3. ResultsThree hundred and sixty-f

3. Results
Three hundred and sixty-four isolates reported positive previously for dengue infection by IFA were positive for the presence of flavivirus by RT-PCR amplification with FLAVI-1/2 primers (Table 1). Of these samples, 123 were subject to restriction enzyme digestion and 65 were sequenced. Thirty-seven samples of acute-phase sera were also subject to IFA (n = 30), RT-PCR/RFLP (n = 37) and sequencing (n = 37) ( Table 2). Using the simple and rapid PCR-RFLP procedure described in this paper, the four dengue virus serotypes, Yellow Fever, West Nile and St. Louis encephalitis viruses could be discriminated among in less than 24 h, based on the restriction fragment patterns observed after electrophoresis ( Fig. 1). No major differences among the 4 dengue serotypes in sensitivity or specificity of the RT-PCR/RFLP test was observed ( Table 1 and Table 2).
Viruses from both culture and acute-phase sera were tested by the three methods under comparison and yielded similar results. Using RNA extracted from cultured virus or from virus in acute-phase sera, the technique described in this paper was 98% and 97% specific, respectively, when compared to results obtained by IFA. For cultured virus, 113 samples which had had a serotype identified definitively by IFA were assayed by RT-PCR/RFLP and 111 (98%) of the RT-PCR/RFLP results confirmed the serotype identified by IFA (Table 1). For acute-phase human sera, 29 samples which had had a serotype identified definitively by IFA were assayed by RT-PCR/RFLP and 28 (97%) of the RT-PCR/RFLP results confirmed the serotype identified by IFA (Table 2).

The technique described above was also 100% specific when compared to results obtained by gene sequencing. Of the total 65 samples of cultured virus that were gene sequenced and for which RT-PCR/RFLP results existed, all sequencing results confirmed the serotype identified by RT-PCR/RFLP (Table 1). A similar result was achieved when using acute-phase sera: all 37 sequencing results confirmed the serotype identified by RT-PCR/RFLP (Table 2). By comparison, 58 cultured virus samples and 29 acute-phase serum samples which had had a serotype identified definitively by IFA were gene sequenced and 56 (97%) for cultured virus, and 28 (97%) for sera, of the sequencing results confirmed the serotype identified by IFA (Table 1 and Table 2). The few mismatches are thought to be due to errors in the IFA analysis, which occurred relatively early in the study (1999, 2001 and 2004), and not in the RT-PCR/RFLP technique, which was repeated for samples which demonstrated results at variance with IFA.

Using acute-phase sera from 2009 and 2010, a level of sensitivity for the RT-PCR/RFLP procedure was observed that also demonstrates the clinical utility of this method. Five samples collected on day 3 of fever (2009, n = 4; 2010, n = 1) and one sample collected on day 5 of fever (2009) yielded clear RFLP results: adequate amounts of virus were present in the serum to be amplified by the method described in this paper, and to provide a physician with a molecular diagnosis of the febrile illness within 4 days of its onset, without needing to perform gene sequencing to identify the virus ( Table 2).

For regional interest, the dengue serotypes observed to be in circulation in Panama for the years 1994–2005 and 2007–2010 were also analyzed (data not shown). The results obtained by RT-PCR/RFLP and sequencing are mostly in agreement with the serotypes found to be circulating in Panama published previously for 1994–2005 (Larrú-Martínez et al., 2006 and PAHO, 2000), but due to the small sample size used in this study, not all the same serotypes for each year are represented in this study. For the first time, the dengue serotypes in circulation in Panama for 2007–2010 (Table 2) were investigated, with the findings that serotype 3 has been prevalent until 2010.

