- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Results3.1. Actinomycetes isolation
Results
3.1. Actinomycetes isolation
Actinomycetes were isolated and the morphological appearance of isolates is shown in Figure 1.
Figure 1.
Morphological appearance of isolates.
3.2. Primary screening
Among the 31 actinomycetes isolated from water and sediments of Lake Tana, 13 isolates showed antibacterial activities against at least one of the tested bacteria. In perpendicular streak plate method, results revealed that the isolates, LT001 and LT009 exhibited broad spectrum activities against tested bacteria. The isolate LT002 showed potential activity against E. coli, P. aeruginosa, S. aureus and LT015 has shown a wide range zone of inhibition against E. coli, S. typhi and S. aureus. Isolates LT004 and LT007 was active only against P. aeruginosa. The isolates LT015 showed MIC (33 mm diameter) followed by LT009 (21 mm) and LT 002 (18 mm) against E. coli (Table 1).
Table 1
Zone of inhibition (mm) of the Isolates against tested bacteria using perpendicular streak method.
In agar overlay method, isolates of LT003, LT005 and LT010 was most effective against E. coli, P. aeruginosa, S. typhi and S. aureus. The isolate LT015 was active against E. coli, S. typhi, and S. aureus. The isolates of LT003, LT010 and LT005 showed maximum zone of inhibition i.e., 24 mm, 22 mm and 20mm respectively against P. aeruginosa. The isolate LT005 was observed with maximum zone of inhibition (30 mm) against S. typhi (Table 2).
Table 2
Primary screening of the isolates by using agar overlay method. Zone of inhibition (mm) against tested bacteria.
3.3. Secondary screening of crude extracts
The crude extracts prepared from 11 potential isolates by using solid state and submerged state fermentation methods was subjected to secondary screening by disc and agar well diffusion methods. In disc diffusion method, isolates LT001, LT002, LT004, LT005 and LT008 showed promising results against S. typhi and the results were statistically significant (df 5,12; F=62.90 P=3.44E-08). The isolates LT002 and LT004 was active against E. coli and the results was statistically significant within the tested isolates (df 2, 6; F=183.87; P= 4.14E-06). The inhibition zone of LT007 and LT010 was at the maximum of 11 mm against P. aeruginosa which was comparatively greater than positive control (10 mm) and the result was statistically significant within the crude extracts (df 4, 10; F=7.66; P=0.004 2) (Table 3). The isolates showing promising results against K. pneumonia was statistically significant (df 2, 6; F=6.81; P=0.028 5). Within the isolates tested against S. aureus showed statistically significant results (df 4, 10; F=275.40; P= 3.51E-10).
Table 3
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using disc diffusion method.
In agar well diffusion method, maximum zone of inhibition (13 mm) was recorded from LT001 and LT008 against S. typhi and the results were statistically significant (df 3, 8; F=25.67; P=0.000 18). The inhibition zones of crude extracts from LT001 and LT002 were at the maximum of 12 mm and 10 mm respectively against E. coli and the results were statistically significant (df 2, 6; F=285.36; P=1.13E-06) (Table 4). The extracts of LT003, LT007 and LT009 showed statistically significant results against P. aeruginosa (df 3, 8; F=27.53; P=0.000 14).
Table 4
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using well diffusion method.
The crude extracts obtained from submerged state fermentation, results revealed that LT003, LT006 and LT008 were active against S. typhi; LT003, LT005 and LT008 against E. coli; LT003 and LT009 against P. aeruginosa; LT005 and LT008 against K. pneumonia and LT003, LT005, LT008 and LT009 against S. aureus. The maximum inhibition zone of 11 mm was observed from LT008 against S. typhi which was comparatively similar to positive control (11 mm). The zone of inhibition was greater in all the tested extracts against E. coli compared to positive control. However, maximum inhibition zone of 15 mm was recorded from LT003 against E. coli which was comparatively greater than the positive control (10 mm) (Table 5). Within the isolates the results showed statistically significant (S. typhi, df 3.8; F=10.576; P=0.0037; E. coli, df 3,8; F=49.166; P=1.69E-05; P. aeruginosa, df 2, 8; F=8.25; P=0.0189; K. pneumonia, df 1, 4; F=9.375; P=0.0375 and S. aureus, df 4, 10; F=51.88; P=1.18E-06).
Table 5
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using disc diffusion method.
The secondary screening of extracts produced from submerged state fermentation method was tested by agar well diffusion method and the results revealed that the zone of inhibition from LT008 was 14 mm; LT001 and LT003 was 13 mm against S. typhi. The activity of all tested extracts was comparatively greater than positive control (9 mm). Maximum zone of inhibition (17 mm) was recorded against E. coli from LT005. The zone of inhibition observed from LT005 and LT008 was superior to positive control (12 mm) (Table 6).
Table 6
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using well diffusion method.
Within the isolates tested the results showed statistical significant (S. typhi, df 5, 12; F=19.739; P=2.06E-05; E. coli, df 4, 10; F=46.962: P=1.9E-06; P. aeruginosa, df 6, 14 F=45.92; P=2.04E-08; K. pneumonia, df 2, 6; F=2.654; P=0.149 and S. aureus, df 6,14; F=287.41; 7.8E-14). Among the crude extracts tested against individual bacterial strains, all showed statistically significant result (P
3.1. Actinomycetes isolation
Actinomycetes were isolated and the morphological appearance of isolates is shown in Figure 1.
Figure 1.
Morphological appearance of isolates.
3.2. Primary screening
Among the 31 actinomycetes isolated from water and sediments of Lake Tana, 13 isolates showed antibacterial activities against at least one of the tested bacteria. In perpendicular streak plate method, results revealed that the isolates, LT001 and LT009 exhibited broad spectrum activities against tested bacteria. The isolate LT002 showed potential activity against E. coli, P. aeruginosa, S. aureus and LT015 has shown a wide range zone of inhibition against E. coli, S. typhi and S. aureus. Isolates LT004 and LT007 was active only against P. aeruginosa. The isolates LT015 showed MIC (33 mm diameter) followed by LT009 (21 mm) and LT 002 (18 mm) against E. coli (Table 1).
Table 1
Zone of inhibition (mm) of the Isolates against tested bacteria using perpendicular streak method.
In agar overlay method, isolates of LT003, LT005 and LT010 was most effective against E. coli, P. aeruginosa, S. typhi and S. aureus. The isolate LT015 was active against E. coli, S. typhi, and S. aureus. The isolates of LT003, LT010 and LT005 showed maximum zone of inhibition i.e., 24 mm, 22 mm and 20mm respectively against P. aeruginosa. The isolate LT005 was observed with maximum zone of inhibition (30 mm) against S. typhi (Table 2).
Table 2
Primary screening of the isolates by using agar overlay method. Zone of inhibition (mm) against tested bacteria.
3.3. Secondary screening of crude extracts
The crude extracts prepared from 11 potential isolates by using solid state and submerged state fermentation methods was subjected to secondary screening by disc and agar well diffusion methods. In disc diffusion method, isolates LT001, LT002, LT004, LT005 and LT008 showed promising results against S. typhi and the results were statistically significant (df 5,12; F=62.90 P=3.44E-08). The isolates LT002 and LT004 was active against E. coli and the results was statistically significant within the tested isolates (df 2, 6; F=183.87; P= 4.14E-06). The inhibition zone of LT007 and LT010 was at the maximum of 11 mm against P. aeruginosa which was comparatively greater than positive control (10 mm) and the result was statistically significant within the crude extracts (df 4, 10; F=7.66; P=0.004 2) (Table 3). The isolates showing promising results against K. pneumonia was statistically significant (df 2, 6; F=6.81; P=0.028 5). Within the isolates tested against S. aureus showed statistically significant results (df 4, 10; F=275.40; P= 3.51E-10).
Table 3
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using disc diffusion method.
In agar well diffusion method, maximum zone of inhibition (13 mm) was recorded from LT001 and LT008 against S. typhi and the results were statistically significant (df 3, 8; F=25.67; P=0.000 18). The inhibition zones of crude extracts from LT001 and LT002 were at the maximum of 12 mm and 10 mm respectively against E. coli and the results were statistically significant (df 2, 6; F=285.36; P=1.13E-06) (Table 4). The extracts of LT003, LT007 and LT009 showed statistically significant results against P. aeruginosa (df 3, 8; F=27.53; P=0.000 14).
Table 4
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using well diffusion method.
The crude extracts obtained from submerged state fermentation, results revealed that LT003, LT006 and LT008 were active against S. typhi; LT003, LT005 and LT008 against E. coli; LT003 and LT009 against P. aeruginosa; LT005 and LT008 against K. pneumonia and LT003, LT005, LT008 and LT009 against S. aureus. The maximum inhibition zone of 11 mm was observed from LT008 against S. typhi which was comparatively similar to positive control (11 mm). The zone of inhibition was greater in all the tested extracts against E. coli compared to positive control. However, maximum inhibition zone of 15 mm was recorded from LT003 against E. coli which was comparatively greater than the positive control (10 mm) (Table 5). Within the isolates the results showed statistically significant (S. typhi, df 3.8; F=10.576; P=0.0037; E. coli, df 3,8; F=49.166; P=1.69E-05; P. aeruginosa, df 2, 8; F=8.25; P=0.0189; K. pneumonia, df 1, 4; F=9.375; P=0.0375 and S. aureus, df 4, 10; F=51.88; P=1.18E-06).
Table 5
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using disc diffusion method.
The secondary screening of extracts produced from submerged state fermentation method was tested by agar well diffusion method and the results revealed that the zone of inhibition from LT008 was 14 mm; LT001 and LT003 was 13 mm against S. typhi. The activity of all tested extracts was comparatively greater than positive control (9 mm). Maximum zone of inhibition (17 mm) was recorded against E. coli from LT005. The zone of inhibition observed from LT005 and LT008 was superior to positive control (12 mm) (Table 6).
Table 6
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using well diffusion method.
Within the isolates tested the results showed statistical significant (S. typhi, df 5, 12; F=19.739; P=2.06E-05; E. coli, df 4, 10; F=46.962: P=1.9E-06; P. aeruginosa, df 6, 14 F=45.92; P=2.04E-08; K. pneumonia, df 2, 6; F=2.654; P=0.149 and S. aureus, df 6,14; F=287.41; 7.8E-14). Among the crude extracts tested against individual bacterial strains, all showed statistically significant result (P
0/5000
ผล
3.1 แยก actinomycetes
Actinomycetes ถูกแยก และลักษณะสัณฐานของแยกจะแสดงในรูปที่ 1.
รูปที่ 1.
ลักษณะสัณฐานของแยก
3.2 คัดกรองหลัก
actinomycetes ระหว่าง 31 แยกต่างหากจากน้ำและตะกอนของทาเล แยก 13 พบกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียกับเชื้อแบคทีเรียทดสอบน้อยหนึ่ง ในแนวตั้งฉากแผ่นวิธี ผลเปิดเผยว่า การแยก LT001 และ LT009 จัดแสดงสเปกตรัมกว้างกิจกรรมต่อต้านเชื้อแบคทีเรียที่ผ่านการทดสอบ LT002 แยกแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่เกิดจาก E. coli, S. หมอเทศข้างลาย P. aeruginosa และ LT015 ได้แสดงโซนหลากหลายของยับยั้ง E. coli, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย แยก LT004 และ LT007 ถูกใช้งานอยู่เฉพาะกับ P. aeruginosa แยก LT015 พบ MIC (เส้นผ่าศูนย์กลาง 33 มม.) ตาม ด้วย LT009 (21 มม.) และ LT 002 (18 มม.) กับ E. coli (ตารางที่ 1)
ตาราง 1
โซนยับยั้ง (mm) แยกได้จากเชื้อแบคทีเรียทดสอบโดยใช้วิธีแนวตั้งฉาก
ในวิธีการซ้อนทับ agar แยก LT003, LT005 และ LT010 มีประสิทธิภาพสูงสุดกับ E. coli, P. aeruginosa, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย LT015 แยกถูกใช้งานอยู่กับ E. coli, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย แยก LT003, LT010 และ LT005 พบโซนสูงสุดของยับยั้งเช่น 24 มม. 22 มม. และ 20 มม.ตามลำดับจาก P. aeruginosa การแยก LT005 ถูกตรวจสอบกับเขตสูงสุดของยับยั้ง (30 mm) กับ S. typhi (ตารางที่ 2) .
2 ตาราง
หลักการคัดกรองของการแยกโดยวิธี agar ซ้อนทับ โซนของยับยั้ง (mm) กับเชื้อแบคทีเรียทดสอบ
3.3 การคัดกรองของสารสกัดหยาบรอง
สารสกัดหยาบที่เตรียมจาก 11 อาจแยกโดยของแข็งและวิธีการหมักน้ำท่วมรัฐถูกยัดเยียดให้รองคัดกรอง โดยวิธีแพร่ดีดิสก์และ agar ในดิสก์แพร่วิธี แยก LT001, LT002, LT004, LT005 และ LT008 แสดงให้เห็นว่าแนวโน้มผลกับ s ได้ typhi และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (ข่าวลือ df 5,12 F = P = 3.44E-08 62.90) การแยก LT002 และ LT004 ถูกใช้งานอยู่กับ E. coli และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในการทดสอบแยกได้ (df 2, 6 F = 183.87 P = 4.14E-06) โซน LT007 ยับยั้งและ LT010 ก็สูงสุด 11 มม.กับพี aeruginosa ที่ดีอย่างหนึ่งมากกว่าควบคุมบวก (10 มิลลิเมตร) และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติภายในสารสกัดหยาบ (df 4, 10 F = 7.66 P = 0.004 2) (ตาราง 3) การแยกแสดงผลสัญญากับโรคของคุณได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 2, 6 F = 6.81 P = 0.028 5) ภายในแยกนำมาทดสอบกับ S. แสดงให้เห็นผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 4, 10 หมอเทศข้างลาย F = 275.40 P = 3.51E-10)
ตาราง 3
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักของแข็ง โดยใช้วิธีการแพร่ดิสก์
วิธี agar ดีแพร่ เขตสูงสุดของยับยั้ง (13 มม.) ถูกบันทึกจาก LT001 และ LT008 กับ s ได้ typhi และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 3, 8 F = 25.67 P = 0.000 18) โซนยับยั้งของสารสกัดหยาบจาก LT001 LT002 ถูกที่สูงสุด 12 มม. และ 10 มม.ตามลำดับกับ E. coli และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 2, 6 F = 285.36 P=1.13E-06) (ตาราง 4) สารสกัด LT003, LT007 และ LT009 แสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติกับพี aeruginosa (df 3, 8 F = 27.53 P = 0.000 14) .
ตาราง 4
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักของแข็ง โดยใช้วิธีการแพร่ดี
สารสกัดหยาบที่ได้จากการหมักน้ำท่วมรัฐ ผลเปิดเผยว่า LT003, LT006 และ LT008 ถูกใช้งานกับ S. typhi LT003, LT005 และ LT008 กับ E. coli LT003 และ LT009 กับ P. aeruginosa LT005 และ LT008 กับคุณโรค และ LT003, LT005, LT008 และ LT009 กับ S. หมอเทศข้างลาย โซนยับยั้งสูงสุด 11 มม.ถูกตรวจสอบจาก LT008 กับ S. typhi ที่ดีอย่างหนึ่งคล้ายกับควบคุมบวก (11 มม.) โซนยับยั้งได้มากขึ้นในการทดสอบสารสกัดจาก E. coli เมื่อเทียบกับควบคุมบวก อย่างไรก็ตาม โซนยับยั้งสูงสุด 15 มม.ถูกบันทึกจาก LT003 กับ E. coli ที่ดีอย่างหนึ่งมากกว่าการควบคุมบวก (10 mm) (ตาราง 5) ภายในแยก ผลลัพธ์แสดงให้เห็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (S. typhi, df 3.8 F = 10.576 P = 0.0037 E. coli, df 3,8 F = 49.166 P = 1.69E-05 P. aeruginosa, df 2, 8 F = 8.25 P = 0.0189 คุณโรค df 1, 4 F = 9.375 P = 0.0375 และ S. หมอเทศข้างลาย df 4 10 F = 51.88 P=1.18E-06)
5 ตาราง
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักน้ำท่วม โดยใช้วิธีการแพร่ดิสก์
คัดกรองรองของสารสกัดผลิตจากสภาวะน้ำท่วมหมักวิธีทดสอบ ด้วยวิธี agar แพร่ดี และผลการเปิดเผยว่า โซนยับยั้งการเปลี่ยนจาก LT008 เป็น 14 มม. LT001 และ LT003 ถูก 13 mm กับ S. typhi การทดสอบสารสกัดทั้งหมดมีดีอย่างหนึ่งมากกว่าบวกควบคุม (9 มม.) เขตสูงสุดของยับยั้ง (17 mm) ถูกบันทึกไว้กับ E. coli จาก LT005 โซนยับยั้งจาก LT005 และ LT008 จะควบคุมค่าบวก (12 mm) (ตาราง 6) .
ตาราง 6
โซนของยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักน้ำท่วม โดยใช้วิธีการแพร่ดี
ภายในแยกการทดสอบผลลัพธ์ที่แสดงข้อมูลทางสถิติอย่างมีนัยสำคัญ (S. typhi, df 5, 12 F = 19.739 P = 2.06E-05 E. coli, df 4, 10 F = 46.962: P = 1.9E-06 P. aeruginosa, df 6, 14 F = 45.92 P = 2.04E-08 คุณโรค df 2, 6 F = 2.654 P = 0.149 และ S. หมอเทศข้างลาย df 6.14 F = 287.41 7.8E-14) จากสารสกัดหยาบที่นำมาทดสอบกับแต่ละสายพันธุ์แบคทีเรีย ทั้งหมดแสดงให้เห็นผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P < 0.05) ยกเว้นโรคคุณ
3.4 เรื่องของไมค์และช่อง MBC
MIC ของสารสกัดน้ำมันอยู่ในช่วงจาก 1.46 mg/mL จะ 2.52 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรต่อกรัมบวกแบคทีเรีย (S. หมอเทศข้างลาย) ในแบคทีเรียลบกรัมเช่น E. coli MIC อยู่ในช่วงจาก 1.84 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรกับ 2.82 mg/mL ระหว่างสารสกัดหยาบ 11 ทดสอบผลลัพธ์ของช่อง MBC อยู่ในช่วงจาก 2.92 กับ 7.56 mg/mL กับ S. หมอเทศข้างลาย และ E. coli ช่อง MBC อยู่ในช่วงจาก 3.80 การ 8.46 mg/mL (ตาราง 7) .
ตาราง 7
ไมค์และช่อง MBC ของสารสกัดหยาบ (mg/mL).
3.5 ลักษณะสัณฐานของแยกเลือก
ผลของลักษณะสัณฐานของแยกเลือกเปิดเผยว่า การเติบโตของการแยกดีในแป้งเคซีน agar แยกของ LT005, LT007 และ LT015 พบว่าเจริญเติบโตดีในแป้งเคซีน agar และกลีเซอรยีสต์สกัด ในแร่ agar agar แป้งเคซีน เติบโตยอดเยี่ยมสำหรับ LT009 สี mycelium ชั้นและพื้นผิวแตกต่างกันระหว่างการแยก LT004 ถูกตรวจสอบ ด้วยผง blackish และ LT008 ถูกสังเกต ด้วยเม็ดสีเหลือง (ตาราง 8) .
ตาราง 8
ลักษณะสัณฐานของแยก
3.6 ลักษณะทางสรีรวิทยา และชีวเคมีของแยก
สรีรวิทยา และชีวเคมีผลลัพธ์บ่งชี้ว่า ทั้งหมดที่แยกได้พบว่าความสามารถของไฮโตรไลซ์แป้งและยูเรีย แยกจาก LT001 การ LT005 ก็สามารถไฮโตรไลซ์ celatin LT001 เพื่อ LT003 และ LT005 กับ LT008 ก็สามารถเคซีนไฮโตรไลซ์ ใช้ซิเตรตบวกถูกบันทึกใน LT001, LT003, LT005, LT006 และ LT009 Actinomycetes ทดสอบแสดงให้เห็นว่าการต้านทานกำลังเติบโตใน 5% ความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ อุณหภูมิเหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของส่วนใหญ่แยกได้ระหว่าง 25-30 ° C และ LT008 เกินถึง 40 ° C (ตาราง 9)
3.1 แยก actinomycetes
Actinomycetes ถูกแยก และลักษณะสัณฐานของแยกจะแสดงในรูปที่ 1.
รูปที่ 1.
ลักษณะสัณฐานของแยก
3.2 คัดกรองหลัก
actinomycetes ระหว่าง 31 แยกต่างหากจากน้ำและตะกอนของทาเล แยก 13 พบกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียกับเชื้อแบคทีเรียทดสอบน้อยหนึ่ง ในแนวตั้งฉากแผ่นวิธี ผลเปิดเผยว่า การแยก LT001 และ LT009 จัดแสดงสเปกตรัมกว้างกิจกรรมต่อต้านเชื้อแบคทีเรียที่ผ่านการทดสอบ LT002 แยกแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่เกิดจาก E. coli, S. หมอเทศข้างลาย P. aeruginosa และ LT015 ได้แสดงโซนหลากหลายของยับยั้ง E. coli, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย แยก LT004 และ LT007 ถูกใช้งานอยู่เฉพาะกับ P. aeruginosa แยก LT015 พบ MIC (เส้นผ่าศูนย์กลาง 33 มม.) ตาม ด้วย LT009 (21 มม.) และ LT 002 (18 มม.) กับ E. coli (ตารางที่ 1)
ตาราง 1
โซนยับยั้ง (mm) แยกได้จากเชื้อแบคทีเรียทดสอบโดยใช้วิธีแนวตั้งฉาก
ในวิธีการซ้อนทับ agar แยก LT003, LT005 และ LT010 มีประสิทธิภาพสูงสุดกับ E. coli, P. aeruginosa, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย LT015 แยกถูกใช้งานอยู่กับ E. coli, S. typhi และ S. หมอเทศข้างลาย แยก LT003, LT010 และ LT005 พบโซนสูงสุดของยับยั้งเช่น 24 มม. 22 มม. และ 20 มม.ตามลำดับจาก P. aeruginosa การแยก LT005 ถูกตรวจสอบกับเขตสูงสุดของยับยั้ง (30 mm) กับ S. typhi (ตารางที่ 2) .
2 ตาราง
หลักการคัดกรองของการแยกโดยวิธี agar ซ้อนทับ โซนของยับยั้ง (mm) กับเชื้อแบคทีเรียทดสอบ
3.3 การคัดกรองของสารสกัดหยาบรอง
สารสกัดหยาบที่เตรียมจาก 11 อาจแยกโดยของแข็งและวิธีการหมักน้ำท่วมรัฐถูกยัดเยียดให้รองคัดกรอง โดยวิธีแพร่ดีดิสก์และ agar ในดิสก์แพร่วิธี แยก LT001, LT002, LT004, LT005 และ LT008 แสดงให้เห็นว่าแนวโน้มผลกับ s ได้ typhi และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (ข่าวลือ df 5,12 F = P = 3.44E-08 62.90) การแยก LT002 และ LT004 ถูกใช้งานอยู่กับ E. coli และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในการทดสอบแยกได้ (df 2, 6 F = 183.87 P = 4.14E-06) โซน LT007 ยับยั้งและ LT010 ก็สูงสุด 11 มม.กับพี aeruginosa ที่ดีอย่างหนึ่งมากกว่าควบคุมบวก (10 มิลลิเมตร) และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติภายในสารสกัดหยาบ (df 4, 10 F = 7.66 P = 0.004 2) (ตาราง 3) การแยกแสดงผลสัญญากับโรคของคุณได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 2, 6 F = 6.81 P = 0.028 5) ภายในแยกนำมาทดสอบกับ S. แสดงให้เห็นผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 4, 10 หมอเทศข้างลาย F = 275.40 P = 3.51E-10)
ตาราง 3
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักของแข็ง โดยใช้วิธีการแพร่ดิสก์
วิธี agar ดีแพร่ เขตสูงสุดของยับยั้ง (13 มม.) ถูกบันทึกจาก LT001 และ LT008 กับ s ได้ typhi และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 3, 8 F = 25.67 P = 0.000 18) โซนยับยั้งของสารสกัดหยาบจาก LT001 LT002 ถูกที่สูงสุด 12 มม. และ 10 มม.ตามลำดับกับ E. coli และผลลัพธ์ได้อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (df 2, 6 F = 285.36 P=1.13E-06) (ตาราง 4) สารสกัด LT003, LT007 และ LT009 แสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติกับพี aeruginosa (df 3, 8 F = 27.53 P = 0.000 14) .
