To isolate the greatest diversity o

To isolate the greatest diversity of fungi from frass and feces, these substrates were incubated using three methods. Method 1: 1 g weevil frass or weevil feces was wetted with 5 ml sterile water and incubated in a 25 ml beaker at room temperature (22 ± 2 °C) after covering with aluminum foil. After 2–4 d of incubation, fungi appearing on the frass- or feces surfaces were transferred to weevil-frass agar (WFA) in Petri plates with the help of a sterilized metallic needle (Azeem et al. 2013). WFA was prepared by adding 10 g weevil frass and 20 g agar in 1000 ml demineralized water and autoclaving at 121 °C for 40 min, the pH of WFA was 4.5–5. The frass/feces surface in the beaker was observed every 24 h for 25 d of incubation and every new emerging fungus was transferred to a fresh WFA plate. The streaked isolates were sub-cultured in several steps until pure isolates were obtained. The pure isolates from frass and feces were maintained on WFA in Petri plates. Method 2: Five mg frass or feces particles was sprayed over WFA in Petri plates without adding water and incubated at room temperature. The Petri plates were observed daily until 25 d of incubation and fungal colonies growing on frass/feces particles or around them were transferred to fresh WFA plates. Pure cultures were isolated as described above. Method 3: Five mg frass, or feces, was mixed in 2 ml sterilized water and it was further diluted 10 and 100 times; 100 μl aliquots from each dilution with frass or feces particles were spread on WFA Petri plates and incubated at room temperature. Petri plates were observed every day; every emerging fungal colony was transferred to fresh WFA- and PDA plates and the isolation process was employed as described above.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแยกความหลากหลายมากที่สุดของเชื้อราจาก frass และอุจจาระ พื้นผิวเหล่านี้ถูก incubated โดยใช้วิธีการสาม วิธีการ 1:1 g ด้วง frass หรือด้วงอุจจาระ wetted 5 ml ใส่น้ำ และ incubated ในบีกเกอร์ 25 ml ที่อุณหภูมิห้อง (22 ± 2 ° C) หลังจากคลุมด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ หลังจาก 2-4 d ของคณะทันตแพทยศาสตร์ เชื้อราที่ปรากฏบนพื้นผิวของ frass หรืออุจจาระถูกโอนย้ายไปด้วง frass agar (WFA) ในจาน Petri ช่วยเข็มโลหะ sterilized (Azeem et al. 2013) WFA ถูกเตรียม โดยการเพิ่ม frass ด้วง 10 กรัมและ 20 กรัม agar ในน้ำ 1000 ml demineralized และ autoclaving ที่ 121 ° C สำหรับ 40 นาที pH WFA ได้ 4.5-5 ผิว frass/อุจจาระ ในบีกเกอร์ที่สังเกตทุก 24 ชมสำหรับ d 25 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ และทุกเชื้อราเกิดใหม่ถูกถ่ายโอนไปจาน WFA สด แยกลายได้ย่อยอ่างในหลายขั้นตอนจนกระทั่งแยกบริสุทธิ์ได้รับการ แยกบริสุทธิ์จาก frass และอุจจาระถูกรักษาไว้บน WFA ใน Petri แผ่น วิธีที่ 2: 5 มิลลิกรัม frass หรืออุจจาระอนุภาคถูกพ่นผ่าน WFA ใน Petri แผ่นโดยไม่ต้องเพิ่มน้ำ และ incubated ที่อุณหภูมิห้อง จาน Petri สุภัคทุกวันจนถึง d 25 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ และอาณานิคมที่เชื้อราเติบโต บนอนุภาค frass/อุจจาระ หรือรอบ ๆ ถูกโอนย้ายไปที่แผ่น WFA สด วัฒนธรรมบริสุทธิ์ถูกแยกตามที่อธิบายไว้ข้างต้น วิธีที่ 3: frass 5 มิลลิกรัม หรืออุจจาระ ถูกผสมในน้ำ 2 ml sterilized และได้เพิ่มเติมทำให้ครั้งที่ 10 และ 100 100 μl aliquots จากแต่ละเจือจางด้วยอนุภาค frass หรืออุจจาระถูกแพร่กระจายบนแผ่น WFA Petri และ incubated