In silico analysis of the Ilheus, Bussuquara, Modoc, Aroa, Naranjal and Jutiapa flaviviruses for the FLAVI-1/2 primer binding sites of Ayers et al. (2006) in the NS5 gene sequences available demonstrated that some of these viruses would be amplified theoretically under the conditions described in this paper (Appendix Fig. A1). Analysis of the theoretical FLAVI-1/2 amplicons of these flaviviruses for HaeIII and MspI restriction sites showed that the Aroa, Jutiapa, Ilheus and Modoc viruses yielded distinctive high-molecular weight bands when compared to DENV-1, 2, 3 and 4, Yellow Fever, West Nile or St. Louis encephalitis viruses, but that the Naranjal and Bussuquara viruses gave restriction patterns that are difficult to distinguish from one another (Appendix Fig. A2 and Fig. A3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ผลลัพธ์สามร้อย และหก - สี่แยกรายงานบวกก่อนหน้านี้ ป่วย โดย IFA มีค่าบวกสำหรับของ flavivirus โดยขยาย RT-PCR กับไพรเมอร์ FLAVI-1/2 (ตารางที่ 1) ตัวอย่างเหล่านี้ 123 ถูกจำกัดเอนไซม์ย่อยอาหาร และมีการเรียงลำดับ 65 ตัวอย่างสามสิบเจ็ดของระยะเฉียบพลันจะยังถูก IFA (n = 30), RT-PCR/RFLP (n = 37) และลำดับ (n = 37) (ตารางที่ 2) ใช้ง่าย และรวดเร็ว PCR-RFLP ในเอกสารนี้ ไวรัสไข้เลือดออก 4 serotypes ไข้เหลือง เวสต์ไนล์และ St. Louis โรคไข้สมองอักเสบไวรัสสามารถ discriminated ระหว่างในน้อยกว่า 24 ชม ตามรูปแบบส่วนข้อจำกัดที่พบหลัง electrophoresis (Fig. 1) ไม่แตกต่างที่สำคัญระหว่าง serotypes ป่วย 4 ความไวหรือ specificity ทดสอบ RT-PCR/RFLP ถูกตรวจสอบ (ตารางที่ 1 และตารางที่ 2)ไวรัสจากวัฒนธรรมและระยะเฉียบพลันจะถูกทดสอบ โดยวิธีการสามภายใต้การเปรียบเทียบ และหาผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกัน ใช้อาร์เอ็นเอที่สกัด จากอ่างไวรัส หรือไวรัสในระยะเฉียบพลันจะ เทคนิคที่อธิบายไว้ในเอกสารนี้ได้ 98% และ 97% เฉพาะ ตามลำดับ เมื่อเทียบกับผลที่ได้รับ โดย IFA สำหรับไวรัสอ่าง ตัวอย่าง 113 ซึ่งเคยมี serotype ที่ระบุแน่นอน IFA มี assayed โดย RT-PCR/RFLP และ 111 (98%) ผลการ RT-PCR/RFLP ยืนยัน serotype ที่ระบุ โดย IFA (ตาราง 1) ในระยะเฉียบพลันจะมนุษย์ ตัวอย่าง 29 ซึ่งเคยมี serotype ที่ระบุแน่นอน IFA มี assayed โดย RT-PCR/RFLP และ 28 (97%) ผลการ RT-PCR/RFLP ยืนยัน serotype ที่ระบุ โดย IFA (ตาราง 2)เทคนิคที่อธิบายข้างต้นยังเป็น 100% เมื่อเทียบกับผลที่ได้รับ โดยจัดลำดับยีนเฉพาะ การรวม 65 ตัวอย่างไวรัสอ่างที่เรียงลำดับยีน และสำหรับที่ RT-PCR/RFLP ผล อยู่ ลำดับทั้งหมดผลลัพธ์ยืนยัน serotype ที่ระบุ โดย RT-PCR/RFLP (ตาราง 1) ผลคล้ายสำเร็จเมื่อใช้ระยะเฉียบพลันจะ: ทั้งหมด 37 ลำดับผลลัพธ์ยืนยัน serotype ที่ระบุ โดย RT-PCR/RFLP (ตารางที่ 2) โดยการเปรียบเทียบ 58 อ่างตัวอย่างไวรัส และตัวอย่างซีรั่มระยะเฉียบพลัน 29 ซึ่งเคยมี serotype ที่ระบุแน่นอน IFA มีเรียงลำดับยีน และ 56 (97%) สำหรับไวรัสอ่าง และ 28 (97%) สำหรับนโยบาย ผลการจัดลำดับยืนยัน serotype ที่ระบุ โดย IFA (ตารางที่ 1 และตารางที่ 2) Mismatches บางที่คิดให้เนื่องจากข้อผิดพลาดในการวิเคราะห์ IFA ซึ่งเกิดขึ้นค่อนข้างเร็ว ในการศึกษา (1999, 2001 และ 2004), และไม่ เทคนิค RT-PCR/RFLP ซึ่งไม่ซ้ำกันสำหรับตัวอย่างที่แสดงผลทับ IFAใช้ระยะเฉียบพลันจะจาก 2009 และ 2010 ระดับความสำคัญสำหรับกระบวนการ RT-PCR/RFLP ของถูกสังเกตที่ยังแสดงให้เห็นถึงอรรถประโยชน์ทางคลินิกของวิธีการนี้ รวบรวมตัวอย่างที่ 5 ในวันที่ 3 ของไข้ (2009, n = 4; 2010, n = 1) และตัวอย่างหนึ่งที่รวบรวมในวันที่ 5 ของไข้ (2009) หาผล RFLP ชัดเจน: เพียงพอจำนวนไวรัสอยู่ในเซรั่มขยาย โดยวิธีการอธิบายไว้ในเอกสารนี้ และ เพื่อให้แพทย์วินิจฉัยระดับโมเลกุลของการเจ็บป่วยไข้ภายใน 4 วันของการเริ่ม ไม่จำเป็นต้องทำลำดับยีนในการระบุไวรัส (ตารางที่ 2)สำหรับความสนใจภูมิภาค ไข้เลือดออก serotypes สังเกตจะไหลเวียนในปานามาในปี 1994-2005 และ 2007 – 2010 แนะนำวิเคราะห์ (ข้อมูลไม่แสดง) ผลที่ได้รับ โดย RT-PCR/RFLP และลำดับเป็นส่วนใหญ่ยังคง serotypes ที่พบจะมีหมุนเวียนในปานามาที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้ในปี 1994-2005 (Larrú-Martínez และ al., 2006 และ PAHO, 2000), ได้ขนาดตัวอย่างขนาดเล็กที่ใช้ในการศึกษานี้ ไม่เหมือน serotypes สำหรับแต่ละปีจะแสดงในการศึกษานี้ ครั้งแรก serotypes ไข้เลือดออกในการหมุนเวียนในปานามาในปี 2007-2010 (ตารางที่ 2) ได้ตรวจสอบ มีผลการวิจัยที่ serotype 3 ได้แพร่หลายจนถึง 2553ในการวิเคราะห์ silico Ilheus, Bussuquara, Modoc, Aroa, flaviviruses Naranjal และ Jutiapa สำหรับ FLAVI-1/2 รองพื้นรวมไซต์ของเอเยอร์ส et al. (2006) ในลำดับ NS5 ยีนที่มีแสดงว่า บางส่วนของไวรัสเหล่านี้จะขยายครั้งแรกราคาภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ในเอกสารนี้ (ภาคผนวกฟิก A1) วิเคราะห์ของ amplicons FLAVI-1/2 ทฤษฎีของ flaviviruses เหล่านี้ HaeIII และ MspI จำกัดท่องเที่ยวพบว่า ไวรัส Aroa, Jutiapa, Ilheus และ Modoc เต็มวงน้ำหนักโมเลกุลสูงโดดเด่นเมื่อเทียบกับ DENV-1, 2, 3 และ 4 ไข้เหลือง เวสต์ไนล์ หรือ St. Louis โรคไข้สมองอักเสบไวรัส แต่ว่า ไวรัส Naranjal และ Bussuquara ให้ข้อจำกัดของรูปแบบที่ยากต่อการแยกจากกัน (ภาคผนวกฟิก A2 และฟิก A3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.
