All yeast specieswere evaluated for their ability to growunder stress
conditions that occur during the wet fermentation of coffee beans according
to the procedure described by Pereira et al. (2012). The isolates
were transferred fromYEPG plates to pre-culture 10 ml YEPG broth and
incubated at 30 °C for 24 h, 120 rpm. Subsequently, 1ml of the resulting
yeast cultures were transferred to 50-ml Erlenmeyer flasks containing
10 ml YEPG broth and grown for 3 h at 120 rpm (until early exponential
phase). At this point, cellswere harvested and diluted in sterilewater to
Abs600 of 0.2. Spots of 3 μL were placed onto stress plates, which were
incubated for at least 48 h at 30 °C.
The test medium used was composed of basal medium [0.05% yeast
extract (Sigma), 0.3% (w/v) vitamin-free Casamino Acids (Difco) and
2.5% agar (Difco)] and 5% glucose (Merck). The basal medium without
an added carbon source was used as a negative control. The heat stress
plates were incubated at 25, 30, 37 or 43 °C. Plates with different glucose
or fructose concentration were prepared by adjusting the sugar
concentration of the basal medium to 15, 30 or 50% (w/w) hexoseequivalent;
the sugar being added by sterile filtration. Ethanol, acetic
acid and lactic acid stress plates were composed of basal medium with
glucose supplemented with 6, 8 or 10% (v/w) ethanol (Sigma); 1, 2 or
3% (v/w) lactic acid (Sigma); 1, 2 or 3% (v/w) acetic acid (Sigma)
(added aseptically). Acidic stress plates were composed of basal medium
with glucose in the pH 2.0, 4.0, 6.0 or 8.0; pH adjustments were
made with sterile 1 M H2SO4 or 1 M NaOH.
ประเมินความสามารถในการความเครียด growunder specieswere ยีสต์ทั้งหมดเงื่อนไขที่เกิดขึ้นระหว่างการหมักเปียกเมล็ดกาแฟตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดยขาด et al. (2012) การแยกมีแผ่น fromYEPG โอนไปก่อนวัฒนธรรมซุป YEPG 10 ml และรับการกกที่ 30 ° C ใน 24 ชม., 120 รอบต่อนาที ต่อมา 1 มิลลิลิตรของผลถ่ายโอนวัฒนธรรมยีสต์เพื่อ 50 มล. Erlenmeyer ขวดที่ประกอบด้วยซุป YEPG 10 ml และปลูก 3 ชม.ที่ 120 รอบต่อนาที (จนถึงช่วงต้นเนนเฟส) ที่จุดนี้ cellswere การเก็บเกี่ยว และเจือจางใน sterilewater ไปAbs600 ที่ 0.2 จุดที่ 3 μL ถูกวางลงบนแผ่นความเครียด ซึ่งรับการกกอย่างน้อย 48 ชั่วโมงที่ 30 องศาเซลเซียสสื่อแบบทดสอบที่ใช้ประกอบด้วยฐานขนาดกลาง [0.05% ยีสต์สารสกัด (Sigma), 0.3% (w/v) ฟรีวิตามินกรด Casamino (Difco) และวุ้น 2.5% (Difco)] และกลูโคส 5% (Merck) กลางฐานโดยไม่ต้องใช้เป็นแหล่งคาร์บอนเพิ่มเป็นควบคุมลบ ความเครียดความร้อนแผ่นได้รับการกกที่ 25, 30, 37 หรือ 43 ° c แผ่น มีกลูโคสที่แตกต่างกันหรือความเข้มข้นของฟรักโทสวจัดทำขึ้น โดยปรับน้ำตาลความเข้มข้นของสื่อพื้นฐาน 15, 30 หรือ 50% (w/w) hexoseequivalentน้ำตาลที่ถูกเพิ่ม โดยการกรองปลอดเชื้อ เอทานอล อะซิติกกรดและกรดแลคติกความเครียดแผ่นประกอบด้วยฐานขนาดกลางด้วยกลูโคสที่เสริม ด้วย 6, 8 หรือ 10% (v/w) เอทานอล (Sigma); 1, 2 หรือ3% (v/w) กรดแลคติก (Sigma); 1, 2 หรือ 3% (v/w) กรดอะซิติก (Sigma)(เพิ่ม aseptically) ความเครียดกรดแผ่นประกอบด้วยฐานกลางมีกลูโคสใน pH 2.0, 4.0, 6.0 หรือ 8.0 ปรับค่า pH ได้ทำหมัน 1 M H2SO4 หรือ 1 M NaOH
การแปล กรุณารอสักครู่..

ยีสต์ทั้งหมด specieswere การประเมินความสามารถในการ growunder ความเครียด
เงื่อนไขที่เกิดขึ้นระหว่างการหมักเปียกของเมล็ดกาแฟตาม
ขั้นตอนที่อธิบายโดย Pereira, et al (2012) ไอโซเลท
ถูกย้ายแผ่น fromYEPG ล่วงหน้าวัฒนธรรม 10 มล. YEPG น้ำซุปและ
บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง, 120 รอบต่อนาที ต่อมา 1ml ของผล
วัฒนธรรมยีสต์ถูกโอนไปยังขวด Erlenmeyer 50 มล. มี
10 มล. YEPG น้ำซุปและเติบโตขึ้นเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 120 รอบต่อนาที (จนถึงช่วงต้นชี้แจง
เฟส) ณ จุดนี้ cellswere เก็บเกี่ยวและเจือจางใน sterilewater เพื่อ
Abs600 0.2 จุดที่ 3 ไมโครลิตรถูกวางลงบนแผ่นความเครียดซึ่งถูก
บ่มเป็นเวลาอย่างน้อย 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส.
