quantification of ไซโตไคน์ using th

quantification of ไซโตไคน์ using the Meso Scale Discovery pro-inflammatory ไซโตไคน์ multiplex assay according to the manufactures instructions.

Example 3
[026 Example 3 is directed to the inhibition of pro-inflammatory ไซโตไคน์ Tumor Necrosis Factor-alpha ("TNFa") in a primary human macrophage assay by extensively hydrolyzed casein ไฮโดรไลเซต and a greater than 500 Da fraction thereof. Isolated monocytes were suspended in RPMI medium supplemented with 10 % heat-inactivated fetal bovine serum (FBS) and
penicillin/streptavidin. Recombinant human M-CSF was added to a final concentration of 100 ng/ml and cells were incubated at 37 °C and 5% CO2 for 5 days.
[026 On day 5, the ไฮโดรไลเซต samples ที่รวมถึง extensively hydrolyzed casein and a
greater than 500 Da fraction thereof at a final concentration of 0.007, 0.02, 0.08 and 0.2 % m/v were added in RPMI medium with M-CSF. On day 6, the medium ที่รวมถึง the ไฮโดรไลเซต samples was removed and cells were refreshed with hvdrolvsate samples in medium without

M-CSF. One hour after ไฮโดรไลเซต addition, LPS (E. Coli (0111:84) was added to a final
concentration of 10 ng/ml. The cells were then incubated at 37 °C and 5% CO2 for 24 hours
and subsequently supernatants were collected and stored at -20 °C until quantification of TNFa using the Meso Scale Discovery TNFa assay according to the manufactures instructions
[026 As shown in Figs. 28-29, การหลั่งไซโตไคน์ ส่งเสริมการอักเสบ of Tumor Necrosis
Factor-alpha (TNFa) of activated primary human macrophages is inhibited by extensively
hydrolyzed casein and a greater than 500 Da fraction of the extensive casein ไฮโดรไลเซต.
Example 4
[026 Example 4 is directed to the evaluation of pro-inflammatory ไซโตไคน์ messenger RNA expression in the ileum of Non-Obese Diabetic (NOD) mice. Briefly, age-matched female
BALB/c mice were used as the healthy control mice. BALB/c mice were kept on regular chow if not otherwise stated, whereas NOD mice were kept either on regular chow or extensively
hydrolyzed casein (CH)-containing dietary formulation starting at the time of weaning. RNA
isolation from ileum samples was performed by an RNA isolation kit. cDNA was synthesized and ไซโตไคน์ expression was assessed by quantitative real-time PCR. Absolute copy numbers of RNA (molecules/tag) were calculated by running standards and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) as loading control.
[026 As can be seen in Figs. 30-33, การหลั่งไซโตไคน์ ส่งเสริมการอักเสบ of IL1, 11_6, IL18 and IL17 in the ileum of NOD mice is elevated as compared to age-matched healthy (BALB/C) control mice. These elevated levels are decreased in NOD mice fed an extensively hydrolyzed casein diet.
Example 5
[026 Example 5 is directed to the evaluation of pro-inflammatory ไซโตไคน์ profiles from T cell isolated from gut-draining lymph nodes of Non-Obese Diabetic (NOD) mice. Briefly, age-
matched female BALB/c mice were used as the healthy control mice. BALB/c mice were kept on regular chow if not otherwise stated, whereas NOD mice were kept either on regular chow or an extensively hydrolyzed casein (CH)-containing dietary formulation starting at the time of
weaning.
[026 Isolated mesenteric lymph node cells from each group of mice, were stimulated with platebound anti-CD3 in complete medium (DMEM with 10% (vol./vol.) FBS, L-glutamine 2
mmo1/1,100 U/m1 penicillin plus streptomycin). Supernatant fractions were collected 48 h later for ไซโตไคน์ analysis with multiplex ไซโตไคน์ bead arrays according to the manufactures
instructions.
[027 As shown in Figs. 34-35, secretion of pro-inflammatory ไซโตไคน์ IFNy; 1L4, and 1L17 of gut-draining lymph node T cells from NOD mice is elevated as compared to age-matched healthy (BALB/C) control mice. These elevated levels were decreased in NOD mice by an
extensively hydrolyzed casein diet.
Example 6
[0271] Example 6 is directed to ไซโตไคน์ secretion analysis in a murine macrophage cell
line. The J774A.1 murine macrophage cell line was maintained in RPMI-1640 supplemented with 10% (v/v) fetal calf serum, 50 Uml penicillin and 0.5mg/m1streptomycin. Cells were
incubated at 370C with 5% CO2. Casein ไฮโดรไลเซต samples ที่รวมถึง extensively
hydrolysed casein and a greater than 500Da fraction thereof were added to sterile water at a concentration of 100mg/m1 and filter sterilised through 0.2pm nylon filters. As an additional
control also non-filtered sterilized extensively hydrolysed casein was tested. Cells were plated at 1x106 cells/ml and incubated in triplicate with a final concentration of 1 mg/ml ไฮโดรไลเซต for
1 hour. Cells were then either treated with 10Ong/m1LPS or left untreated for 24 hours before
collecting supernatants by centrifugation and storing at -20.C. Supernatants were assessed for each ไซโตไคน์ concentration using individual ELISA assays for IL-l$, IL-6, IL12p40, and TNF-a according to the manufactures instructions. Samples were tested in triplicate and significant differences were calculated using the ordinary one-way ANOVA analysis on graphpad prism 6 software. p

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นับของไซโตไคน์ที่ใช้ทดสอบ multiplex ของ pro-อักเสบไซโตไคน์ค้นพบมาตราส่วนเมโสหน้าตามคำแนะนำของผู้ผลิตตัวอย่างที่ 3[026 อย่าง 3 โดยตรงไปยับยั้งไซโตไคน์ pro-อักเสบเนื้องอกการตายเฉพาะส่วนปัจจัยอัลฟ่า ("TNFa") ในวิเคราะห์หลักมนุษย์ macrophage โดยไฮโดรไลเซตเคซีน hydrolyzed อย่างกว้างขวางและมีมากขึ้นกว่า 500 ดาเศษดังกล่าว แยก monocytes ถูกหยุดชั่วคราวใน RPMI เสริม ด้วย 10% ยกเลิกร้อนครรภ์วัวซีรั่ม (FBS) และ ยา เพนนิซิลลิน/streptavidin วททชมนุษย์ M-CSF ได้เพิ่มความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ng/ml และเซลล์ถูก incubated ที่ 37 ° C และ 5% CO2 5 วัน[026 วัน 5 ที่รวมถึงตัวอย่างไฮโดรไลเซตอย่างกว้างขวาง hydrolyzed เคซีนและมากกว่าเพิ่มเศษส่วนดังกล่าวที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.007, 0.02, 0.08 และ 0.2% m/v ใน RPMI กับ M-CSF ดา 500 ในวันที่ 6 กลางที่รวมถึงตัวอย่างไฮโดรไลเซตถูกเอาออกและเซลล์ถูกฟื้นฟู ด้วยตัวอย่าง hvdrolvsate ในกลางไม่มีM-CSF หนึ่งชั่วโมงหลังจากนี้ไฮโดรไลเซต LPS (E. Coli (0111:84) ถูกเพิ่มเข้าไปตัวสุดท้ายความเข้มข้น 10 ng/ml แล้วก็ incubated ที่ 37 ° C และ 5% CO2 เซลล์ 24 ชั่วโมงและต่อมา supernatants ได้รวบรวม และเก็บไว้ที่-20 ° C จนนับ TNFa ใช้ทดสอบ TNFa ค้นพบมาตราส่วนเมโสหน้าตามคำแนะนำของผู้ผลิต [026 ดังที่แสดงใน Figs. 28-29 