน C-ขั้วอยู่บน SRPP และประจุลบ (-6) ดังนั้นจึงอาจบัญชีสำหรับความมั่นคงของโปรตีนนี้ นอกจากนี้ยังเป็นไกลโคโปรตีน SRPP นอกจากนี้ยังเชื่อว่าจะนำไปสู่การแข็งตัวของน้ำยางข้นโดยกลไกการเกาะติดกัน [64] และการสังเคราะห์ยางได้รับการแสดงที่จะยับยั้งโดย hevein เป็นเลคตินในปัจจุบัน lutoids และสามารถโต้ตอบกับ SRPP [25] ดังนั้นถ้า REF และ SRPP มีส่วนร่วมในกระบวนการสังเคราะห์ยางเราอาจสงสัยว่าการแทรกแซงของพวกเขาในการแข็งตัวของอนุภาคยางผ่านทางกลไกของการเกาะติดกันหรือรวมมากกว่าผ่านทางกิจกรรมของเอนไซม์ แต่มันไม่ได้เป็นไม่ว่าพวกเขายังสามารถมีส่วนร่วมในการจัดหาของเอนไซม์ยางกับพื้นผิวของน้ำยางข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การอภิปรายในการศึกษานี้เราพบว่าทั้งสองเกี่ยวข้องกับโปรตีน Ref และ srpp ในปัจจุบันยางพาราน้ำยาง และร่วมกันเป็นลำดับ โครงสร้างที่แตกต่างกันอย่างชัดเจนในปัจจุบัน ผลของเราแสดงให้เห็นว่าอย่างน้อยในหลอดทดลองในเงื่อนไขทางสรีรวิทยา ( pH 7.4 ) , srpp เป็นแอลฟาลานโปรตีนในขณะที่ Ref เป็นแอลกอฮอล์ . pH ของไซโตซอลน้ำยางเป็นกลางปกติ ( 6.9 ± 0.4 ) แต่ก็มีความสัมพันธ์โดยตรงระหว่างด่างเล็กน้อย pH หลังจากเคาะ และเพิ่มการผลิตยางพารา [ 46 ] เพื่อให้ห่างไกลโปรตีนแอมีลอยด์เคยโดดเด่นในน้ำยาง แต่ proteinic microhelices ไมโครไฟบริลต่าง ๆและได้รับการมองเห็นใน lutoids ซึ่งเป็นชนิดของ lysosomic แวคิวโอลปัจจุบันในน้ำยาง [ 2 ] , [ 47 ] , [ 48 ] บางส่วนของพวกเขาถูกเรียกว่าเป็น " พืชกระเป๋าโปรตีน " [ 49 ]ในทศวรรษที่ผ่านมามากมายสนใจใยกับกิจกรรมการทำงานได้รับการระบุในแบคทีเรีย เชื้อรา แมลง สัตว์ และมนุษย์ ( เพื่อทบทวนดู [ 50 ] ) พวกเขาตอบสนองการทำงานที่สำคัญ เช่น ตัวอย่างเช่นการยึดเกาะพื้นผิวเซลล์รวม การสร้างไบโอฟิล์มของโมเลกุลและการสะสม , เก็บ [ 51 ] หลาย amyloids ขณะนี้ได้รับการยอมรับว่าเป็นสิ่งสำคัญ nanobiomaterials [ 52 ] ตัวอย่างเช่น curli ที่สนใจผลิต extracellularly โดยมากผิดเพี้ยน สร้างเมทริกซ์การยึดเกาะพื้นผิวและปฏิกิริยากับแบคทีเรียอื่นๆ พระราชทาน colonizing ประโยชน์ [ 53 ] [ 54 ] mod5 , การเมารถของ isopentenyl เป็นยีสต์พรีออนซึ่งควบคุมได้รับการดื้อยาและเซลล์ การปรับตัวให้เข้ากับสิ่งแวดล้อมความเครียด [ 55 ] อื่น ๆ amyloids เรียกว่า hydrophobins มีขนาดเล็ก ( ประมาณ 100 กรดอะมิโน ) โปรตีนสูง ) ที่ผลิตโดยเชื้อราเส้นใยมาก ผิวงาน ( Ref และ srpp ) และสามารถฟอร์มที่แข็งแกร่ง monolayers พอลิเมอร์เคลือบด้วยคุณสมบัติ [ 56 ] , [ 57 ] โปรตีนในน้ำยาง ทั้งแน่นและผูก SRP จริงๆ LRP และการสกัดจากอนุภาคยางต้องการการรักษาที่แข็งแกร่งกับผงซักฟอก [ 12 ] , [ 33 ] จากต้นศึกษาอนุภาคยางขนาดใหญ่ คิดว่าจะถูกเคลือบอย่างสมบูรณ์โดย " ฟิล์ม proteinaceous " ของกรรมการ อาจจะมากกว่าหนึ่งชั้น [ 12 ] , [ 58 ] จากการศึกษา ellipsometric ของเรา ดูจากความหนาและความดันที่หลายชั้นของกรรมการอาจจะนำเสนอผ่าน monomembrane แต่มันจะน่าสนใจเพื่อหาโครงสร้างของแทรกการอ้างอิงเป็นแอลกอฮอล์รูปแบบหรือแอมฟิพาติกแอลฟา helices ทอดสมอและเสถียรโดยไขมัน ? เชื่อในความเป็นจริง หลาย ถ้าไม่ใช่โปรตีนทั้งหมดจะสามารถผ่านการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างนี้เป็นแอลกอฮอล์เมื่ออยู่ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม [ 59 ] [ 60 ] นอกจากนี้ อุณหภูมิ , pH , พื้นผิวและองค์ประกอบเยื่อหุ้มเซลล์ชัดเจนปรากฏเป็นปัจจัยสําคัญในการพับ [ 61 ] , [ 62 ] , [ 63 ]ในกรณีของ srpp เราไม่ได้สังเกตสภาพเป็นแอลกอฮอล์หรือมวลรวม แต่ srpp จากน้ำยางถูกสงสัยว่า aggregation [ 8 ] , [ 15 ] นอกจากนี้ srpp กระจายตัวได้รายงานว่า ก่อนหน้านี้ [ 8 ] , [ 15 ] และมันอาจจะเกิดขึ้นที่เว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงบนโมเลกุล [ 8 ] ซึ่งอาจจะสอดคล้องกับ Ref แอมีลอยด์เป็นหลักเรายืนยันโดยการรักษาของโปร . ซึ่งปัจจุบันในส่วนพิเศษ srpp และประจุลบ ( − 6 ) จึงอาจบัญชีสำหรับเสถียรภาพสัมพัทธ์ของโปรตีนนี้ นอกจากนี้ยังเป็นไกลโคโปรตีน srpp เชื่อยังสนับสนุนการยาง โดยมีการจับกลุ่มกลไก [ 64 ] , และยางสังเคราะห์ได้ถูกแสดงจะถูกยับยั้งโดยฮีวิน , เลคตินที่มีอยู่ใน lutoids และสามารถโต้ตอบกับ srpp [ 25 ]ดังนั้น หากกรรมการ และ srpp มีส่วนร่วมในกระบวนการชีวสังเคราะห์ยาง เราอาจสงสัยว่า การแทรกแซงของพวกเขาในการตกตะกอนของอนุภาคยาง ผ่านกลไกของการจับกลุ่มหรือรวมมากกว่าผ่านกิจกรรมเอนไซม์ . แต่มันไม่ได้เป็นอย่างนั้น พวกเขาสามารถมีส่วนร่วมในการสรรหาของเอนไซม์ยางกับพื้นผิวของเม็ดยาง