ผลสามร้อยหกสิบสี่สายพันธุ์ที่เป็นบวกก่อนหน้านี้มีรายงานการติดเชื้อไข้เลือดออกสำหรับโดยที่ปรึกษาทางการเงินเป็นบวกการปรากฏตัวของflavivirus โดยขยาย RT-PCR กับ FLAVI-02/01 ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ตัวอย่างเหล่านี้ 123 เป็นเรื่องการย่อยอาหารเอนไซม์ จำกัด และ 65 มีลำดับขั้นตอน สามสิบเจ็ดตัวอย่างซีรั่มเฉียบพลันเฟสก็ยังเป็นเรื่องที่ปรึกษาทางการเงินอิสระ (n = 30), RT-PCR / RFLP (n = 37) และลำดับ (n = 37) (ตารางที่ 2) ใช้วิธีการ PCR-RFLP ง่ายและรวดเร็วที่อธิบายไว้ในบทความนี้สายพันธุ์ไวรัสไข้เลือดออกสี่สีเหลืองไข้เวสต์ไนล์และเซนต์หลุยส์ไวรัสไข้สมองอักเสบอาจจะมีการเลือกปฏิบัติในหมู่ในเวลาน้อยกว่า 24 ชั่วโมงขึ้นอยู่กับรูปแบบส่วนข้อ จำกัด ที่สังเกตหลังจากที่อิ (รูปที่ 1). ไม่มีความแตกต่างที่สำคัญในหมู่ที่ 4 สายพันธุ์ไข้เลือดออกในความไวหรือความจำเพาะของการทดสอบ RT-PCR / RFLP พบว่า (ตารางที่ 1 และตารางที่ 2).
ไวรัสจากทั้งวัฒนธรรมและซีรั่มเฉียบพลันเฟสได้รับการทดสอบโดยสามวิธีการภายใต้การเปรียบเทียบและให้ผลที่คล้ายกัน ผล. การใช้สารสกัดจากอาร์เอ็นเอไวรัสหรือจากการเพาะเลี้ยงไวรัสในซีรั่มเฉียบพลันเฟสเทคนิคที่อธิบายไว้ในบทความนี้เป็น 98% และ 97% ที่เฉพาะเจาะจงตามลำดับเมื่อเทียบกับผลที่ได้รับจากที่ปรึกษาทางการเงิน สำหรับการเพาะเลี้ยงไวรัส 113 ตัวอย่างซึ่งได้มีการระบุ serotype แตกหักโดยที่ปรึกษาทางการเงินได้รับการวิเคราะห์จาก RT-PCR / RFLP และ 111 (98%) ของ RT-PCR / RFLP ผลการยืนยัน serotype ที่ระบุโดยที่ปรึกษาทางการเงิน (ตารางที่ 1) สำหรับเฉียบพลันเฟสซีรั่มของมนุษย์ 29 ตัวอย่างซึ่งมี serotype ระบุอย่างแน่นอนโดยที่ปรึกษาทางการเงินได้รับการวิเคราะห์จาก RT-PCR / RFLP และ 28 (97%) ของ RT-PCR ผล / RFLP ยืนยัน serotype ระบุปรึกษาทางการเงินอิสระ (ตารางที่ 2) . เทคนิคที่อธิบายไว้ข้างต้นก็ยังเป็น 100% โดยเฉพาะเมื่อเทียบกับผลที่ได้รับจากการจัดลำดับของยีน จากทั้งหมด 65 ตัวอย่างของเชื้อไวรัสที่ถูกเพาะเลี้ยงยีนติดใจและการที่ RT-PCR ผล / RFLP ตนผลการจัดลำดับทั้งหมดได้รับการยืนยัน serotype ที่ระบุโดย RT-PCR / RFLP (ตารางที่ 1) ผลที่คล้ายกันก็ประสบความสำเร็จเมื่อใช้ซีรั่มเฉียบพลันเฟส: ทั้งหมด 37 ผลการจัดลำดับการยืนยัน serotype ที่ระบุโดย RT-PCR / RFLP (ตารางที่ 2) โดยเปรียบเทียบ 