ตาราง 4
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักของแข็ง โดยใช้วิธีการแพร่ดี
สารสกัดหยาบที่ได้จากการหมักน้ำท่วมรัฐ ผลเปิดเผยว่า LT003, LT006 และ LT008 ถูกใช้งานกับ S. typhi LT003, LT005 และ LT008 กับ E. coli LT003 และ LT009 กับ P. aeruginosa LT005 และ LT008 กับคุณโรค และ LT003, LT005, LT008 และ LT009 กับ S. หมอเทศข้างลาย โซนยับยั้งสูงสุด 11 มม.ถูกตรวจสอบจาก LT008 กับ S. typhi ที่ดีอย่างหนึ่งคล้ายกับควบคุมบวก (11 มม.) โซนยับยั้งได้มากขึ้นในการทดสอบสารสกัดจาก E. coli เมื่อเทียบกับควบคุมบวก อย่างไรก็ตาม โซนยับยั้งสูงสุด 15 มม.ถูกบันทึกจาก LT003 กับ E. coli ที่ดีอย่างหนึ่งมากกว่าการควบคุมบวก (10 mm) (ตาราง 5) ภายในแยก ผลลัพธ์แสดงให้เห็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (S. typhi, df 3.8 F = 10.576 P = 0.0037 E. coli, df 3,8 F = 49.166 P = 1.69E-05 P. aeruginosa, df 2, 8 F = 8.25 P = 0.0189 คุณโรค df 1, 4 F = 9.375 P = 0.0375 และ S. หมอเทศข้างลาย df 4 10 F = 51.88 P=1.18E-06)
5 ตาราง
โซนยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักน้ำท่วม โดยใช้วิธีการแพร่ดิสก์
คัดกรองรองของสารสกัดผลิตจากสภาวะน้ำท่วมหมักวิธีทดสอบ ด้วยวิธี agar แพร่ดี และผลการเปิดเผยว่า โซนยับยั้งการเปลี่ยนจาก LT008 เป็น 14 มม. LT001 และ LT003 ถูก 13 mm กับ S. typhi การทดสอบสารสกัดทั้งหมดมีดีอย่างหนึ่งมากกว่าบวกควบคุม (9 มม.) เขตสูงสุดของยับยั้ง (17 mm) ถูกบันทึกไว้กับ E. coli จาก LT005 โซนยับยั้งจาก LT005 และ LT008 จะควบคุมค่าบวก (12 mm) (ตาราง 6) .
ตาราง 6
โซนของยับยั้ง (mm) ในการคัดกรองรองของสารสกัดหยาบ (10 mg/mL) ผลิตจากการหมักน้ำท่วม โดยใช้วิธีการแพร่ดี
ภายในแยกการทดสอบผลลัพธ์ที่แสดงข้อมูลทางสถิติอย่างมีนัยสำคัญ (S. typhi, df 5, 12 F = 19.739 P = 2.06E-05 E. coli, df 4, 10 F = 46.962: P = 1.9E-06 P. aeruginosa, df 6, 14 F = 45.92 P = 2.04E-08 คุณโรค df 2, 6 F = 2.654 P = 0.149 และ S. หมอเทศข้างลาย df 6.14 F = 287.41 7.8E-14) จากสารสกัดหยาบที่นำมาทดสอบกับแต่ละสายพันธุ์แบคทีเรีย ทั้งหมดแสดงให้เห็นผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (P < 0.05) ยกเว้นโรคคุณ
3.4 เรื่องของไมค์และช่อง MBC
MIC ของสารสกัดน้ำมันอยู่ในช่วงจาก 1.46 mg/mL จะ 2.52 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรต่อกรัมบวกแบคทีเรีย (S. หมอเทศข้างลาย) ในแบคทีเรียลบกรัมเช่น E. coli MIC อยู่ในช่วงจาก 1.84 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรกับ 2.82 mg/mL ระหว่างสารสกัดหยาบ 11 ทดสอบผลลัพธ์ของช่อง MBC อยู่ในช่วงจาก 2.92 กับ 7.56 mg/mL กับ S. หมอเทศข้างลาย และ E. coli ช่อง MBC อยู่ในช่วงจาก 3.80 การ 8.46 mg/mL (ตาราง 7) .
ตาราง 7
ไมค์และช่อง MBC ของสารสกัดหยาบ (mg/mL).
3.5 ลักษณะสัณฐานของแยกเลือก
ผลของลักษณะสัณฐานของแยกเลือกเปิดเผยว่า การเติบโตของการแยกดีในแป้งเคซีน agar แยกของ LT005, LT007 และ LT015 พบว่าเจริญเติบโตดีในแป้งเคซีน agar และกลีเซอรยีสต์สกัด ในแร่ agar agar แป้งเคซีน เติบโตยอดเยี่ยมสำหรับ LT009 สี mycelium ชั้นและพื้นผิวแตกต่างกันระหว่างการแยก LT004 ถูกตรวจสอบ ด้วยผง blackish และ LT008 ถูกสังเกต ด้วยเม็ดสีเหลือง (ตาราง 8) .
ตาราง 8
ลักษณะสัณฐานของแยก
3.6 ลักษณะทางสรีรวิทยา และชีวเคมีของแยก
สรีรวิทยา และชีวเคมีผลลัพธ์บ่งชี้ว่า ทั้งหมดที่แยกได้พบว่าความสามารถของไฮโตรไลซ์แป้งและยูเรีย แยกจาก LT001 การ LT005 ก็สามารถไฮโตรไลซ์ celatin LT001 เพื่อ LT003 และ LT005 กับ LT008 ก็สามารถเคซีนไฮโตรไลซ์ ใช้ซิเตรตบวกถูกบันทึกใน LT001, LT003, LT005, LT006 และ LT009 Actinomycetes ทดสอบแสดงให้เห็นว่าการต้านทานกำลังเติบโตใน 5% ความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ อุณหภูมิเหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของส่วนใหญ่แยกได้ระหว่าง 25-30 ° C และ LT008 เกินถึง 40 ° C (ตาราง 9)
การแปล กรุณารอสักครู่..
Results
3.1. Actinomycetes isolation
Actinomycetes were isolated and the morphological appearance of isolates is shown in Figure 1.
Figure 1.
Morphological appearance of isolates.
3.2. Primary screening
Among the 31 actinomycetes isolated from water and sediments of Lake Tana, 13 isolates showed antibacterial activities against at least one of the tested bacteria. In perpendicular streak plate method, results revealed that the isolates, LT001 and LT009 exhibited broad spectrum activities against tested bacteria. The isolate LT002 showed potential activity against E. coli, P. aeruginosa, S. aureus and LT015 has shown a wide range zone of inhibition against E. coli, S. typhi and S. aureus. Isolates LT004 and LT007 was active only against P. aeruginosa. The isolates LT015 showed MIC (33 mm diameter) followed by LT009 (21 mm) and LT 002 (18 mm) against E. coli (Table 1).
Table 1
Zone of inhibition (mm) of the Isolates against tested bacteria using perpendicular streak method.
In agar overlay method, isolates of LT003, LT005 and LT010 was most effective against E. coli, P. aeruginosa, S. typhi and S. aureus. The isolate LT015 was active against E. coli, S. typhi, and S. aureus. The isolates of LT003, LT010 and LT005 showed maximum zone of inhibition i.e., 24 mm, 22 mm and 20mm respectively against P. aeruginosa. The isolate LT005 was observed with maximum zone of inhibition (30 mm) against S. typhi (Table 2).
Table 2
Primary screening of the isolates by using agar overlay method. Zone of inhibition (mm) against tested bacteria.
3.3. Secondary screening of crude extracts
The crude extracts prepared from 11 potential isolates by using solid state and submerged state fermentation methods was subjected to secondary screening by disc and agar well diffusion methods. In disc diffusion method, isolates LT001, LT002, LT004, LT005 and LT008 showed promising results against S. typhi and the results were statistically significant (df 5,12; F=62.90 P=3.44E-08). The isolates LT002 and LT004 was active against E. coli and the results was statistically significant within the tested isolates (df 2, 6; F=183.87; P= 4.14E-06). The inhibition zone of LT007 and LT010 was at the maximum of 11 mm against P. aeruginosa which was comparatively greater than positive control (10 mm) and the result was statistically significant within the crude extracts (df 4, 10; F=7.66; P=0.004 2) (Table 3). The isolates showing promising results against K. pneumonia was statistically significant (df 2, 6; F=6.81; P=0.028 5). Within the isolates tested against S. aureus showed statistically significant results (df 4, 10; F=275.40; P= 3.51E-10).
Table 3
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using disc diffusion method.
In agar well diffusion method, maximum zone of inhibition (13 mm) was recorded from LT001 and LT008 against S. typhi and the results were statistically significant (df 3, 8; F=25.67; P=0.000 18). The inhibition zones of crude extracts from LT001 and LT002 were at the maximum of 12 mm and 10 mm respectively against E. coli and the results were statistically significant (df 2, 6; F=285.36; P=1.13E-06) (Table 4). The extracts of LT003, LT007 and LT009 showed statistically significant results against P. aeruginosa (df 3, 8; F=27.53; P=0.000 14).
