2.5. Reactive oxygen species produc

2.5. Reactive oxygen species production assay
2.5.1. Preparation of P. acnes culture supernatant
P. acnes was cultivated in BHI and glucose with and without plant extracts (100 μg/ml) for 72 h at 37 °C in
anaerobic conditions. The supernatant was harvested, filtered through a 0.22 μm-pore size filter and stored at −20 °C
until use.
2.5.2. Nitroblue tetrazolium dye (NBT) reduction test
The NBT test was performed according to the method of Park et al [12]. The test was aimed to determine ROS
activity. Briefly, the 500 μl of venous blood of healthy volunteers, 50 μl of stimulants and positive or negative controls
(Culture supernatant-P. acnes with and without extracts and zymosan and culture media) were added and the solutionswere incubated at 25 °C for 15 min. Then, 100-μl of NBT solution in 1 mg/ml of PBS was added to the above 100 μl
primed blood and incubated at 37 °C for 30 min and then again at 25 °C for 20 min. Finally, smears were prepared and
stained by Leishman stain (Sigma, St. Louis, MO, USA) for differential counting of formazan deposits in polymorphonuclear
leukocytes (PMNLs).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 ปฏิกิริยาออกซิเจนชนิดผลิตวิเคราะห์2.5.1 การเตรียมการของ supernatant สิว P. วัฒนธรรมสิว P. ถูกปลูกใน BHI และน้ำตาลกลูโคสที่มี และไม่ มีโรงงานแยก (100 μg/ml) สำหรับ h 72 ที่ 37 ° C ในสภาพไม่ใช้ออกซิเจน Supernatant ถูกเก็บเกี่ยว กรองผ่านตัวกรองขนาดรูขุมขน μm 0.22 และเก็บไว้ที่ −20 ° Cจนกว่าจะใช้2.5.2 ทดสอบลด Nitroblue tetrazolium ย้อม (เอ็นบีที)การทดสอบเอ็นบีทีที่ดำเนินการตามวิธีการของสวน et al [12] การทดสอบมีวัตถุประสงค์เพื่อกำหนด ROSกิจกรรมการ สั้น ๆ μl 500 เลือดดำของอาสาสมัครสุขภาพ μl 50 สารกระต้นและบวก หรือลบตัวควบคุมเพิ่ม (วัฒนธรรม supernatant P. สิวมี และไม่ มีสารสกัด และ zymosan และสื่อวัฒนธรรม) และ solutionswere ที่ incubated ที่ 25 ° C สำหรับ 15 นาที , 100-μl ของเอ็นบีทีใน 1 mg/ml ของ PBS ถูกเพิ่มเข้าไป μl 100 ข้างต้นงเยียเลือด และ incubated ที่ 37 ° C ใน 30 นาทีและอีกครั้งที่ 25 ° C สำหรับ 20 นาที ในที่สุด มีเตรียม smears และสีสำหรับส่วนที่แตกต่างการตรวจนับของ formazan ฝากใน polymorphonuclear โดยคราบ Leishman (ซิก St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา)leukocytes (PMNLs)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาการผลิตการทดสอบ
ดาวน์โหลด . การเตรียมหน้าสิว P . acnes น่าน
วัฒนธรรมถูกปลูกใน BHI และกลูโคสที่มีและไม่มีสารสกัดจากพืช ( 100 μ g / ml ) 72 ที่ 37 ° C H
เงื่อนไขแบบไม่ใช้ออกซิเจน และน่านเก็บเกี่ยว , กรองผ่านไส้กรอง และขนาด 0.22 μ m-pore อุณหภูมิ− 20 ° C

จนใช้งานวาง . nitroblue tetrazolium ย้อม ( NBT )
ทดสอบลดทาง NBT ได้ทดสอบตามวิธีการของปาร์ค et al [ 12 ] การทดสอบครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลตอบแทนกิจกรรม

สั้น ๆ , 500 μลิตรของเลือดจากหลอดเลือดดำของอาสาสมัครที่มีสุขภาพดี , 50 μ L ของสิ่งเร้าในทางบวกหรือทางลบ การควบคุม
( วัฒนธรรม supernatant-p. สิวที่มีและไม่มีสารสกัด และ zymosan และวัฒนธรรมสื่อ ) ถูกเพิ่มและบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C ต่างๆเป็นเวลา 15 นาที จากนั้น100 - μ L NBT สารละลาย 1 mg / ml ของ PBS ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในด้านบน 100 μ L
primed เลือดและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาทีและอีกครั้งที่ 25 ° C เป็นเวลา 20 นาที สุดท้าย ละเลงถูกเตรียมและเปื้อนคราบ
ลิชเมิ่น ( Sigma , เซนต์หลุยส์ , มิสซูรี , สหรัฐอเมริกา ) สำหรับค่าการนับของเงินฝากปฏิบัติการใน polymorphonuclear
เม็ดเลือดขาว ( pmnls )