58 ตัวอย่างไวรัสที่เพาะเลี้ยงและ 29 ซีรั่มเฉียบพลันเฟสตัวอย่างซึ่งมี serotype ระบุอย่างแน่นอนโดยที่ปรึกษาทางการเงินที่ได้รับยีนติดใจและ 56 (97%) สำหรับไวรัสเพาะเลี้ยงและ 28 (97%) สำหรับซีรั่มของผลการจัดลำดับได้รับการยืนยัน serotype ที่ระบุโดยที่ปรึกษาทางการเงิน (ตารางที่ 1 และตารางที่ 2) ไม่ตรงกันไม่กี่มีความคิดที่จะเกิดจากข้อผิดพลาดในการวิเคราะห์ที่ปรึกษาทางการเงินที่เกิดขึ้นในช่วงต้นของการศึกษา (1999, 2001 และ 2004) และไม่ได้อยู่ในเทคนิค RT-PCR / RFLP ซึ่งได้ซ้ำแล้วซ้ำอีกตัวอย่างที่แสดงให้เห็นถึงผลที่ ขัดกับที่ปรึกษาทางการเงิน. การใช้ซีรั่มเฉียบพลันเฟสจากปี 2009 และ 2010 ซึ่งเป็นระดับของความไวสำหรับขั้นตอน RT-PCR / RFLP พบว่านอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นถึงยูทิลิตี้ทางคลินิกของวิธีการนี้ ห้าตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ในวันที่ 3 ของไข้ (2009, n = 4; 2010, n = 1) และเป็นหนึ่งในตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ในวันที่ 5 ของการมีไข้ (2009) ส่งผล RFLP ชัดเจน: ปริมาณที่เพียงพอของเชื้อไวรัสอยู่ในปัจจุบันในซีรั่มที่จะขยาย โดยวิธีการที่อธิบายไว้ในบทความนี้และเพื่อให้แพทย์กับการวินิจฉัยระดับโมเลกุลของโรคไข้ภายใน 4 วันนับจากวันที่เริ่มมีอาการของมันโดยไม่จำเป็นต้องดำเนินการจัดลำดับของยีนในการระบุไวรัส (ตารางที่ 2). ที่ให้ความสนใจในระดับภูมิภาคที่ serotypes ไข้เลือดออก ข้อสังเกตที่จะอยู่ในการไหลเวียนในปานามาสำหรับปี 1994-2005 และ 2007-2010 วิเคราะห์ยัง (ไม่ได้แสดงข้อมูล) ผลที่ได้จากการ RT-PCR / RFLP และลำดับส่วนใหญ่จะเป็นในข้อตกลงกับสายพันธุ์ที่พบที่จะหมุนเวียนในปานามาเผยแพร่ก่อนหน้านี้สำหรับ 1994-2005 (Larrú-Martínez et al., 2006 และ PAHO, 2000) แต่เนื่องจากมีขนาดเล็ก ขนาดของกลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ไม่ได้ทุกสายพันธุ์เดียวกันในแต่ละปีจะเป็นตัวแทนในการศึกษาครั้งนี้ เป็นครั้งแรกที่สายพันธุ์ไข้เลือดออกในการไหลเวียนในปานามา 2007-2010 (ตารางที่ 2) ได้รับการตรวจสอบกับผลการวิจัยที่ serotype 3 ได้รับการแพร่หลายจนถึงปี 2010 ในการวิเคราะห์ silico ของ Ilheus, Bussuquara, โมดอค, Aroa, Naranjal และ Jutiapa flaviviruses สำหรับ FLAVI-02/01 ไพรเมอร์ที่มีผลผูกพันเว็บไซต์ของเยอร์ตอัล (2006) ในลำดับยีน NS5 ที่มีอยู่แสดงให้เห็นว่าบางส่วนของไวรัสเหล่านี้จะได้รับการขยายทฤษฎีภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ในบทความนี้ (ภาคผนวกรูป. A1) การวิเคราะห์ของทฤษฎี FLAVI-1/2 amplicons ของ flaviviruses เหล่านี้สำหรับ HaeIII และ MspI เว็บไซต์ข้อ จำกัด พบว่า Aroa, Jutiapa ใน Ilheus และไวรัสโมดอคผลวงดนตรีที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงที่โดดเด่นเมื่อเทียบกับ DENV-1, 2, 3 และ 4 สีเหลืองไข้เวสต์ไนล์หรือเซนต์หลุยส์โรคไข้สมองอักเสบไวรัส แต่ที่ไวรัส Naranjal และ Bussuquara ให้รูปแบบที่มีข้อ จำกัด ยากที่จะแยกจากคนอื่น (ภาคผนวกรูป. A2 และรูป. A3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . ผลลัพธ์
สามร้อยหกสายพันธุ์ของการติดเชื้อไข้เลือดออก โดยก่อนหน้านี้รายงานบวก IFA เป็นบวกสำหรับการปรากฏตัวของไวรัสโดยวิธี RT-PCR ) ( กับ flavi-1 / 2 ชนิด ( ตารางที่ 1 ) ตัวอย่างเหล่านี้ ก็เป็นเรื่องการย่อยอาหารเอนไซม์จำกัดและ 65 ถูกนี้ สามสิบเจ็ดตัวอย่างซีรั่มระยะเฉียบพลันยังอาจ IFA ( n = 30 )4 / RFLP ( n = 31 ) และลำดับ ( n = 31 ) ( ตารางที่ 2 ) ใช้ง่ายและรวดเร็วขั้นตอนที่อธิบายไว้ในบทความนี้ว่า ทั้ง 4 ภูมิไวรัสไข้เลือดออก ไข้เหลือง เวสต์ ไนล์ ไวรัสสมองอักเสบ และ เซนต์ หลุยส์ สามารถจำแนกระหว่างในน้อยกว่า 24 ชั่วโมง ตามข้อกำหนดจำเพาะรูปแบบสังเกตหลังจาก electrophoresis ( รูปที่ 1 )ไม่มีความแตกต่างหลักระหว่าง 4 และ 3 ในความไวหรือความจำเพาะของวิธีทดสอบ / RFLP ) ( ตารางที่ 1 และตารางที่ 2 ) .
ไวรัสจากวัฒนธรรมและค่าระยะเฉียบพลัน ทดสอบโดยวิธีการสามวิธีในการเปรียบเทียบและผลผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกัน การเพาะเลี้ยงไวรัส RNA ที่สกัดจากโปรตีนของไวรัสหรือจากระยะเฉียบพลันเทคนิคที่อธิบายไว้ในบทความนี้ 98 และ 97 ที่เฉพาะเจาะจงตามลำดับ เมื่อเปรียบเทียบกับผลที่ได้จากที่ปรึกษาทางการเงิน . การเพาะเลี้ยงไวรัส , 113 ตัวอย่าง ซึ่งมีการระบุหรือแตกหักโดย IFA ถูก assayed โดยวิธี RT-PCR ) / : 111 ( 98% ) และ RT-PCR / RFLP ผลยืนยันโดยระบุ IFA ( ตารางที่ 1 ) ระยะเฉียบพลันของเซรา29 ตัวอย่าง ซึ่งมีการระบุหรือแตกหักโดย IFA ถูก assayed โดยวิธี RT-PCR ) / RFLP และ 28 ( 97% ) ของ 4 / RFLP ผลยืนยัน โดยระบุ โดย IFA ( ตารางที่ 2 ) .

