Phytase activity was measured in te

Phytase activity was measured in terms of inorganic ortophosphate released from the phytic acid by phytase, using a modification of the method of Fiske and Subbarow (Fiske & Subbarow, 1925). A reaction mixture containing 150 μL of cell-free supernatant, cellular crude protein extract and 600 μL of substrate (3 mmol/L Na-phytate in 0.2 mol/L Na-acetate buffer, pH 4.0) was incubated at 37 °C. After 30, 60, 90, 120 and 180 min, the reaction was stopped adding 750 μL of 5% (v/v) trichloroacetic acid (Sigma). The released inorganic phosphate was measured by adding 750 μL of colour reagent prepared daily by mixing four volumes of 1.5% (w/v) ammonium molybdate (Sigma) in a 5.5% (v/v) sulphuric acid solution (Carlo Erba Reagenti, Milan, Italy) and one volume of a 2.7% (w/v) ferrous sulphate (Sigma) solution. The absorbance was measured at 700 nm. One U of phytase activity was defined as the amount of enzyme (contained in the initial volume of a stationary-phase culture of ca. 9.0 log CFU/mL of medium) required to liberate 1 μmol/L of phosphate per min at pH 4.0 and 37 °C. The specific phytase activity was defined as U per mg of protein.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมโอสเตบิลถูกวัดนินทรีย์ ortophosphate ออกจากกรดไฟติก โดยใช้การเปลี่ยนแปลงวิธีการฟิกส์และ Subbarow (ฟิกส์และ Subbarow, 1925) โอสเตบิล แยกส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย μL 150 ของ supernatant ฟรีเซลล์ เซลล์โปรตีน และ μL 600 ของพื้นผิว (3 mmol/L Na-phytate ในบัฟเฟอร์ acetate นา 0.2 mol/L ค่า pH 4.0) incubated ที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจาก 30, 60, 90, 120 และ 180 นาที ปฏิกิริยาถูกหยุดเพิ่ม 750 μL ของกรด 5% (v/v) trichloroacetic (Sigma) ฟอสเฟตอนินทรีย์ที่ออกโดยวัดจากการเพิ่ม μL 750 ของรีเอเจนต์สีไว้ ด้วยผสมสี่ปริมาณ 1.5% (w/v) แอมโมเนีย molybdate (Sigma) ใน 5.5% (v/v) ซัลฟูริกกรดโซลูชัน (Carlo Erba Reagenti มิลาน อิตาลี) และไดรฟ์ข้อมูลหนึ่งของโซลูชันซัลเฟตเหล็ก (Sigma) 2.7% (w/v) ค่าที่ถูกวัดที่ 700 nm U หนึ่งโอสเตบิลกิจกรรมถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ (มีอยู่ในปริมาณเริ่มต้นของวัฒนธรรมเขียนเฟสของ ca. 9.0 ล็อก CFU/mL ของกลาง) จำเป็นต้องปลดปล่อย 1 ไมโครโมล/ลิตรของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 องศาเซลเซียส กิจกรรมโอสเตบิลเฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม phytase วัดในแง่ของ ortophosphate นินทรีย์ปล่อยออกมาจากกรดไฟติกโดย phytase โดยใช้การปรับเปลี่ยนวิธีการและ Fiske Subbarow (Fiske & Subbarow, 1925) ที่ ส่วนผสมที่มีปฏิกิริยา 150 ไมโครลิตรของสารละลายปราศจากเซลล์, สารสกัดจากโปรตีนของเซลล์และ 600 ไมโครลิตรของพื้นผิว (3 มิลลิโมล / ลิตรนาไฟเตทใน 0.2 โมล / ลิตรบัฟเฟอร์นาน้ำนมค่า pH 4.0) ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส หลังจากวันที่ 30, 60, 90, 120 และ 180 นาทีปฏิกิริยาก็หยุดเพิ่ม 750 ไมโครลิตร 5% (v / v) กรดไตรคลอโร (ซิกม่า) ปล่อยฟอสเฟตอนินทรีวัดโดยการเพิ่ม 750 ไมโครลิตรของสารสีที่เตรียมไว้ในชีวิตประจำวันโดยการผสมสี่เล่ม 1.5% (w / v) โมลิบแอมโมเนียม (Sigma) ใน 5.5% (v / v) สารละลายกรดซัลฟูริก (Carlo Erba Reagenti, มิลาน อิตาลี) และปริมาณหนึ่งของ 2.7% (w / v) เฟอรัสซัลเฟต (ซิกม่า) วิธีการแก้ปัญหา ค่าการดูดกลืนวัดที่ 700 นาโนเมตร หนึ่งของกิจกรรม U phytase ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ (ที่มีอยู่ในปริมาณเริ่มต้นของวัฒนธรรมนิ่งเฟสของแคลิฟอร์เนีย 9.0 log CFU / mL ของกลาง) ที่จำเป็นเพื่อปลดปล่อย 1 ไมโครโมล / ลิตรของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 องศาเซลเซียส กิจกรรม phytase เฉพาะถูกกำหนดเป็น U ต่อมิลลิกรัมโปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมที่ 1 เป็นวัดในแง่ของอนินทรีย์ ortophosphate ออกจากกรดไฟติก โดยการใช้ การปรับเปลี่ยนวิธีการ และ subbarow ฟิกซ์ ( Fiske & subbarow 1925 ) ปฏิกิริยาการสังเคราะห์ส่วนผสมที่มี 150 μลิตรนำสารสกัดเซลล์โปรตีนและ 600 μ L ( ( 3 มิลลิโมล / ลิตร : 0.2 mol / l ในนานาอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 4.0 ) บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศา หลังจาก 30 , 60 , 90 , 120 และ 180 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดการเพิ่ม 750 μผม 5% ( v / v ) กรดไตรคลอโรอะซิติก ( Sigma ) ออกฟอสเฟตอนินทรีย์ได้เพิ่ม 750 μ l สีเตรียมโดยการผสมสารเคมีทุกวันสี่เล่ม 1.5 % ( w / v ) แอมโมเนียมโมลิบเดต ( Sigma ) ใน 5.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) สารละลายกรดซัลฟิวริก ( คาร์โล มา reagenti , มิลาน , อิตาลี ) และระดับหนึ่งของ 2.7 % ( w / 5 ) เฟอรัสซัลเฟต ( Sigma ) โซลูชั่น นเป็นวัดที่ 700 นาโนเมตร หนึ่งในกิจกรรมที่ 1 คือ U หมายถึงปริมาณของเอ็นไซม์ที่มีอยู่ในเล่มแรกของวัฒนธรรม stationary phase ของ CA 9.0 log CFU / ml ) ) ต้องปลดปล่อย 1 μ mol / L ของฟอสเฟตต่อนาทีที่ pH 4.0 และ 37 ° C และกิจกรรมที่ถูกกำหนดไว้เฉพาะเจาะจงเป็นคุณต่อมิลลิกรัมโปรตีน .