ที่อุณหภูมิห้อง จาน Petri สุภัคทุกวัน ทุกโคโลนีเชื้อราเกิดขึ้นถูกถ่ายโอนไปสดแผ่น WFA และ PDA และการแยกถูกว่าจ้างตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อแยกความหลากหลายที่ยิ่งใหญ่ที่สุดของเชื้อราจาก frass และอุจจาระพื้นผิวเหล่านี้ถูกบ่มโดยใช้สามวิธี วิธีที่ 1: 1 กรัม frass ด้วงหรือมอดอุจจาระถูกเปียกด้วย 5 มล. น้ำหมันและบ่มในบีกเกอร์ 25 มล. ที่อุณหภูมิห้อง (22 ± 2 ° C) หลังจากที่ครอบคลุมกับอลูมิเนียม หลังจาก 2-4 วันของการบ่มเชื้อราปรากฏบน frass- อุจจาระหรือพื้นผิวที่ถูกย้ายไปมอด-frass วุ้น (WFA) ในจานเลี้ยงเชื้อด้วยความช่วยเหลือของเข็มโลหะฆ่าเชื้อ (ที่ Azeem et al. 2013) WFA ถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 10 กรัม frass มอดและ 20 กรัมวุ้น 1000 มล. น้ำปราศจากแร่ธาตุและนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาทีค่า pH ของ WFA เป็น 4.5-5 frass / อุจจาระพื้นผิวในบีกเกอร์ได้สังเกตทุก 24 ชั่วโมงเป็นเวลา 25 วันของการบ่มและทุกเชื้อราที่เกิดขึ้นใหม่ใหม่ที่ถูกย้ายไปเป็นแผ่น WFA สด เชื้อลายถูกย่อยเพาะเลี้ยงในหลายขั้นตอนจนสายพันธุ์บริสุทธิ์ที่ได้รับ เชื้อบริสุทธิ์จาก frass และอุจจาระได้รับการดูแลใน WFA ในจานเพาะเชื้อ วิธีที่ 2: ห้าอนุภาคมิลลิกรัม frass หรืออุจจาระพ่นมากกว่า WFA ในจานเพาะเชื้อโดยไม่ต้องเพิ่มน้ำและบ่มที่อุณหภูมิห้อง จานเลี้ยงเชื้อที่พบในชีวิตประจำวันจนถึงวันที่ 25 d ของการบ่มและเชื้อราที่เจริญเติบโตบนอาณานิคม frass / อนุภาคอุจจาระหรือรอบตัวพวกเขาถูกย้ายไปแผ่น WFA สด วัฒนธรรมบริสุทธิ์ที่แยกได้อธิบายไว้ข้างต้น วิธีที่ 3: ห้ามิลลิกรัม frass หรืออุจจาระผสมใน 2 มิลลิลิตรน้ำฆ่าเชื้อและได้รับการปรับลดอีก 10 และ 100 ครั้ง; 100 aliquots ไมโครลิตรจากการลดสัดส่วนแต่ละคนมีอนุภาค frass หรืออุจจาระกระจายอยู่บนจาน WFA Petri และบ่มที่อุณหภูมิห้อง จาน Petri ถูกตั้งข้อสังเกตทุกวัน อาณานิคมของเชื้อราที่เกิดขึ้นใหม่ทุกถูกย้ายไป WFA- สดและแผ่นพีดีเอและขั้นตอนการแยกเป็นลูกจ้างที่อธิบายข้างต้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกเชื้อราจากความหลากหลายที่ยิ่งใหญ่ที่สุดของ frass และอุจจาระ , พื้นผิวเหล่านี้โดยใช้ 3 วิธี คือ วิธีที่ 1 : 1 กรัม หรือ มอด มอด frass อุจจาระก็เปียกด้วยน้ำ 5 มิลลิลิตรที่เป็นหมันและ 25 มิลลิลิตรบ่มในบีกเกอร์ที่อุณหภูมิห้อง ( 22 ± 2 ° C ) หลังจากที่ครอบคลุมกับฟอยล์ หลังจากบ่ม 2 – 4 D ,เชื้อราที่ปรากฏบนพื้นผิว frass - หรืออุจจาระที่ถูกโอนไปยังมอด frass ( wfa ) ในจานเพาะเลี้ยง ด้วยการช่วยเหลือของการฆ่าเชื้อเข็มโลหะ ( azeem et al . 2013 ) wfa เตรียมเพิ่ม 10 กรัม และ 20 กรัมวุ้นในใบ frass 1000 มล. เปอร์เซนต์น้ำและอัตราส่วนโฟกัสที่ 121 ° C เป็นเวลา 40 นาที ของ wfa คือ 4.5 – 5การ frass / อุจจาระพื้นผิวในบีกเกอร์สังเกตทุก 24 H 25 D ของการบ่มและทุกใหม่เชื้อราถูกโอนไปยังจาน wfa สด ส่วนลายสายพันธุ์ ถูกย่อยในการเพาะเลี้ยงหลายขั้นตอนจนบริสุทธิ์ที่แยกได้ บริสุทธิ์ที่แยกได้จากอุจจาระที่ถูกเก็บรักษาไว้ใน frass wfa ใน Petri จาน วิธีที่ 2 :5 มิลลิกรัม frass หรืออุจจาระอนุภาคถูกพ่นผ่าน wfa ใน Petri แผ่นโดยไม่ต้องเพิ่มน้ำและบ่มที่อุณหภูมิห้อง ส่วนจาน Petri พบทุกวันจนกว่า 25 D บ่มเชื้อราเติบโตและอาณานิคมบนอนุภาค frass / อุจจาระหรือรอบ ๆพวกเขาถูกถ่ายโอนไปยังแผ่น wfa สด แยกเชื้อบริสุทธิ์ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น วิธีที่ 3 : 5 มิลลิกรัม frass หรืออุจจาระผสมใน 2 ml ฆ่าเชื้อน้ำและก็ยังเจือจาง 10 และ 100 ครั้ง ; 100 μผมเฉยๆ จากแต่ละระดับ frass หรืออุจจาระพบอนุภาคกระจายใน wfa จาน Petri บ่มที่อุณหภูมิห้อง จานเพาะเลี้ยงพบว่า ทุกๆ วัน ทุกๆ เกิดเชื้อราอาณานิคมถูกย้ายไป wfa สด - และแผ่น PDA และกระบวนการแยกใช้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น