ขนาดกลางที่ใช้ทดสอบประกอบด้วยฐานกลาง [ยีสต์ 0.05%
สารสกัด (ซิกม่า), 0.3% (w / v) วิตามิน ฟรีซามิกรด (Difco) และ
2.5% วุ้น (Difco)] และกลูโคส 5% (เมอร์ค) กลางฐานโดยไม่ต้อง
เป็นแหล่งคาร์บอนเพิ่มได้ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ ความเครียดความร้อน
แผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25, 30, 37 หรือ 43 องศาเซลเซียส แผ่นที่มีน้ำตาลกลูโคสที่แตกต่างกัน
หรือฟรุกโตสได้เตรียมความเข้มข้นโดยการปรับน้ำตาล
ความเข้มข้นของกลางฐานถึง 15, 30 หรือ 50% (w / w) hexoseequivalent;
น้ำตาลที่เพิ่มเข้ามาโดยการกรองผ่านการฆ่าเชื้อ เอทานอลอะซิติก
กรดและความเครียดกรดแลคติกแผ่นประกอบด้วยของกลางฐานกับ
กลูโคสเสริมด้วย 6, 8 หรือ 10% (v / w) เอทานอล (ซิกม่า); 1, 2 หรือ
3% (v / w) กรดแลคติก (ซิกม่า); 1, 2 หรือ 3% (v / w) กรดอะซิติก (ซิกม่า)
(เพิ่มปลอดเชื้อ) แผ่นความเครียดเป็นกรดประกอบด้วยฐานกลาง
มีกลูโคสในค่า pH 2.0, 4.0, 6.0 หรือ 8.0; การปรับค่า pH ที่ถูก
สร้างขึ้นมาด้วยการฆ่าเชื้อ 1 M H2SO4 หรือ 1 M NaOH
การแปล กรุณารอสักครู่..

ทั้งหมด ยีสต์มีการประเมินความสามารถของ growunder ความเครียดเงื่อนไขที่เกิดขึ้นระหว่างการหมักเปียกของเมล็ดกาแฟตามกับขั้นตอนการอธิบายโดย Pereira et al . ( 2012 ) แยกได้โอน fromyepg จานวัฒนธรรมก่อน 10 ml yepg ซุปและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 24 ชม. 120 รอบต่อนาที ต่อมา 1ml ของที่เกิดขึ้นเชื้อยีสต์ที่ถูกโอนไปยัง 50 ml ขวดที่มีเออร์เลนเมเยอร์ซุป yepg 10 ml และโต 3 H ที่ 120 รอบต่อนาที ( จนกว่าต้นเอกซ์โพเนนเชียลเฟส ) ณจุดนี้ระดับการเจือจางใน sterilewater เกี่ยวและabs600 ของ 0.2 จุดที่ 3 μผมถูกวางลงบนจาน ความเครียด ซึ่งเป็นบ่มเป็นเวลาอย่างน้อย 48 ชั่วโมง ที่ 30 องศาการทดสอบเครื่องมือที่ใช้ประกอบด้วย พื้นฐานปานกลาง [ 0.05 เปอร์เซ็นต์ ยีสต์สารสกัด ( Sigma ) 0.3% ( w / v ) วิตามินฟรี casamino กรด ( difco ) และ2.5 % ( difco ) ] และ 5% glucose ( Merck ) สูตรอาหารที่ไม่ที่เป็นแหล่งคาร์บอน ใช้เป็นชุดควบคุมลบ ความร้อนความเครียดแผ่นอุณหภูมิ 25 , 30 , 37 หรือ 43 องศา จานกับกลูโคสแตกต่างกันหรือฟรุคโตสความเข้มข้น เตรียมปรับน้ำตาลความเข้มข้นของตัวกลางแรกเริ่ม 15 , 30 หรือ 50 % ( w / w ) hexoseequivalent ;น้ำตาลที่ถูกเพิ่มโดยการกรองที่เป็นหมัน ผลิตเอทานอลกรดแลคติกแอซิดและความเครียด ได้แก่ อาหารที่มีจานแรกเริ่มกลูโคสระดับ 6 , 8 หรือ 10 เปอร์เซ็นต์ ( v / w ) เอทานอล ( Sigma ) ; 1 , 2 หรือ3 เปอร์เซ็นต์ ( v / w ) กรดแลกติก ( Sigma ) ; 1 , 2 หรือ 3 เปอร์เซ็นต์ ( v / w ) กรดน้ำส้ม ( Sigma )( เพิ่ม aseptically ) จานที่เป็นกรดได้แก่ basal medium ความเครียดกลูโคสใน pH 2.0 , 4.0 , 6.0 หรือปรับเป็น 8 , อทําหมัน 1 M กรดซัลฟิวริก หรือ 1 M NaOH
การแปล กรุณารอสักครู่..
