To evaluate proliferation of steroi

To evaluate proliferation of steroidogenic luteal cells, paraffin-embedded
tissues were stained for 3@-hydroxysteroid dehydrogenase
(3/3HSD) and BrdU using a streptavidin-biotin/streptavidin-alkaline
phosphatase double staining system (Histostain-DS, Zymed, San Francisco,
CA). Briefly, rehydrated sections were treated with 2 N HCl for 30
min and then rinsed in tap water, followed by two changes of PBS
containing 0.3% Triton X-100. Endogenous peroxidase activity was
quenched by incubating the sections in 3% hydrogen peroxide in absolute
methanol for 10 min. The sections were treated with the first
blocking buffer [Zymed; 10% (vol/vol) normal goat serum in PBS] for
10 min. Tissue sections were incubated for 90 min at 22 C with rabbit
anti-J@HSD polyclonal antibody [Oxygene, Dallas, TX; 1:lOO dilution in
PBS and Triton X-100 with l-2% (vol/vol) goat serum]. Control sections
were incubated with normal rabbit serum (Vector) in place of the primary
antibody. Sections were rinsed twice in PBS and incubated with biotinylated
secondary antibody (Zymed; goat antirabbit IgG) for 10 min.
After rinsing twice in PBS, sections were incubated with streptavidinperoxidase
conjugate (Zymed) for 10 min, then rinsed twice in PBS. The
color reaction was developed by incubating sections for 15 min in a
chromogen-substrate mixture for peroxidase (Zymed; hydrogen peroxidase/amino-ethyl
carbozole), which produces a reddish brown deposit.
Sections were washed twice in distilled water and incubated in double
staining enhancer (Zymed) for 30 min. During the second round of
staining, the same tissue sections were rinsed with distilled water and
incubated with the second blocking buffer [Zymed; 10% (vol/vol) normal

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การประเมินการแพร่กระจายของเซลล์ steroidogenic นใน พาราฟินที่ฝังตัวภาพเนื้อเยื่อสำหรับ 3@-hydroxysteroid พร่อง(3/3HSD) และโดย streptavidin-ไบโอติ น/streptavidin-BrdUฟอสฟาสองระบบ (Histostain DS, Zymed ซานฟรานซิสโก ย้อมสีCA) สั้น ๆ ส่วน rehydrated ได้รับการรักษา ด้วย 2 N HCl 30นาทีแล้ว ล้างในน้ำ ตาม ด้วยการเปลี่ยนแปลงที่สองของ PBSประกอบด้วย 0.3% Triton X-100 เป็นกิจกรรมภายนอกฮอสดับ โดย incubating ส่วนในไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3% ในสัมบูรณ์เมทานอล 10 นาที ส่วนได้รับการรักษากับครั้งแรกบล็อกบัฟเฟอร์ [Zymed; serum 10% (vol/vol) แพะปกติใน PBS] สำหรับส่วนเนื้อเยื่อ 10 นาทีได้รับการกก 90 นาทีที่ 22 C กับกระต่ายanti-J@HSD โพลีแอนติแอนติบอดี [Oxygene, Dallas, TX; 1:lOO เจือจางในPBS และ Triton X-100 กับเซรั่มแพะ l-2_% (vol/vol)] ส่วนควบคุมได้รับการกกกับเซรั่มกระต่ายปกติ (เวกเตอร์) แทนหลักแอนติบอดี ส่วนล้างสองครั้งใน PBS และรับการ biotinylated กกรองแอนติบอดี (Zymed; antirabbit แพะ IgG) 10 นาทีหลังจากล้างสองครั้งใน PBS ส่วนที่ได้รับการกกกับ streptavidinperoxidaseสังยุค (Zymed) 10 นาที จากนั้น ล้างสองครั้งใน PBS การปฏิกิริยาสีพัฒนา โดย incubating ส่วน 15 นาทีในการchromogen-พื้นผิวส่วนผสมฮอส (Zymed ไฮโดรเจนฮอส/อะมิโนเอทิลcarbozole), ซึ่งผลิตเงินฝากน้ำตาลแดงล้างในน้ำกลั่น และรับการกกในสองส่วนย้อมสีเพิ่ม (Zymed) 30 นาที ในระหว่างรอบสองของการย้อมสี ส่วนเนื้อเยื่อเดียวถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่น และรับการบัฟเฟอร์บล็อกสอง [Zymed; 10% (vol/vol) ปกติกก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อประเมินการแพร่กระจายของเซลล์ luteal steroidogenic พาราฟินฝัง