ส่งเสริมการอักเสบการหลั่งไซโตไคน์ของการตายเฉพาะส่วนของเนื้องอก ปัจจัยอัลฟ่า (TNFa) ของเปิดหลักมนุษย์บังเอิญถูกห้ามโดยอย่างกว้างขวาง hydrolyzed เคซีนและยิ่งกว่า 500 เศษดาไฮโดรไลเซตเคซีนอย่างละเอียด ตัวอย่างที่ 4[ตัวอย่าง 026 4 โดยตรงไปประเมินค่าเอ็มอาร์เอ็นเอไซโตไคน์ pro-อักเสบใน ileum ของหนูไม่อ้วนโรคเบาหวาน (พยักหน้า) สั้น ๆ อายุคู่หญิง หนู BALB/c ถูกใช้เป็นเมาส์ควบคุมสุขภาพ หนู BALB/c ถูกเก็บไว้ในครัวปกติถ้า ไม่ระบุ ไว้ ในขณะที่หนูพยักหน้าถูกเก็บไว้ ในครัวปกติ หรืออย่างกว้างขวาง hydrolyzed เคซีน (CH) -ประกอบด้วยการกำหนดอาหารราคาเริ่มต้นที่เวลา weaning อาร์เอ็นเอ แยกจากตัวอย่างของ ileum ที่ดำเนินการ โดยมีชุดแยกอาร์เอ็นเอ มีสังเคราะห์ cDNA และไซโตไคน์นิพจน์ถูกประเมิน โดย PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ หมายเลขสำเนาสมบูรณ์ของอาร์เอ็นเอ (แท็กโมเลกุล) คำนวณได้ โดยใช้มาตรฐานและ dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) เป็นการโหลดตัวควบคุม[026 สามารถดูได้ใน Figs. 30-33 ส่งเสริมการอักเสบการหลั่งไซโตไคน์ของ IL1, 11_6, IL18 และ IL17 ใน ileum ของหนูพยักหน้าเป็นการยกระดับเมื่อเทียบกับเมาส์ควบคุมที่สุขภาพ (BALB C) ที่จับคู่อายุ ระดับสูงเหล่านี้จะลดลงในหนูพยักหน้ารับอาหารที่มีเคซีน hydrolyzed อย่างกว้างขวางตัวอย่างที่ 5[ตัวอย่าง 026 5 ตรงการประเมินของโพรไฟล์ไซโตไคน์ pro-อักเสบจาก T เซลล์แยกต่างหากจากลำไส้ระบายน้ำเหลืองโหนดของหนูไม่อ้วนโรคเบาหวาน (พยักหน้า) สั้น ๆ อายุ-หนู BALB/c หญิงตรงกันถูกใช้เป็นเมาส์ควบคุมสุขภาพ หนู BALB/c ถูกเก็บไว้ในครัวปกติถ้า ไม่ระบุ ไว้ ในขณะที่หนูพยักหน้าถูกเก็บไว้ ในครัวปกติหรือเคซีนการ hydrolyzed อย่างกว้างขวาง (CH) -ประกอบด้วยการกำหนดอาหารที่เริ่มต้นในขณะ weaning[026 โหนน้ำเหลือง mesenteric แยกเซลล์จากแต่ละกลุ่มของหนู ได้ถูกกระตุ้น ด้วย CD3 ต้าน platebound ในสมบูรณ์ปานกลาง (DMEM 10% (ปี) FBS, L glutamine 2 ยาเพนนิซิลลิน mmo1/1100 U/m1 บวก streptomycin) ส่วน supernatant ถูกเก็บรวบรวม 48 h สำหรับการวิไซโตไคน์ด้วยอาร์เรย์ลูกปัด multiplex ไซโตไคน์ตามผู้ผลิตในภายหลัง คำแนะนำ[027 พลังตามที่แสดงใน Figs. 34-35 หลั่งของไซโตไคน์ pro-อักเสบ IFNy; 1L 4 และ 1L 17 ลำไส้ระบายเซลล์น้ำเหลืองโหน T จาก หนูพยักหน้าได้สูงเมื่อเทียบกับเมาส์ควบคุมที่สุขภาพ (BALB C) ที่ตรงกับอายุ ระดับสูงเหล่านี้ได้ลดลงในหนูพยักหน้าด้วยความ อย่างกว้างขวาง hydrolyzed อาหารเคซีนตัวอย่างที่ 6 [0271] ถูกนำไปวิเคราะห์การหลั่งไซโตไคน์ในเซลล์ murine macrophage 6 อย่าง บรรทัด รายการเซลล์ murine macrophage J774A.1 ถูกเก็บรักษาไว้ใน RPMI 1640 เสริม ด้วยเซรั่มลูกครรภ์ 10% (v/v) 50 Uml ยาเพนนิซิลลินและ 0.5 มิลลิกรัม/m1streptomycin เซลล์ได้ incubated at 370C with 5% CO2. Casein ไฮโดรไลเซต samples ที่รวมถึง extensively hydrolysed casein and a greater than 500Da fraction thereof were added to sterile water at a concentration of 100mg/m1 and filter sterilised through 0.2pm nylon filters. As an additional control also non-filtered sterilized extensively hydrolysed casein was tested. Cells were plated at 1x106 cells/ml and incubated in triplicate with a final concentration of 1 mg/ml ไฮโดรไลเซต for1 hour. Cells were then either treated with 10Ong/m1LPS or left untreated for 24 hours beforecollecting supernatants by centrifugation and storing at -20.C. Supernatants were assessed for each ไซโตไคน์ concentration using individual ELISA assays for IL-l$, IL-6, IL12p40, and TNF-a according to the manufactures instructions. Samples were tested in triplicate and significant differences were calculated using the ordinary one-way ANOVA analysis on graphpad prism 6 software. p<0.05 was considered significant.[027 As can be seen from Figs. 37-38 การหลั่งไซโตไคน์ ส่งเสริมการอักเสบ IL-12p40 and IL-1/3 from mouse macrophages stimulated with LPS was decreased by extensively hydrolyzed casein, both with or without sterile filtration prior to incubation of the cells (* p<0.05). Secretion of the pro-inflammatory ไซโตไคน์ 1L6 was significantly decreased by extensively hydrolyzed เคซีน (* p < 0.05) หลั่งของไซโตไคน์ pro-อักเสบ TNFa ถูกมากลดที่มากกว่า 500 เศษดาไฮโดรไลเซตเคซีนอย่างละเอียด (* p < 0.05) ยังมีแสดงผลในรูปตาราง Fig. 41

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณของไซโตไคน์โดยใช้มาตราส่วน Meso ค้นพบโปรอักเสบไซโตไคน์ทดสอบหลายตามคำแนะนำของผู้ผลิต. ตัวอย่างที่ 3 [026 ตัวอย่างที่ 3 เป็นผู้กำกับที่จะยับยั้งการอักเสบโปรไซโตไคน์เนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัยอัลฟา ("TNFa") ในการทดสอบ macrophage หลักของมนุษย์โดยการไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวางเคซีนไฮโดรไลเซตและมากกว่า 500 ส่วนดานั้น monocytes แยกถูกระงับใน RPMI กลางเสริมด้วย 10% ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ความร้อนใช้งาน (FBS) และยาปฏิชีวนะ / streptavidin recombinant มนุษย์ M-CSF ถูกบันทึกอยู่ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 100 ng / ml และเซลล์ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ CO2 5% เป็นเวลา 5 วัน. [026 ในวันที่ 5 ไฮโดรไลเซตตัวอย่างที่รวมถึงเคซีนไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวาง และมากกว่า 500 ดาเศษที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 0.007, 0.02, 0.08 และ 0.2% m / โวลต์ที่ถูกเพิ่มเข้ามาในกลาง RPMI กับ M-CSF ในวันที่ 6 ขนาดกลางที่รวมถึงไฮโดรไลเซตตัวอย่างจะถูกลบออกและเซลล์ได้รับการฟื้นฟูที่มีตัวอย่าง hvdrolvsate ในระดับปานกลางโดยไม่ต้องM-CSF หนึ่งชั่วโมงหลังจากที่ไฮโดรไลเซตนอกจากนี้ LPS (อีโคไล (0111: 84) ถูกบันทึกอยู่ในขั้นสุดท้ายความเข้มข้น 10 ng / ml เซลล์ถูกบ่มแล้วที่ 37 องศาเซลเซียสและ CO2 5% เป็นเวลา 24 ชั่วโมง. และ supernatants ภายหลัง ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนกว่าปริมาณของ TNFa ใช้การทดสอบ Meso ขนาดค้นพบ TNFa ตามคำแนะนำของผู้ผลิต[026 ดังแสดงในมะเดื่อ. 28-29 การหลั่งไซโตไคน์ส่งเสริมการอักเสบของเนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัย อัลฟา (TNFa) ขนาดใหญ่ของมนุษย์หลักเปิดใช้งานจะถูกยับยั้งโดยกว้างขวางเคซีนไฮโดรไลซ์และมากกว่า 500 ส่วนดาของเคซีนที่กว้างขวางไฮโดรไลเซต. ตัวอย่างที่ 4 [026 ตัวอย่างที่ 4 เป็นผู้กำกับที่จะประเมินผลการ pro อักเสบไซโตไคน์ ผู้ส่งสารในการแสดงออกของอาร์เอ็นเอของ ileum ไม่อ้วนโรคเบาหวาน (พยักหน้า) หนู. สั้น ๆ อายุที่จับคู่หญิงBalb / C หนูถูกนำมาใช้เป็นหนูควบคุมที่มีสุขภาพดี. Balb / C หนูที่ถูกเก็บไว้ในเชาปกติหากไม่ได้ระบุไว้ในขณะที่พยักหน้า หนูถูกเก็บไว้ทั้งในเชาปกติหรืออย่างกว้างขวางเคซีนไฮโดรไลซ์ (CH) -containing สูตรอาหารเริ่มต้นที่เวลาของการหย่านม อาร์เอ็นเอแยกจากตัวอย่าง ileum ได้ดำเนินการโดยชุดแยกอาร์เอ็นเอ ยีนสังเคราะห์และไซโตไคน์แสดงออกได้รับการประเมินโดยเชิงปริมาณแบบ real-time PCR คัดลอกตัวเลขที่แน่นอนของอาร์เอ็นเอ (โมเลกุล / แท็ก) จะถูกคำนวณโดยใช้มาตรฐานและ dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (GAPDH) เป็นตัวควบคุมการโหลด. [026 ที่สามารถเห็นได้ในมะเดื่อ 30-33, การหลั่งไซโตไคน์ส่งเสริมการอักเสบของ IL1, 11_6, IL18 และ IL17 ใน ileum ของหนูพยักหน้าเป็นที่สูงเมื่อเทียบกับอายุที่จับคู่ที่ดีต่อสุขภาพ (Balb / C) หนูควบคุม ระดับสูงเหล่านี้จะลดลงในหนู NOD เลี้ยงอาหารเคซีนไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวาง. ตัวอย่างที่ 5 [026 ตัวอย่างที่ 5 เป็นผู้กำกับที่จะประเมินผลการ pro อักเสบไซโตไคน์โปรไฟล์จากเซลล์ T ที่แยกได้จากลำไส้ระบายน้ำของต่อมน้ำเหลืองไม่อ้วนโรคเบาหวาน (พยักหน้า) หนู สั้น ๆ , อายุจับคู่หญิง Balb / C หนูถูกนำมาใช้เป็นหนูควบคุมที่ดีต่อสุขภาพ Balb / C หนูที่ถูกเก็บไว้ในเชาปกติหากไม่ได้ระบุไว้ในขณะที่หนู NOD ถูกเก็บไว้ทั้งในเชาปกติหรือเคซีนไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวาง (CH) -containing สูตรอาหารเริ่มต้นที่เวลาของการหย่านม. [026 แยกเซลล์ต่อมน้ำเหลือง mesenteric จาก แต่ละกลุ่มของหนูที่ถูกกระตุ้นด้วย platebound ต่อต้าน CD3 ในสื่อฉบับสมบูรณ์ (DMEM 10% (ฉบับ. / ปริมาตร.) FBS L-glutamine 2 mmo1 / 1,100 penicillin U / m1 บวก streptomycin) เศษส่วนใสที่ถูกเก็บรวบรวม 48 ชั่วโมงต่อมาไซโตไคน์ที่มีการวิเคราะห์หลายไซโตไคน์อาร์เรย์ลูกปัดตามที่ผู้ผลิตคำแนะนำ. [027 