เทคนิคอธิบายไว้ข้างต้นเป็น 100% โดยเฉพาะเมื่อเทียบกับผลลัพธ์ที่ได้จากการจัดลำดับของยีนจากทั้งหมด 65 ตัวอย่างไวรัสที่มียีนและทำการเพาะเลี้ยงต่อ / RFLP ซึ่งผลมีอยู่ทั้งหมดจัดลำดับผลยืนยัน หรือระบุโดยวิธี RT-PCR ) / RFLP ( ตารางที่ 1 ) ผลที่คล้ายกันพบว่าเมื่อใช้วิธีระยะเฉียบพลัน : ทั้งหมด 37 ลำดับผลยืนยัน หรือระบุโดยวิธี RT-PCR ) / RFLP ( ตารางที่ 2 ) โดยการเปรียบเทียบ58 ตัวอย่างไวรัสเลี้ยงและเฉียบพลันระยะ 29 ซีรั่มตัวอย่าง ซึ่งมีการระบุหรือแตกหักโดย IFA เป็นยีนและลำดับ 56 ( 97% ) สำหรับการเพาะเลี้ยงไวรัส และ 28 ( 97% ) สำหรับเซรา ของการยืนยันโดยการระบุผลิตภัณฑ์ ( ตารางที่ 1 และตารางที่ 2 ) ส่วนความไม่กี่คิดว่าเกิดจากข้อผิดพลาดในการวิเคราะห์สร้างสรรค์ซึ่งเกิดขึ้นค่อนข้างเร็วในการศึกษา ( 1999 , 2001 และ 2004 ) และไม่ใช่เทคนิค RT-PCR / RFLP ซึ่งซ้ำสำหรับตัวอย่างที่แสดงผลลัพธ์ที่ความแปรปรวนกับ IFA

ใช้เซราระยะเฉียบพลันจากปี 2009 และ 2010 , ระดับของความไวของวิธี RT-PCR / RFLP ถูกตรวจสอบว่า ยังแสดงให้เห็น ประโยชน์ทางคลินิกของวิธีการนี้ห้าจำนวนในวันที่ 3 ไข้ ( 2009 , n = 4 ; 2553 , n = 1 ) และการเก็บตัวอย่างในวันที่ 5 ของไข้ ( 2009 ) : ให้ผลผลลัพธ์ชัดเจน : ปริมาณที่เพียงพอของไวรัสที่เป็นปัจจุบันในซีรั่มจะขยายตามวิธีการที่อธิบายไว้ในบทความนี้ และเพื่อให้แพทย์กับ การวินิจฉัยระดับโมเลกุลของการเจ็บป่วยไข้ได้ภายใน 4 วัน เริ่มมีอาการของโดยไม่ต้องแสดงลำดับการระบุไวรัสยีน ( ตารางที่ 2 ) .

สำหรับความสนใจในภูมิภาค , ไข้เลือดออก ( สังเกตได้ในการหมุนเวียนในปานามาสำหรับปี 1994 - 2005 และ 2007 – 2010 ยังวิเคราะห์ ( ข้อมูลไม่แสดง )ผลลัพธ์ที่ได้โดยวิธี RT-PCR ) / RFLP จัดลำดับและส่วนใหญ่เป็นข้อตกลงกับที่ 3 พบว่ามีการหมุนเวียนในปานามาที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้สำหรับปี 1994 – 2005 ( แลร์ú - มาร์ตีเนซ et al . , 2006 และปาโฮ , 2000 ) แต่เนื่องจากการขนาดเล็กขนาดตัวอย่างที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ไม่เหมือนทั้งหมด 3 สำหรับ ในแต่ละปีจะแสดงในการศึกษานี้ สำหรับครั้งแรกส่วนไข้เลือดออกในการหมุนเวียนในปานามา ( 2007 – 2010 ( ตารางที่ 2 ) พบว่า มีการค้นพบว่า type 3 ได้รับแพร่หลายจนถึง 2010

ในการวิเคราะห์โครงข่ายใน Ilheus , bussuquara โมดอค aroa , , , และ naranjal Jutiapa ผู้ใหญ่สำหรับ flavi-1 / 2 รวมเว็บไซต์ของไพรเยอร์ et al .( 2006 ) ในลำดับของยีน พบว่าบาง NS5 ของเชื้อไวรัสเหล่านี้จะขยายตามหลักวิชาภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ในบทความนี้ ( ภาคผนวกภาพ A1 ) การวิเคราะห์เชิงทฤษฎี flavi-1 / 2 amplicons ของผู้ใหญ่เหล่านี้และข้อ จำกัด โดยใช้ haeiii เว็บไซต์ พบว่า aroa Jutiapa , ,และไวรัสจาก Ilheus โมด็อคโดดเด่นสูงน้ำหนักโมเลกุลวงเมื่อเทียบกับ denv-1 , 2 , 3 และ 4 , ไข้เหลือง , เวสต์ไนล์ไวรัสสมองอักเสบ หรือ เซนต์ หลุยส์ แต่ไวรัส naranjal bussuquara ให้ข้อ จำกัด รูปแบบและที่ยากที่จะแยกแยะความแตกต่างจากคนอื่น ( ภาคผนวกและมะเดื่อมะเดื่อ A2 A3 )