เนื้อเยื่อมีการย้อมสำหรับ 3 @ dehydrogenase -hydroxysteroid
(3 / 3HSD) และ BrdU ใช้สเต-ไบโอติน / สเตอัลคาไลน์
ฟอสฟาระบบการย้อมสีคู่ (Histostain-DS, Zymed, ซานฟรานซิส
CA) สั้น ๆ ส่วนคืนรูปได้รับการรักษามี 2 N HCl 30
นาทีแล้วล้างในน้ำประปาตามด้วยสองการเปลี่ยนแปลงของพีบีเอส
ที่มี 0.3% Triton X-100 กิจกรรม peroxidase ภายนอกถูก
ดับโดยฟักส่วนในไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3% ในแน่นอน
เมทานอลเป็นเวลา 10 นาที ส่วนที่ได้รับการรักษากับครั้งแรก
บัฟเฟอร์ปิดกั้น [Zymed; 10% (ปริมาตร / ปริมาตร) ซีรั่มแพะปกติในพีบีเอส] สำหรับ
10 นาที ส่วนเนื้อเยื่อถูกบ่มเป็นเวลา 90 นาทีที่ 22 C กับกระต่าย
ป้องกัน J @ HSD โพลีแอนติบอดี [Oxygene, ดัลลัสเท็กซัส 1: เจือจาง Loo ใน
พีบีเอสและ Triton X-100 L-2% (ปริมาตร / ปริมาตร) ซีรั่มแพะ] ส่วนการควบคุมการ
บ่มด้วยเซรั่มกระต่ายปกติ (เวกเตอร์) ในสถานที่ของหลัก
แอนติบอดี ส่วนที่ได้รับการล้างครั้งที่สองในพีบีเอสและบ่มกับ biotinylated
รองแอนติบอดี (Zymed; แพะ antirabbit IgG). เป็นเวลา 10 นาที
หลังจากการล้างครั้งที่สองในพีบีเอสส่วนที่ถูกบ่มกับ streptavidinperoxidase
ผัน (Zymed) เป็นเวลา 10 นาทีล้างแล้วสองครั้งในพีบีเอส
ปฏิกิริยาสีได้รับการพัฒนาโดยส่วนบ่มนาน 15 นาทีใน
ส่วนผสม chromogen สารตั้งต้นสำหรับ peroxidase (Zymed; ไฮโดรเจนเปอร์ออก / อะมิโนเอทิล
carbozole.) ซึ่งเป็นผู้ผลิตเงินฝากสีน้ำตาลแดง
ส่วนถูกล้างครั้งที่สองในน้ำกลั่นและบ่มในคู่
ย้อมสี เพิ่ม (Zymed) เป็นเวลา 30 นาที ในช่วงรอบที่สองของ
การย้อมสีส่วนเนื้อเยื่อเดียวกันถูกล้างด้วยน้ำกลั่นและ
บ่มกับบัฟเฟอร์การปิดกั้นที่สอง [Zymed; 10% (ปริมาตร / ปริมาตร) ปกติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อประเมินการแพร่กระจายของ steroidogenic ลูเทียวเซลล์ , พาราฟินฝังตัวเนื้อเยื่อถูกย้อม 3 @ - hydroxysteroid ดีไฮโดรจีเนส( 3 / 3hsd ) และ brdu ใช้ streptavidin ไบโอติน / streptavidin ด่างการเปลี่ยนแปลงสองระบบ ( histostain DS , zymed , ซานฟรานซิสโกแคลิฟอร์เนีย ) สั้นได้ทำการ รีไฮเดรทม ส่วนการเก็บรักษา 2 N HCl 30นาที แล้วล้างด้วยน้ำ ตามด้วยสองการเปลี่ยนแปลงของช่องประกอบด้วย 0.3% Triton X-100 . กิจกรรมทั้งภายใน คือดับ โดยการแช่ในหัวข้อ 3% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในสัมบูรณ์เมทานอลเป็นเวลา 10 นาที ส่วนที่ได้รับการรักษาด้วยครั้งแรกบล็อกบัฟเฟอร์ [ zymed ; 10 เปอร์เซ็นต์ ( ปริมาตร / ปริมาตร ) ปกติแพะซีรั่มใน PBS ] สำหรับ10 นาทีเนื้อเยื่อบางส่วนถูกบ่มเป็นเวลา 90 นาทีที่ 22 องศาเซลเซียส กระต่ายanti-j @ HSD ) [ ใช้ออกซิเจน , ดัลลัส , เท็กซัส ; 1 : ห้องน้ำเจือจางในพีบีเอส และ Triton X-100 กับ L-2 % ( ปริมาตร / ปริมาตร ) เซรั่มเนื้อแพะ ส่วนการควบคุมถูกบ่มกับซีรั่มกระต่ายปกติ ( เวกเตอร์ ) ในสถานที่ของหลักแอนติบอดี บางส่วนถูกล้างสองครั้งใน PBS บ่มกับไลระดับแอนติบอดี ( zymed ; แพะ antirabbit IgG ) นาน 10 นาทีหลังจากล้างสองครั้งในส่วนที่ถูกแยก streptavidinperoxidase พีบีเอสสังยุค ( zymed ) เป็นเวลา 10 นาที แล้วล้างสองครั้งใน PBS ที่ปฏิกิริยาการเกิดสีถูกพัฒนาขึ้นโดยการแช่ส่วน 15 นาทีในโครโมเจนพื้นผิวผสมเปอร์ออกซิเดส ( zymed ; ไฮโดรเจนเปอร์ / อะมิโนเอทิลcarbozole ) ซึ่งผลิตสีน้ําตาลแดง มาฝากบางส่วนถูกล้างสองครั้งในน้ำกลั่นและบ่มในคู่การเพิ่ม ( zymed ) เป็นเวลา 30 นาที ในระหว่างรอบที่สองของการย้อมสีส่วนเนื้อเยื่อเดียวกันถูกล้างด้วยน้ำกลั่น และโดยมี 2 บล็อกบัฟเฟอร์ [ zymed ; 10 เปอร์เซ็นต์ ( ปริมาตร / ปริมาตร ) ปกติ