ดังแสดงในมะเดื่อ 34-35, การหลั่งของโปรอักเสบไซโตไคน์ IFNy; 1L4 และ 1L17 ของลำไส้ระบายน้ำเซลล์ต่อมน้ำเหลือง T จากหนูพยักหน้าเป็นที่สูงเมื่อเทียบกับอายุที่จับคู่ที่ดีต่อสุขภาพ (Balb / C) หนูควบคุม ระดับสูงเหล่านี้ลดลงในหนู NOD โดยอาหารเคซีนไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวาง. ตัวอย่างที่ 6 [0271] ตัวอย่างที่ 6 เป็นผู้กำกับไซโตไคน์วิเคราะห์หลั่งในเซลล์ macrophage หมาสาย สายพันธุ์ของเซลล์ macrophage หมา J774A.1 ถูกเก็บรักษาไว้ใน RPMI-1640 เสริมด้วย 10% (v / v) ซีรั่มน่องทารกในครรภ์ 50 UML ยาปฏิชีวนะและ 0.5mg / m1streptomycin เซลล์ที่ถูกบ่มที่ 370C กับ CO2 5% เคซีนไฮโดรไลเซตตัวอย่างที่รวมถึงอย่างกว้างขวางย่อยเคซีนและมากกว่า 500Da เศษถูกเพิ่มเข้าไปในน้ำหมันที่ความเข้มข้น 100mg / m1 และกรองฆ่าเชื้อผ่านตัวกรองไนลอน 12:02 ในฐานะที่เป็นเพิ่มเติมการควบคุมยังไม่กรองฆ่าเชื้ออย่างกว้างขวางย่อยเคซีนได้รับการทดสอบ เซลล์ที่ถูกชุบที่ 1x106 เซลล์ / มล. และบ่มในเพิ่มขึ้นสามเท่าที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ 1 mg / ml ไฮโดรไลเซตสำหรับ1 ชั่วโมง เซลล์อยู่แล้วทั้งการรักษาด้วย 10Ong / m1LPS หรือซ้ายได้รับการรักษาเป็นเวลา 24 ชั่วโมงก่อนที่จะเก็บรวบรวม supernatants โดยการหมุนเหวี่ยงและจัดเก็บที่ -20.C. supernatants ได้รับการประเมินในแต่ละไซโตไคน์เข้มข้นโดยใช้การตรวจวิธี ELISA บุคคลสำหรับ $ IL-ลิตร, IL-6, IL12p40, TNF-และเป็นไปตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตัวอย่างการทดสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่าและความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจะถูกคำนวณโดยใช้สามัญทางเดียวในการวิเคราะห์ ANOVA ปริซึม GraphPad 6 ซอฟแวร์ p <0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ. [027 ที่สามารถเห็นได้จากมะเดื่อ 37-38 การหลั่งไซโตไคน์ส่งเสริมการอักเสบ IL-12p40 และ IL-3/1 จาก macrophages เมาส์กระตุ้นด้วย LPS ลดลงเคซีนไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวางทั้งที่มีหรือไม่มีการกรองผ่านการฆ่าเชื้อก่อนที่จะฟักตัวของเซลล์ (* p < 0.05) การหลั่งของโปรอักเสบไซโตไคน์ 1L6 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยการไฮโดรไลซ์อย่างกว้างขวางเคซีน (* p <0.05) การหลั่งของโปรอักเสบไซโตไคน์ TNFa ลดลงอย่างมีนัยสำคัญโดยมากกว่า 500 ส่วนดาของเคซีนที่กว้างขวางไฮโดรไลเซต (* p <0.05) ผลที่ได้แสดงให้เห็นในรูปแบบตารางในรูป 41

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณของไซโตไคน์ใช้เมโสสเกลค้นพบ pro-inflammatory ไซโตไคน์ multiplex การทดสอบตามที่ผู้ผลิตแนะนำ

3
ตัวอย่าง[ 026 ตัวอย่าง 3 โดยไปยับยั้งการ pro-inflammatory ไซโตไคน์เนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัย Alpha ( " tnfa " ) ในการใช้แมโครฟาจของมนุษย์โดยอย่างกว้างขวางจากไฮโดรไลเซตเคซีนและมากกว่า 500 ดาส่วนของมัน แยกโมโนไซทหยุดชั่วคราวใน RPMI เติม 10% fetal bovine serum inactivated ความร้อน ( FBS ) และ
