2.3. Adenosine A1 receptor bioassay

2.3. Adenosine A1 receptor bioassay
The assay was performed as previously described (Chang et al.,
2004) except that the volume of the total mixture in the assay was
200 μL. The radioactive ligand used for the assay was 0.4 nM [3H]
DCPCX (8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine) (Kd¼1.6 nM). Membranes
were prepared from Chinese hamster ovary (CHO) cells
stably expressing human adenosine receptors by a method previously
described (Dalpiaz et al., 1998). Non-specific binding was
determined by using 10 μM CPA (N6-cyclopentyladenosine).
The mixture consisting of 50 μL [3H] DPCPX, 50 μL CPA/50 mM
Tris–HCl buffer/test compounds in different concentrations,
50 μL 50 mM Tris–HCl buffer pH 7.4, and 50 μL of membrane
was incubated at 25 1C for 60 min and then filtered over a GF/B
Whatman filter under reduced pressure. The filters were washed
three times with 2 mL ice-cold 50 mM Tris/HCl buffer, pH 7.4, and
3.5 mL scintillation liquid was added to each filter. The radioactivity
of the washed filters was counted by a Hewlett-Packard
Tri–Carb 1500 liquid scintillation detector. Non-specific binding
was determined in the presence of 10–5 M CPA

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. อะดี A1 ตัวรับ bioassayทำการวิเคราะห์อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น (ช้าง et al.,2004) ยกเว้นว่า ปริมาณของส่วนผสมทั้งหมดในการทดสอบคือ200 ΜL ลิแกนด์กัมมันตรังสีที่ใช้ในการวิเคราะห์ได้ 0.4 nM [3H]DCPCX (8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine) (Kd¼1.6 nM) เยื่อหุ้มเตรียมได้จากเซลล์รังไข่ (ช่อ) หนูแฮมสเตอร์จีนstably แสดง receptors อะดีมนุษย์ โดยวิธีการก่อนหน้านี้อธิบาย (Dalpiaz et al., 1998) รวมไม่ใช่เฉพาะกำหนดโดย CPA μM 10 (N6-cyclopentyladenosine)ส่วนผสมประกอบด้วย [3H] DPCPX, 50 μL 50 μL CPA/50 มม.สารบัฟเฟอร์/ทดสอบทริสเรทติ้ง – HCl ความเข้มข้นแตกต่างกัน50 μL 50 มม.ตรี – HCl บัฟเฟอร์ pH 7.4 และ μL 50 ของเมมเบรนincubated ที่ 1C 25 สำหรับ 60 นาที และจากนั้น กรองผ่าน GF/Bกรอง Whatman ภายใต้ความดันที่ลดลง ตัวกรองถูกล้างครั้งที่สามกับบัฟเฟอร์ 2 mL 50 มม.ฉ่ำ ตรี/HCl ค่า pH 7.4 และมีเพิ่มของเหลว scintillation 3.5 mL ตัวกรองแต่ละ Radioactivity ที่กรองหินถูกตรวจนับ โดย Hewlett-PackardTri – คาร์โบไฮเดรต 1500 scintillation เหลวจับ รวมไม่ใช่เฉพาะกำหนดในต่อหน้าของ CPA M 10-5

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 Adenosine ชีวภาพรับ A1
ทดสอบได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ช้าง et al.,
2004) นอกจากนั้นปริมาณของส่วนผสมทั้งหมดในการทดสอบคือ
200 ไมโครลิตร แกนด์กัมมันตรังสีที่ใช้ในการทดสอบคือ 0.4 นาโนเมตร [3H]
DCPCX (8 Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine) (Kd¼1.6นาโนเมตร) เมมเบรน
ที่เตรียมจากรังไข่หนูแฮมสเตอร์จีน (CHO) เซลล์
เสถียรแสดงตัวรับ adenosine มนุษย์ด้วยวิธีการก่อนหน้านี้
อธิบาย (Dalpiaz et al., 1998) ผูกพันที่ไม่เฉพาะเจาะจงที่ถูก
กำหนดโดยใช้ CPA 10 ไมครอน (N6-cyclopentyladenosine).
ส่วนผสมประกอบด้วย 50 ไมโครลิตร [3H] DPCPX 50 ไมโครลิตร CPA / 50 มิลลิ
บัฟเฟอร์ Tris-HCl / สารทดสอบในระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกัน,
50 ไมโครลิตร 50 มิลลิเมตร Tris -HCl บัฟเฟอร์ค่า pH 7.4 และ 50 ไมโครลิตรของเมมเบรน
ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 25 1C 60 นาทีและกรองแล้วกว่า GF / B
Whatman กรองภายใต้ความกดดันที่ลดลง ฟิลเตอร์ถูกล้าง
สามครั้งมี 2 มิลลิลิตรเย็น 50 มิลลิเมตร Tris / HCl บัฟเฟอร์ค่า pH 7.4 และ
3.5 ของเหลวประกายมิลลิลิตรถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวกรอง กัมมันตภาพรังสี
ของตัวกรองล้างนับจาก Hewlett-Packard
Tri-Carb 1500 ของเหลวเครื่องตรวจจับแสงระยิบระยับ ผูกพันที่ไม่เฉพาะเจาะจง
ที่ถูกกำหนดในการปรากฏตัวของ 10-5 M สอบบัญชีรับอนุญาต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 อะดีโนซีน A1 receptor ปลงผม
( ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ชาง et al . ,
2004 ) ยกเว้นปริมาณของส่วนผสมทั้งหมดในการทดสอบคือ
200 μลิตร ) ใช้กัมมันตรังสี ( คือ 0.4 นาโนเมตร [ 3H ]
dcpcx ( 8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine ) ( KD ¼ 1.6 nm ) เยื่อ
เตรียมจากจีนหนูแฮมสเตอร์รังไข่ ( โช ) เซลล์
เสถียรแสดงตัวรับแอดิโนซีนของมนุษย์โดยวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
( dalpiaz et al . , 1998 ) ไม่เฉพาะเจาะจงผูกคือ
กำหนดโดยใช้ CPA μ 10 M ( n6 cyclopentyladenosine ) .
ส่วนผสมประกอบด้วย 50 μ L [ 3 ] dpcpx 50 μ L CPA / 50 mm
ทริส– HCl บัฟเฟอร์ / ทดสอบสารในความเข้มข้นที่แตกต่างกัน
50 μ L 50 มม. โดย– HCl buffer pH 7.4 และ 50 μ l
เมมเบรนคืออุณหภูมิ 25 c นาน 60 นาที แล้วกรองผ่าน GF / b
whatman กรองภายใต้การลดความดัน ตัวกรองก็ล้าง
3 ครั้งกับ 2 ml เย็น 50 มม. โดย / HCl บัฟเฟอร์ pH 7.4 และ
3.5 ml แสงของเหลวเพิ่มตัวกรองแต่ละ กัมมันตภาพรังสี
ของล้างกรองถูกนับโดย Hewlett Packard
ไตร– carb 1500 เหลวแสงรังสี ไม่เฉพาะ
ผูกตั้งใจในการปรากฏตัวของ CPA 10 – 5 ม.