Fourier Transform Infrared Spectroscopy
The freeze-dried hydrolysates (approximately 1 mg) were
mixed with 100 mg dry potassium bromide (KBr) then transferred
to a hydraulic press to prepare small discs. The discs
were placed in the FT-IR spectrometer Perkin-Elmer®
(Spectrum GX). The FT-IR spectra (16 scans) were analyzed
in the transmittance mode between 400 and 4,000 cm−1 with a
4 cm−1 resolution. The spectra were analyzed using Spectrum
v.10 software. During spectral acquisition, the system was
purged with nitrogen. The FT-IR readings were obtained at
24±1 °C.
Nuclear Magnetic Resonance
1H NMR spectra were obtained using a Bruker Avance 400
nuclear magnetic spectrometer (Billerica, MA, USA) operating
at 400 MHz. For the experiments, approximately 1 mg of
freeze-dried hydrolysate (the protein concentration of each
hydrolysate was approximately 82 %) was dissolved in
0.5 ml of a 1 % (v/v) deuterated potassium hydroxide solution
(KOD 40 % in D2O) with deuterated water (D2O) in NMR
tubes. Dimethylsilapentane-5-sulfonic acid (DSS) was used as
a reference. The spectral window was 20 ppm, and the NMR
readings were obtained at 24±1 °C.
Morphology and Zeta Potential Measurements
Micrographs of both freeze-dried hydrolysates (FDH) were
generated to investigate the hydrolysate morphological characteristics.
After freeze drying and layering the samples with
13 mm carbon paper tape and 20 nm gold coating, the FDH
morphology was measured using SEM (JSM 5400LV scanning
electron microscope, Peabody, MA, USA) at an acceleration
voltage of 15 kV.
For the zeta potential measurements, aqueous colloidal
dispersions for each FDH were prepared as follows. First,
1 mg of FDH was dispersed in 100 mL triply distilled water
under ultrasound for 30 s.We added 1 mL of this dispersion to
50 mL triply distilled water. The dispersion was conditioned
for 30 min under magnetic agitation. The zeta potentials were
measured using a Zeta Meter 3.0+ unit (Zeta-Meter, Inc., New
York, NY, USA). This apparatus includes a microprocessor
that first measures the electrophoretic mobility of particles
dispersed in aqueous solutions and then automatically calculates
the zeta potential (in mV) using the Smoluchowski
equation, which is the most elementary expression for calculating
a zeta potential from electrophoretic mobility (U) measurements.
This equation can be written as follows: ζ ¼ 113
000 η
ε U , where η and ε represent the viscosity and permittivity
of the aqueous medium, respectively. The reported zeta
potentials are average values from at least 10 different measurements
of each hydrolysate.
แปลงฟูริเยร์สเปกอินฟราเรดไฮโดรไลเซแห้ง (ประมาณ 1 มิลลิกรัม) ได้รับการผสมกับ100 มิลลิกรัมโพแทสเซียมโบรไมด์แห้ง (KBr) จากนั้นก็ย้ายไปกดไฮโดรลิคเพื่อเตรียมความพร้อมแผ่นเล็กๆ แผ่นถูกวางไว้ในสเปกโตรมิเตอร์ FT-IR เพอร์กินElmer® (Spectrum GX) สเปกตรัม FT-IR (16 สแกน) ถูกนำมาวิเคราะห์ในโหมดการส่งผ่านระหว่าง400 และ 4,000 ซม-1 กับ4 ซม-1 ความละเอียด สเปกตรัมวิเคราะห์สเปกตรัมโดยใช้ซอฟแวร์ v.10 การเข้าซื้อกิจการในช่วงสเปกตรัมระบบที่ถูกกำจัดไนโตรเจน ฟุต-IR ได้รับการอ่านที่24 ± 1 ° C. นิวเคลียร์ด้วยคลื่นสนามแม่เหล็ก1H NMR สเปกตรัมที่ได้รับใช้ Bruker Avance 400 สเปกโตรมิเตอร์แม่เหล็กนิวเคลียร์ (บิลเลริกา, MA, USA) การดำเนินงานที่400 MHz สำหรับการทดลองประมาณ 1 มิลลิกรัมของไฮโดรไลแห้ง(ความเข้มข้นของโปรตีนของแต่ละไฮโดรไลประมาณ 82%) ถูกละลายใน 0.5 มิลลิลิตร 1% (v / v) deuterated แก้ปัญหาไฮดรอกไซโพแทสเซียม(KOD 40% ใน D2O) ด้วย น้ำ deuterated (D2O) ใน NMR หลอด Dimethylsilapentane-5-กรดซัลโฟ (DSS) ถูกนำมาใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง หน้าต่างสเปกตรัม 20 ppm และ NMR อ่านที่ได้รับ ณ วันที่ 24 ± 1 ° C. สัณฐานวิทยาและซีตาศักยภาพวัดmicrographs ของทั้งสองไฮโดรไลเซแห้ง (FDH) ถูกสร้างขึ้นเพื่อศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาไฮโดรไล. หลังจากที่หยุดการอบแห้งและ layering ตัวอย่างกับ13 มิลลิเมตรคาร์บอนเทปกระดาษและ 20 นาโนเมตรเคลือบทอง FDH สัณฐานถูกวัดโดยใช้ SEM (JSM 5400LV สแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนพีบอดี, MA, USA) ที่เร่งแรงดันไฟฟ้า15 กิโลโวลต์. สำหรับการวัดศักยภาพซีตา, คอลลอยด์น้ำกระจายสำหรับแต่ละ FDH ได้จัดทำดังต่อไปนี้ ครั้งแรก1 มิลลิกรัม FDH ได้รับการกระจายตัวใน 100 มิลลิลิตรน้ำกลั่น triply ภายใต้การอัลตราซาวนด์ 30 s.We เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของการกระจายนี้50 มลน้ำกลั่น triply การกระจายตัวที่ได้รับการปรับอากาศเป็นเวลา 30 นาทีภายใต้การกวนแม่เหล็ก ศักยภาพซีตาถูกวัดโดยใช้ซีตา Meter 3.0 + หน่วย (Zeta-Meter, Inc, New York, NY, USA) อุปกรณ์นี้มีไมโครโปรเซสเซอร์แรกที่วัดความคล่องตัว electrophoretic ของอนุภาคที่กระจายตัวในสารละลายแล้วโดยอัตโนมัติคำนวณศักยภาพซีตา(ใน mV) โดยใช้ Smoluchowski สมซึ่งเป็นแสดงออกประถมศึกษามากที่สุดสำหรับการคำนวณที่มีศักยภาพซีตาจากการเคลื่อนไหวของอิเลค (U) . วัดสมการนี้สามารถเขียนได้ดังนี้ζ¼ 113 000 ηε U ที่ηεและเป็นตัวแทนของความหนืดและ permittivity ของสื่อที่เป็นน้ำตามลำดับ รายงานซีตาศักยภาพเป็นค่าเฉลี่ยอย่างน้อย 10 วัดที่แตกต่างกันของแต่ละไฮโดรไล
การแปล กรุณารอสักครู่..