เพนนิซิลลิน / streptavidin .m-csf มนุษย์รีคอมบิแนนท์เพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย 100 ng / ml และเซลล์ที่อุณหภูมิ 37 องศา C และ CO2 5 % เป็นเวลา 5 วัน
[ 026 วันที่ 5 , ไฮโดรไลเซตตัวอย่างที่รวมถึงอย่างกว้างขวางจากเคซีนและ
กว่า 500 ดาส่วนนั้นที่ความเข้มข้นสุดท้าย 0.007 , 0.02 , 0.03 และ 0.2 % M / V เพิ่มเติมใน RPMI กลางกับ m-csf . ในวันที่ 6สื่อที่รวมถึงไฮโดรไลเซตตัวอย่างที่ถูกตัดออกและเซลล์ก็สดชื่นกับ hvdrolvsate ตัวอย่างขนาดกลางไม่ต้อง

m-csf . หนึ่งชั่วโมงหลังจากนอกจากนี้ไฮโดรไลเซต , LPs ( E . coli ( 0111:84 ) คือการเพิ่มความเข้มข้นสุดท้าย
10 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร เซลล์ แล้วบ่มที่ 37 ° C และคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 24 ชั่วโมง
และต่อมา supernatants การเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่ - 20 ° C ถึงปริมาณของ tnfa ใช้เมโสสเกลค้นพบวิธีผลิต tnfa ตามคําแนะนํา
[ 026 ตามที่แสดงในผลมะเดื่อ . เดียวการหลั่งไซโตไคน์ส่งเสริมการอักเสบของเนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัย alpha
( tnfa ) ใช้หลักมนุษย์ macrophages ถูกห้าม โดย
อย่างกว้างขวางไฮโดรไลซ์ โปรตีน และมากกว่า 500 ดาเศษส่วนของไฮโดรไลเซตเคซีนอย่างละเอียด

[ 026 ตัวอย่าง 4 ตัวอย่างที่ 4 เข้าสู่การประเมิน pro-inflammatory ไซโตไคน์ messenger RNA การแสดงออกในส่วนที่ไม่อ้วน เบาหวาน ( พยักหน้า ) หนู สั้น ๆ , age-matched หญิง
หนูสายพันธุ์ Balb / C ที่ใช้เมาส์ควบคุมสุขภาพหนูสายพันธุ์ Balb / C ที่ถูกเก็บไว้ในอาหารปกติ ถ้าไม่ได้ระบุไว้เป็นอย่างอื่น ส่วนหนูก็เก็บทั้งเชาพยักหน้าปกติหรืออย่างกว้างขวาง
ย่อยเคซีน ( CH ) ที่มีสูตรอาหารเริ่มต้นที่เวลาหย่านม แยกจากตัวอย่างส่วน RNA
แสดงโดยอาร์เอ็นเอแยกชุด ยีนสังเคราะห์และการแสดงออกประเมินเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ โดยไซโตไคน์ PCRแน่นอนการคัดลอกตัวเลขของอาร์เอ็นเอ ( โมเลกุล / แท็ก ) คำนวณโดยใช้มาตรฐานและ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( gapdh )
[ 026 โหลดการควบคุม โดยจะเห็นได้จากลูกมะเดื่อ . 19-25 การหลั่งไซโตไคน์ส่งเสริมการอักเสบของไอแอลวัน 11_6 , , , และในส่วนของ il18 il17 พยักหน้า หนูสูงขึ้นเมื่อเทียบกับ age-matched สุขภาพ ( balb / c ) การควบคุมเมาส์ระดับสูงเหล่านี้จะลดลงในหนูที่ได้รับการพยักหน้าจากเคซีนอย่างกว้างขวางในอาหาร เช่น 5

[ 026 ตัวอย่าง 5 เข้าสู่การประเมิน pro-inflammatory ไซโตไคน์โปรไฟล์จากทีเซลล์ที่แยกจากลำไส้ระบายต่อมน้ำเหลืองไม่อ้วนเบาหวาน ( พยักหน้า ) หนู สั้น ๆ , อายุ -
จับคู่หญิงหนูสายพันธุ์ Balb / C ที่ใช้เป็น สุขภาพ การควบคุมหนู