Table 4
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using well diffusion method.
The crude extracts obtained from submerged state fermentation, results revealed that LT003, LT006 and LT008 were active against S. typhi; LT003, LT005 and LT008 against E. coli; LT003 and LT009 against P. aeruginosa; LT005 and LT008 against K. pneumonia and LT003, LT005, LT008 and LT009 against S. aureus. The maximum inhibition zone of 11 mm was observed from LT008 against S. typhi which was comparatively similar to positive control (11 mm). The zone of inhibition was greater in all the tested extracts against E. coli compared to positive control. However, maximum inhibition zone of 15 mm was recorded from LT003 against E. coli which was comparatively greater than the positive control (10 mm) (Table 5). Within the isolates the results showed statistically significant (S. typhi, df 3.8; F=10.576; P=0.0037; E. coli, df 3,8; F=49.166; P=1.69E-05; P. aeruginosa, df 2, 8; F=8.25; P=0.0189; K. pneumonia, df 1, 4; F=9.375; P=0.0375 and S. aureus, df 4, 10; F=51.88; P=1.18E-06).
Table 5
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using disc diffusion method.
The secondary screening of extracts produced from submerged state fermentation method was tested by agar well diffusion method and the results revealed that the zone of inhibition from LT008 was 14 mm; LT001 and LT003 was 13 mm against S. typhi. The activity of all tested extracts was comparatively greater than positive control (9 mm). Maximum zone of inhibition (17 mm) was recorded against E. coli from LT005. The zone of inhibition observed from LT005 and LT008 was superior to positive control (12 mm) (Table 6).
Table 6
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using well diffusion method.
Within the isolates tested the results showed statistical significant (S. typhi, df 5, 12; F=19.739; P=2.06E-05; E. coli, df 4, 10; F=46.962: P=1.9E-06; P. aeruginosa, df 6, 14 F=45.92; P=2.04E-08; K. pneumonia, df 2, 6; F=2.654; P=0.149 and S. aureus, df 6,14; F=287.41; 7.8E-14). Among the crude extracts tested against individual bacterial strains, all showed statistically significant result (P<0.05) except K. pneumonia.
3.4. Determination of MIC and MBC
MIC of crude extracts ranged from 1.46 mg/mL to 2.52 mg/mL against Gram positive bacterium (S. aureus). In Gram negative bacterium such as E. coli MIC ranged from 1.84 mg/mL to 2.82 mg/mL. Among the 11 crude extracts tested the results of MBC ranged from 2.92 to 7.56 mg/mL against S. aureus and for E. coli, MBC ranged from 3.80 to 8.46 mg/mL (Table 7).
Table 7
MIC and MBC of the crude extracts (mg/mL).
3.5. Morphological characteristics of selected isolates
Results of morphological characteristics of the selected isolates revealed that the growth of the isolates was excellent in starch casein agar. The isolates of LT005, LT007 and LT015 showed excellent growth in starch casein agar and glycerol yeast extract. In mineral agar and starch casein agar growth was excellent for LT009. The aerial and substrate mycelium colour varied among the isolates such as LT004 was observed with blackish pigment and LT008 was observed with yellowish pigment (Table 8).
Table 8
Morphological characteristics of isolates.
3.6. Physiological and biochemical characteristics of isolates
Physiological and biochemical characteristics result indicates that all isolates showed the ability of starch and urea hydrolysis. The isolates from LT001 to LT005 were able to hydrolysis celatin; LT001 to LT003 and LT005 to LT008 were able to hydrolysis casein. The positive utilization of citrate was recorded in LT001, LT003, LT005, LT006 and LT009. The tested actinomycetes showed resistance capacity to grow in 5% concentration of sodium chloride. The optimum temperature for the growth of most isolates was between 25-30 °C and LT008 exceed up to 40 °C (Table 9).
3.1. Actinomycetes isolation
Actinomycetes were isolated and the morphological appearance of isolates is shown in Figure 1.
Figure 1.
Morphological appearance of isolates.
3.2. Primary screening
Among the 31 actinomycetes isolated from water and sediments of Lake Tana, 13 isolates showed antibacterial activities against at least one of the tested bacteria. In perpendicular streak plate method, results revealed that the isolates, LT001 and LT009 exhibited broad spectrum activities against tested bacteria. The isolate LT002 showed potential activity against E. coli, P. aeruginosa, S. aureus and LT015 has shown a wide range zone of inhibition against E. coli, S. typhi and S. aureus. Isolates LT004 and LT007 was active only against P. aeruginosa. The isolates LT015 showed MIC (33 mm diameter) followed by LT009 (21 mm) and LT 002 (18 mm) against E. coli (Table 1).
Table 1
Zone of inhibition (mm) of the Isolates against tested bacteria using perpendicular streak method.
In agar overlay method, isolates of LT003, LT005 and LT010 was most effective against E. coli, P. aeruginosa, S. typhi and S. aureus. The isolate LT015 was active against E. coli, S. typhi, and S. aureus. The isolates of LT003, LT010 and LT005 showed maximum zone of inhibition i.e., 24 mm, 22 mm and 20mm respectively against P. aeruginosa. The isolate LT005 was observed with maximum zone of inhibition (30 mm) against S. typhi (Table 2).
Table 2
Primary screening of the isolates by using agar overlay method. Zone of inhibition (mm) against tested bacteria.
3.3. Secondary screening of crude extracts
The crude extracts prepared from 11 potential isolates by using solid state and submerged state fermentation methods was subjected to secondary screening by disc and agar well diffusion methods. In disc diffusion method, isolates LT001, LT002, LT004, LT005 and LT008 showed promising results against S. typhi and the results were statistically significant (df 5,12; F=62.90 P=3.44E-08). The isolates LT002 and LT004 was active against E. coli and the results was statistically significant within the tested isolates (df 2, 6; F=183.87; P= 4.14E-06). The inhibition zone of LT007 and LT010 was at the maximum of 11 mm against P. aeruginosa which was comparatively greater than positive control (10 mm) and the result was statistically significant within the crude extracts (df 4, 10; F=7.66; P=0.004 2) (Table 3). The isolates showing promising results against K. pneumonia was statistically significant (df 2, 6; F=6.81; P=0.028 5). Within the isolates tested against S. aureus showed statistically significant results (df 4, 10; F=275.40; P= 3.51E-10).
Table 3
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using disc diffusion method.
In agar well diffusion method, maximum zone of inhibition (13 mm) was recorded from LT001 and LT008 against S. typhi and the results were statistically significant (df 3, 8; F=25.67; P=0.000 18). The inhibition zones of crude extracts from LT001 and LT002 were at the maximum of 12 mm and 10 mm respectively against E. coli and the results were statistically significant (df 2, 6; F=285.36; P=1.13E-06) (Table 4). The extracts of LT003, LT007 and LT009 showed statistically significant results against P. aeruginosa (df 3, 8; F=27.53; P=0.000 14).
Table 4
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from solid state fermentation by using well diffusion method.
The crude extracts obtained from submerged state fermentation, results revealed that LT003, LT006 and LT008 were active against S. typhi; LT003, LT005 and LT008 against E. coli; LT003 and LT009 against P. aeruginosa; LT005 and LT008 against K. pneumonia and LT003, LT005, LT008 and LT009 against S. aureus. The maximum inhibition zone of 11 mm was observed from LT008 against S. typhi which was comparatively similar to positive control (11 mm). The zone of inhibition was greater in all the tested extracts against E. coli compared to positive control. However, maximum inhibition zone of 15 mm was recorded from LT003 against E. coli which was comparatively greater than the positive control (10 mm) (Table 5). Within the isolates the results showed statistically significant (S. typhi, df 3.8; F=10.576; P=0.0037; E. coli, df 3,8; F=49.166; P=1.69E-05; P. aeruginosa, df 2, 8; F=8.25; P=0.0189; K. pneumonia, df 1, 4; F=9.375; P=0.0375 and S. aureus, df 4, 10; F=51.88; P=1.18E-06).
Table 5
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using disc diffusion method.
The secondary screening of extracts produced from submerged state fermentation method was tested by agar well diffusion method and the results revealed that the zone of inhibition from LT008 was 14 mm; LT001 and LT003 was 13 mm against S. typhi. The activity of all tested extracts was comparatively greater than positive control (9 mm). Maximum zone of inhibition (17 mm) was recorded against E. coli from LT005. The zone of inhibition observed from LT005 and LT008 was superior to positive control (12 mm) (Table 6).
Table 6
Zone of inhibition (mm) in secondary screening of crude extracts (10 mg/mL) produced from submerged fermentation by using well diffusion method.
Within the isolates tested the results showed statistical significant (S. typhi, df 5, 12; F=19.739; P=2.06E-05; E. coli, df 4, 10; F=46.962: P=1.9E-06; P. aeruginosa, df 6, 14 F=45.92; P=2.04E-08; K. pneumonia, df 2, 6; F=2.654; P=0.149 and S. aureus, df 6,14; F=287.41; 7.8E-14). Among the crude extracts tested against individual bacterial strains, all showed statistically significant result (P<0.05) except K. pneumonia.
3.4. Determination of MIC and MBC
MIC of crude extracts ranged from 1.46 mg/mL to 2.52 mg/mL against Gram positive bacterium (S. aureus). In Gram negative bacterium such as E. coli MIC ranged from 1.84 mg/mL to 2.82 mg/mL. Among the 11 crude extracts tested the results of MBC ranged from 2.92 to 7.56 mg/mL against S. aureus and for E. coli, MBC ranged from 3.80 to 8.46 mg/mL (Table 7).
Table 7
MIC and MBC of the crude extracts (mg/mL).
3.5. Morphological characteristics of selected isolates
Results of morphological characteristics of the selected isolates revealed that the growth of the isolates was excellent in starch casein agar. The isolates of LT005, LT007 and LT015 showed excellent growth in starch casein agar and glycerol yeast extract. In mineral agar and starch casein agar growth was excellent for LT009. The aerial and substrate mycelium colour varied among the isolates such as LT004 was observed with blackish pigment and LT008 was observed with yellowish pigment (Table 8).
Table 8
Morphological characteristics of isolates.
3.6. Physiological and biochemical characteristics of isolates
Physiological and biochemical characteristics result indicates that all isolates showed the ability of starch and urea hydrolysis. The isolates from LT001 to LT005 were able to hydrolysis celatin; LT001 to LT003 and LT005 to LT008 were able to hydrolysis casein. The positive utilization of citrate was recorded in LT001, LT003, LT005, LT006 and LT009. The tested actinomycetes showed resistance capacity to grow in 5% concentration of sodium chloride. The optimum temperature for the growth of most isolates was between 25-30 °C and LT008 exceed up to 40 °C (Table 9).
การแปล กรุณารอสักครู่..
ผลลัพธ์
3.1 . แอคติโนมัยซีทแยกเชื้อแอคติโนมัยสีทที่แยกได้
และลักษณะทางสัณฐานวิทยาลักษณะของสายพันธุ์ที่แสดงในรูปที่ 1
รูปที่ 1
ลักษณะสัณฐานวิทยาของเชื้อ ๒ .
การคัดกรองของ 31 แอคติโนมัยซีสที่แยกได้จากน้ำและดินตะกอนในทะเลสาบธนาสุทธิ 13 สายพันธุ์พบกิจกรรม antibacterial กับอย่างน้อยหนึ่งของทดสอบแบคทีเรียในแนวตั้งฉากแบบจาน ผลพบว่า สายพันธุ์ และมีกิจกรรม lt001 lt009 สเปกตรัมกว้างกับทดสอบแบคทีเรีย แยก lt002 พบกิจกรรมที่อาจเกิดขึ้นกับ E . coli , P . aeruginosa , S . aureus และ lt015 ได้แสดงโซนที่หลากหลายของการยับยั้งต่อเชื้อ E . coli , S . ไทฟอยด์และ S . aureus . lt004 lt007 แยกและใช้เฉพาะกับ P . aeruginosaที่แยกได้ lt015 พบไมค์ ( 33 mm เส้นผ่าศูนย์กลาง ) ตามด้วย lt009 ( 21 มิลลิเมตร ) และมัน 002 ( 18 มม. ) กับ E . coli ( ตารางที่ 1 )
โต๊ะ 1 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ของเชื้อแบคทีเรียที่ใช้วิธีต่อทดสอบแนวตั้งฉาก
วิธีซ้อนทับวุ้น ไอโซเลท lt003 lt005 lt010 , และมีประสิทธิภาพมากที่สุดกับ E . coli , P . aeruginosa , S . ไทฟอยด์และ S . aureus .แยก lt015 ใช้กับเชื้ออีโคไล เอส ไทฟอยด์ และ S . aureus . การแยกเชื้อและ lt003 lt010 , lt005 พบโซนสูงสุดยับยั้งเช่น 24 มม. , 22 มม. และ 20 mm ตามลำดับกับ P . aeruginosa แยก lt005 พบ กับโซนสูงสุดในการยับยั้ง ( 30 มม. ) กับ S . ไทฟอยด์ ( ตารางที่ 2 ) .
หลักของตารางที่ 2 การตรวจเชื้อวุ้นหุ้ม โดยใช้วิธีโซนของการยับยั้ง ( มม. ) กับการทดสอบแบคทีเรีย .
. . การคัดกรองรองสกัด
สารสกัดที่เตรียมจาก 11 ศักยภาพสายพันธุ์โดยใช้วิธีหมักในสถานะของแข็งและรัฐภายใต้รองการคัดกรองโดยดิสก์และวุ้นก็กระจายวิธีการ ใช้ในการแพร่เชื้อ lt001 lt002 lt004 แผ่นดิสก์ , , , และแสดงผล lt005 lt008 สัญญากับเอสไทฟอยด์และผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( DF 5,12 62.90 ; F = p = 3.44e-08 ) การแยกและ lt002 lt004 ใช้กับเชื้ออีโคไลและผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในการทดสอบไอโซเลท ( df = 2 , 6 ; F 183.87 ; p = 4.14e-06 ) การยับยั้ง และอยู่ในโซนของ lt007 lt010 สูงสุด 11 มม. กับ .aeruginosa ซึ่ง comparatively มากกว่าการควบคุมบวก ( 10 มม. ) และส่งผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติภายในสารสกัดส่วนที่ 4 , 10 ; F = 7.66 ; p = 0.004 2 ) ( ตารางที่ 3 ) ที่สามารถแสดงผลมีแนวโน้มกับ K . ปอดบวมอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 6.81 2 , 6 ; F ; p = 0.028 5 ) ภายในสายพันธุ์ทดสอบกับเอสแสดงผลลัพธ์ที่ระดับนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 4 , 10 ; F 275.40 ; p = 3.51e-10 ) .
3
โต๊ะโซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักของแข็งโดยใช้วิธีการกระจายแผ่น
ในวุ้นก็กระจายวิธี , โซน สูงสุดของการยับยั้ง ( 13 มม. ) และบันทึกจาก lt001 lt008 กับเอสไทฟอยด์และผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df 3 , 8 ; F = 25.67 ; p = 0.000 18 ) สารสกัดจาก lt001 โซน และ lt002 อยู่สูงสุด 12 มม. และ 10 มม. ตามลำดับกับเชื้ออีโคไลและผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 2 , 6 ; F 285.36 ; p = 1.13e-06 ) ( ตารางที่ 4 ) สารสกัดจาก lt003 lt007 lt009 , และแสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติต่อหน้า? ส่วน 3 , 8 ; F = 27.53 ; p = 0.000 14 ) .
โต๊ะ 4 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักของแข็งโดยใช้วิธีการกระจายดี
ที่สกัดได้จากการหมักสภาพน้ําท่วม , ผลการศึกษาพบว่า lt003 lt006 lt008 , และมีการใช้งานกับ S . ไทฟอยด์ ; lt003 lt005 lt008 กับ , และ E . coli ;lt003 lt009 กับ P . aeruginosa และ ; และ lt005 lt008 กับ K . โรคปอดบวมและ lt003 lt005 lt008 , และ , lt009 ต่อ S . aureus . สูงสุดบริเวณยับยั้ง 11 มม. สังเกตได้จาก lt008 กับสหรัฐซึ่งเป็นประเทศใกล้เคียงคล้ายกับการควบคุมบวก ( 11 มม. ) ในโซนของการยับยั้งได้มากขึ้นในการทดสอบสารสกัดจาก E . coli เมื่อเทียบกับการควบคุมที่ดี อย่างไรก็ตามการยับยั้งสูงสุด 15 มม. บันทึกจาก lt003 กับเชื้ออีโคไล ซึ่งนับว่ามากกว่าการควบคุมในเชิงบวก ( 10 มม. ) ( ตารางที่ 5 ) ภายในสายพันธุ์พบนัยสำคัญทางสถิติ ( S . ไทฟอยด์ , df = 10.576 3.8 ; F ; p = 0.0037 ; E . coli , df = 49.166 3,8 ; F ; p = 1.69e-05 ; P . aeruginosa , df = 8.25 2 , 8 ; F ; p = 0.0189 ; K . ปอดบวม , df = 4 ; F 9.375 1 ; P = 0.0375 และ S . aureus , DF 451.88 = 10 ; F ; p = 1.18e-06 )
โต๊ะ 5 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักน้ำโดยใช้วิธีการกระจายแผ่น
การคัดกรองรองสารสกัดที่ผลิตจากวิธีหมักรัฐมิดถูกทดสอบโดยวุ้นด้วยการแพร่ วิธีการและผลการศึกษาพบว่า โซนของการขัดขวางจาก lt008 14 มม. ;lt001 lt003 13 มม. ต่อวินาทีและได้รับ . กิจกรรมทั้งหมดที่ทดสอบสารสกัด comparatively มากกว่าการควบคุมบวก ( 9 มม. ) โซนของการยับยั้งสูงสุด ( 17 มม. ) ถูกบันทึกไว้กับเชื้ออีโคไลจาก lt005 . ในโซนของการยับยั้งและสังเกตจาก lt005 lt008 เป็นผู้บังคับบัญชาควบคุมบวก ( 12 มม. ) ( ตารางที่ 6 ) ตารางที่ 6
.โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักน้ำ โดยใช้วิธีกระจายดี
ภายในสายพันธุ์ทดสอบผลทางสถิติ ( S . ไทฟอยด์ , df 5 , 12 ; F = 19.739 ; p = 2.06e-05 ; E . coli , DF 4 , 10 ; F = 46.962 : P = 1.9e-06 ; P . aeruginosa , df = 6 , 14 45.92 F ; p = 2.04e-08 ; K . ปอดบวม , df = 2 , 6 ; F 2.654 ; p = 0.149 และ S . aureus ,DF 6,14 ; F = 287.41 ; 7.8e-14 ) ระหว่างสกัดทดสอบกับแบคทีเรียแต่ละ ทั้งหมดแสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.05 ) ยกเว้น K . ปอดอักเสบ
3.4 . หาไมค์และ MBC
MIC สกัดมีค่า 1.46 mg / ml ถึง 2.52 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรต่อแบคทีเรียแกรมบวก ( S . aureus ) ในแบคทีเรียแกรมลบ เช่น E . coli ไมค์ระหว่าง 1.84 mg / ml ถึง 2.82 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรใน 11 สกัดทดสอบผลลัพธ์ของ MBC ระหว่างน้ำมันดีเซลกับ 7.56 มก. / มล. ต่อ S . aureus และ E . coli , MBC ตั้งแต่ 3.80 เพื่อ 8.46 มก. / มล. ( ตารางที่ 7 ) .
7 ตาราง ' และ MBC ของสกัด ( มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) .
3 . การศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของการคัดเลือกสายพันธุ์
ผลของลักษณะสัณฐานของเลือกสายพันธุ์ พบว่า การเจริญเติบโตของเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นเลิศ , แป้ง ที่แยกได้จาก lt005 lt007 lt015 , และมีการเจริญเติบโตที่ดีในอาหารวุ้น , แป้งและยีสต์สกัดกลีเซอรอล . ในวุ้น และวุ้นแป้งแร่เคซีนการเจริญเติบโตที่ดีสำหรับ lt009 .ทางอากาศพื้นผิวเส้นใยและสีหลากหลายในสายพันธุ์ เช่น lt004 ) กับสีดำกับสีเหลือง และพบ lt008 ( ตารางที่ 8 ) .
โต๊ะ 8 ลักษณะของสายพันธุ์
3.6 สรีรวิทยา และชีวเคมีของเชื้อ
ผลของลักษณะทางสรีรวิทยาและชีวเคมีพบว่าทุกไอโซเลทพบความสามารถในการย่อยแป้งและยูเรีย . ที่แยกได้จาก lt001 เพื่อ lt005 สามารถย่อยสลาย celatin ; lt001 และเพื่อ lt003 lt005 เพื่อ lt008 สามารถย่อยสลายเคซีน . การใช้ประโยชน์เชิงบวกของสารเคมีที่ถูกบันทึกไว้ใน lt001 lt003 lt005 , , , และ lt006 lt009 .ทดสอบแอคติโนมัยซีสพบความจุความต้านทานที่จะเติบโต 5 % ความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อมากที่สุดอยู่ระหว่าง 25-30 องศา C และ lt008 เกินถึง 40 ° C ( ตารางที่ 9 )
3.1 . แอคติโนมัยซีทแยกเชื้อแอคติโนมัยสีทที่แยกได้
และลักษณะทางสัณฐานวิทยาลักษณะของสายพันธุ์ที่แสดงในรูปที่ 1
รูปที่ 1
ลักษณะสัณฐานวิทยาของเชื้อ ๒ .
การคัดกรองของ 31 แอคติโนมัยซีสที่แยกได้จากน้ำและดินตะกอนในทะเลสาบธนาสุทธิ 13 สายพันธุ์พบกิจกรรม antibacterial กับอย่างน้อยหนึ่งของทดสอบแบคทีเรียในแนวตั้งฉากแบบจาน ผลพบว่า สายพันธุ์ และมีกิจกรรม lt001 lt009 สเปกตรัมกว้างกับทดสอบแบคทีเรีย แยก lt002 พบกิจกรรมที่อาจเกิดขึ้นกับ E . coli , P . aeruginosa , S . aureus และ lt015 ได้แสดงโซนที่หลากหลายของการยับยั้งต่อเชื้อ E . coli , S . ไทฟอยด์และ S . aureus . lt004 lt007 แยกและใช้เฉพาะกับ P . aeruginosaที่แยกได้ lt015 พบไมค์ ( 33 mm เส้นผ่าศูนย์กลาง ) ตามด้วย lt009 ( 21 มิลลิเมตร ) และมัน 002 ( 18 มม. ) กับ E . coli ( ตารางที่ 1 )
โต๊ะ 1 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ของเชื้อแบคทีเรียที่ใช้วิธีต่อทดสอบแนวตั้งฉาก
วิธีซ้อนทับวุ้น ไอโซเลท lt003 lt005 lt010 , และมีประสิทธิภาพมากที่สุดกับ E . coli , P . aeruginosa , S . ไทฟอยด์และ S . aureus .แยก lt015 ใช้กับเชื้ออีโคไล เอส ไทฟอยด์ และ S . aureus . การแยกเชื้อและ lt003 lt010 , lt005 พบโซนสูงสุดยับยั้งเช่น 24 มม. , 22 มม. และ 20 mm ตามลำดับกับ P . aeruginosa แยก lt005 พบ กับโซนสูงสุดในการยับยั้ง ( 30 มม. ) กับ S . ไทฟอยด์ ( ตารางที่ 2 ) .
หลักของตารางที่ 2 การตรวจเชื้อวุ้นหุ้ม โดยใช้วิธีโซนของการยับยั้ง ( มม. ) กับการทดสอบแบคทีเรีย .
. . การคัดกรองรองสกัด
สารสกัดที่เตรียมจาก 11 ศักยภาพสายพันธุ์โดยใช้วิธีหมักในสถานะของแข็งและรัฐภายใต้รองการคัดกรองโดยดิสก์และวุ้นก็กระจายวิธีการ ใช้ในการแพร่เชื้อ lt001 lt002 lt004 แผ่นดิสก์ , , , และแสดงผล lt005 lt008 สัญญากับเอสไทฟอยด์และผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( DF 5,12 62.90 ; F = p = 3.44e-08 ) การแยกและ lt002 lt004 ใช้กับเชื้ออีโคไลและผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในการทดสอบไอโซเลท ( df = 2 , 6 ; F 183.87 ; p = 4.14e-06 ) การยับยั้ง และอยู่ในโซนของ lt007 lt010 สูงสุด 11 มม. กับ .aeruginosa ซึ่ง comparatively มากกว่าการควบคุมบวก ( 10 มม. ) และส่งผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติภายในสารสกัดส่วนที่ 4 , 10 ; F = 7.66 ; p = 0.004 2 ) ( ตารางที่ 3 ) ที่สามารถแสดงผลมีแนวโน้มกับ K . ปอดบวมอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 6.81 2 , 6 ; F ; p = 0.028 5 ) ภายในสายพันธุ์ทดสอบกับเอสแสดงผลลัพธ์ที่ระดับนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 4 , 10 ; F 275.40 ; p = 3.51e-10 ) .
3
โต๊ะโซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักของแข็งโดยใช้วิธีการกระจายแผ่น
ในวุ้นก็กระจายวิธี , โซน สูงสุดของการยับยั้ง ( 13 มม. ) และบันทึกจาก lt001 lt008 กับเอสไทฟอยด์และผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df 3 , 8 ; F = 25.67 ; p = 0.000 18 ) สารสกัดจาก lt001 โซน และ lt002 อยู่สูงสุด 12 มม. และ 10 มม. ตามลำดับกับเชื้ออีโคไลและผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( df = 2 , 6 ; F 285.36 ; p = 1.13e-06 ) ( ตารางที่ 4 ) สารสกัดจาก lt003 lt007 lt009 , และแสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติต่อหน้า? ส่วน 3 , 8 ; F = 27.53 ; p = 0.000 14 ) .
โต๊ะ 4 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักของแข็งโดยใช้วิธีการกระจายดี
ที่สกัดได้จากการหมักสภาพน้ําท่วม , ผลการศึกษาพบว่า lt003 lt006 lt008 , และมีการใช้งานกับ S . ไทฟอยด์ ; lt003 lt005 lt008 กับ , และ E . coli ;lt003 lt009 กับ P . aeruginosa และ ; และ lt005 lt008 กับ K . โรคปอดบวมและ lt003 lt005 lt008 , และ , lt009 ต่อ S . aureus . สูงสุดบริเวณยับยั้ง 11 มม. สังเกตได้จาก lt008 กับสหรัฐซึ่งเป็นประเทศใกล้เคียงคล้ายกับการควบคุมบวก ( 11 มม. ) ในโซนของการยับยั้งได้มากขึ้นในการทดสอบสารสกัดจาก E . coli เมื่อเทียบกับการควบคุมที่ดี อย่างไรก็ตามการยับยั้งสูงสุด 15 มม. บันทึกจาก lt003 กับเชื้ออีโคไล ซึ่งนับว่ามากกว่าการควบคุมในเชิงบวก ( 10 มม. ) ( ตารางที่ 5 ) ภายในสายพันธุ์พบนัยสำคัญทางสถิติ ( S . ไทฟอยด์ , df = 10.576 3.8 ; F ; p = 0.0037 ; E . coli , df = 49.166 3,8 ; F ; p = 1.69e-05 ; P . aeruginosa , df = 8.25 2 , 8 ; F ; p = 0.0189 ; K . ปอดบวม , df = 4 ; F 9.375 1 ; P = 0.0375 และ S . aureus , DF 451.88 = 10 ; F ; p = 1.18e-06 )
โต๊ะ 5 โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักน้ำโดยใช้วิธีการกระจายแผ่น
การคัดกรองรองสารสกัดที่ผลิตจากวิธีหมักรัฐมิดถูกทดสอบโดยวุ้นด้วยการแพร่ วิธีการและผลการศึกษาพบว่า โซนของการขัดขวางจาก lt008 14 มม. ;lt001 lt003 13 มม. ต่อวินาทีและได้รับ . กิจกรรมทั้งหมดที่ทดสอบสารสกัด comparatively มากกว่าการควบคุมบวก ( 9 มม. ) โซนของการยับยั้งสูงสุด ( 17 มม. ) ถูกบันทึกไว้กับเชื้ออีโคไลจาก lt005 . ในโซนของการยับยั้งและสังเกตจาก lt005 lt008 เป็นผู้บังคับบัญชาควบคุมบวก ( 12 มม. ) ( ตารางที่ 6 ) ตารางที่ 6
.โซนของการยับยั้ง ( มม. ) ในการคัดกรองรองสกัด ( 10 mg / ml ) ผลิตจากการหมักน้ำ โดยใช้วิธีกระจายดี
ภายในสายพันธุ์ทดสอบผลทางสถิติ ( S . ไทฟอยด์ , df 5 , 12 ; F = 19.739 ; p = 2.06e-05 ; E . coli , DF 4 , 10 ; F = 46.962 : P = 1.9e-06 ; P . aeruginosa , df = 6 , 14 45.92 F ; p = 2.04e-08 ; K . ปอดบวม , df = 2 , 6 ; F 2.654 ; p = 0.149 และ S . aureus ,DF 6,14 ; F = 287.41 ; 7.8e-14 ) ระหว่างสกัดทดสอบกับแบคทีเรียแต่ละ ทั้งหมดแสดงผลอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.05 ) ยกเว้น K . ปอดอักเสบ
3.4 . หาไมค์และ MBC
MIC สกัดมีค่า 1.46 mg / ml ถึง 2.52 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรต่อแบคทีเรียแกรมบวก ( S . aureus ) ในแบคทีเรียแกรมลบ เช่น E . coli ไมค์ระหว่าง 1.84 mg / ml ถึง 2.82 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรใน 11 สกัดทดสอบผลลัพธ์ของ MBC ระหว่างน้ำมันดีเซลกับ 7.56 มก. / มล. ต่อ S . aureus และ E . coli , MBC ตั้งแต่ 3.80 เพื่อ 8.46 มก. / มล. ( ตารางที่ 7 ) .
7 ตาราง ' และ MBC ของสกัด ( มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) .
3 . การศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาของการคัดเลือกสายพันธุ์
ผลของลักษณะสัณฐานของเลือกสายพันธุ์ พบว่า การเจริญเติบโตของเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นเลิศ , แป้ง ที่แยกได้จาก lt005 lt007 lt015 , และมีการเจริญเติบโตที่ดีในอาหารวุ้น , แป้งและยีสต์สกัดกลีเซอรอล . ในวุ้น และวุ้นแป้งแร่เคซีนการเจริญเติบโตที่ดีสำหรับ lt009 .ทางอากาศพื้นผิวเส้นใยและสีหลากหลายในสายพันธุ์ เช่น lt004 ) กับสีดำกับสีเหลือง และพบ lt008 ( ตารางที่ 8 ) .
โต๊ะ 8 ลักษณะของสายพันธุ์
3.6 สรีรวิทยา และชีวเคมีของเชื้อ
ผลของลักษณะทางสรีรวิทยาและชีวเคมีพบว่าทุกไอโซเลทพบความสามารถในการย่อยแป้งและยูเรีย . ที่แยกได้จาก lt001 เพื่อ lt005 สามารถย่อยสลาย celatin ; lt001 และเพื่อ lt003 lt005 เพื่อ lt008 สามารถย่อยสลายเคซีน . การใช้ประโยชน์เชิงบวกของสารเคมีที่ถูกบันทึกไว้ใน lt001 lt003 lt005 , , , และ lt006 lt009 .ทดสอบแอคติโนมัยซีสพบความจุความต้านทานที่จะเติบโต 5 % ความเข้มข้นของโซเดียมคลอไรด์ อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของเชื้อมากที่สุดอยู่ระหว่าง 25-30 องศา C และ lt008 เกินถึง 40 ° C ( ตารางที่ 9 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Mr.Iguchi tsm ขอให้ทาง kybt เคลียร์รายละ
- คุณต้องชดเชยสินค้าให้ฉัน
- พกสะดวก
- Thick
- กิจกรรมวันนี้ ไปเดินเที่ยวตลาดดอกไม้ หาซ
- เช็คท่อซิงค์อ่างล้างจาน มีน้ำรั่ว
- ทำให้ท้อง
- Do you work or erai a
- วันนี้ฉันไม่สดใส
- กรุณาอย่าพูดถึงเรื่องเงิน เพราะฉันไม่สาม
- ต้องการทัวร์ one day trip HA LONG BAY. ร
- พบว่านักเรียนส่วนใหญ่มีความคิดเห็นว่าสาเ
- Three location holes for mechanical fixa
- ฉันใส่ให้ใหม่อีกครั้ง
- ฉันเคยมีประสบการ์ณอย่างนั้น ตอนนั้นฉันรู
- จาก:เป็น:ผลลัพธ์ (ภาษาอังกฤษ) 1:I sense
- ไม่รวมค่าขนส่ง
- watched
- resorting to underhanded tactic as Mein
- Start/Restart the Ctrack MaXx Services
- immediately hourly digest never
- สะพาน
- FT: MK Dons 4 United 0. Shock at Stadium
- For your information ka.India shipment –
