2.5 Amplification of XYL2 geneThe C

2.5 Amplification of XYL2 gene
The C. shehatae XYL2 gene was amplified from the genomic DNA by PCR amplification. Oligonucleotide primers (forward: 5’GGGGAATTCATGACTGCTAACCCTTCG3’ and reverse: 5’GGATCCCTATTCAGGGCCATCAAT 3’) were derived from the published sequence of the C. shehatae XLY2 gene (Genbank accession no. FJ040172.1). The EcoRI restriction site was added to the 5’ end of the gene and the BamHI restriction site was added to the 3’ end of the gene. The DNA was amplified in 50-ml reaction mixtures. Each reaction contained 100 ng of template DNA, 0.3 mM of each primer, 1 × AccuPrime™ Pfx Reaction mix (including dNTP) supplemented with 0-5 mM MgSO4 and 0-1 M KCl, and 2.5 U AccuPrimeTM Pfx DNA polymerase. Thirty cycles of denaturation, annealing and polymerization were carried out for 15
sec at 95 °C, 43 °C and 68 °C, respectively. The PCR products were excised from the gel and purified with the QIAquick Gel Extraction Kit (Qiagen) according to the manufacturer’s instruction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 ขยายของยีน XYL2ยีน XYL2 C. shehatae ถูกขยายจาก genomic DNA โดยขยาย PCR ไพรเมอร์ oligonucleotide (ไปข้างหน้า: 5' GGGGAATTCATGACTGCTAACCCTTCG3' และกลับ: GGATCCCTATTCAGGGCCATCAAT 3' 5') ซึ่งลำดับของยีน C. shehatae XLY2 (Genbank ทะเบียนไม่มีการเผยแพร่ FJ040172.1) เข้ามากับปลาย 5' ของยีนไซต์จำกัด EcoRI และเพิ่มไซต์จำกัด BamHI กับปลาย 3' ของยีน ดีเอ็นเอถูกขยายในน้ำยาผสมปฏิกิริยา 50 ml แต่ละปฏิกิริยาประกอบด้วย 100 ng ของดีเอ็นเอต้นแบบ 0.3 มม.แต่ละพื้น ผสมปฏิกิริยา AccuPrime ™ Pfx × 1 (รวม dNTP) เสริม ด้วย 0-5 มม. MgSO4 และ 0-1 M KCl และ 2.5 Pfx U AccuPrimeTM ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส รอบสามสิบ denaturation การอบเหนียว และ polymerization ได้ดำเนินการ 15วินาทีที่ 95 ° C, 43 ° C และ 68 ° C ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ excised จากเจ และบริสุทธิ์ ด้วยการ QIAquick เจแยกชุด (Qiagen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 เพิ่มปริมาณยีน xyl2
c . shehatae xyl2 ยีนที่ถูกขยายจาก genomic DNA โดยวิธี PCR แบบ . ซึ่งไพรเมอร์ ( ไปข้างหน้าและย้อนกลับ : 5'ggatccctattcagggccatcaat : 5'ggggaattcatgactgctaacccttcg3 ' 3 ' ) ได้มาจากการตีพิมพ์ลำดับของยีน C shehatae xly2 ( ขนาดหนังสือไม่ fj040172.1 )เว็บไซต์ข้อ จำกัด ด้วยถูกเพิ่มเข้าไป 5 ' สุดท้ายของยีนและเว็บไซต์ข้อ จำกัด คือ BamHI เพิ่มปลาย 3 ' ของยีน ดีเอ็นเอในปฏิกิริยาอัตรา 50 มิลลิลิตร ผสม แต่ละปฏิกิริยาที่มีอยู่ 100 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ 0.3 มม. ของแต่ละ ไพรเมอร์ 1 × accuprime ™ pfx ปฏิกิริยาผสม ( รวม dntp ) เสริมด้วย 0-5 มม. MgSO4 ใ 0-1 M และ KCl 2.5 U accuprimetm pfx DNA polymerase .30 รอบ ( annealing แบบและทดลอง 15
วินาทีที่ 95 องศา C 43 องศา C และ 68 ° C ตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกเอาออกจากเจลและบริสุทธิ์กับ qiaquick เจลสกัดชุด ( เพิ่ม ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต