Chlorophyllase activity was determi

Chlorophyllase activity was determined according to the method described by Hornero-Méndez and Mínguez-Mosquera (2002) and Amir-Shapira et al. (1987) with minor modification. The reaction mixture containing 0.1 μM Chl a acetone solution, 100 mM Tris–HCl buffer (pH 8.5) and enzyme solution in a ratio of 1:5:5 was prepared. The mixture was incubated in a water bath at 50 °C for 1 h, and the reaction was terminated by the addition of 4 mL cold acetone. The remaining (non-degraded) Chls were extracted with 4 mL of hexane. The mixture was vigorously stirred until emulsion formation, and then centrifuged at 10,000 × g for 5 min at 4 °C. Chlorophyllase activity was assayed by measuring the absorbance at 667 nm of the lower acetone phase. The amounts of chlorophyllide (Chlide) generated were determined using extinction coefficients of 7.49 × 10−2 M−1 cm−1 and the enzyme activity was represented as mmol Chlide min−1 g−1 FW.

Mg-dechelatase activity was assayed by a modified procedure according to Vicentini et al. (1995). The reaction mixture comprised 2790 μL of 50 mM Tris–HCl buffer (pH 9.0, containing 0.1% (v/v) Triton X-100), 10 μL of Chlin a, and 200 μL of crude enzyme extract in a total volume of 3 mL. The mixture was incubated at 25 °C for 30 min. The increase of 0.001 in absorbance at 687 nm in 30 min was defined as one unit (U) of enzyme activity. Activity was expressed as U min−1 g−1 FW.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Chlorophyllase กิจกรรมที่ถูกกำหนดตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Hornero Méndez และ Mínguez-Mosquera (2002) และอาเมียร์ Shapira et al. (1987) มีปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 0.1 Μm Chl โซลูชันอะซิโตน 100 mM ทริสเรทติ้ง – HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.5) และโซลูชั่นเอนไซม์ในอัตราส่วน 1:5:5 จัดทำ ส่วนผสมมี incubated ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 50 ° C สำหรับ 1 h และปฏิกิริยาถูกยกเลิก โดยการเพิ่มขึ้นของอะซีโตนเย็น 4 mL Chls (ไม่เสื่อมโทรม) เหลือที่สกัด ด้วยเฮกเซน 4 มิลลิลิตร ส่วนผสมกวนแรง ๆ จนก่ออิมัลชัน แล้ว จากที่ 10,000 × g 5 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส กิจกรรม Chlorophyllase ถูก assayed โดยการวัดค่าที่ 667 nm ของอะซีโตนเฟสต่ำ กำหนดจำนวนของ chlorophyllide (Chlide) สร้างขึ้นโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียของ 7.49 × 10−2 M−1 cm−1 และเอนไซม์ที่ถูกแสดงเป็นโมล Chlide min−1 g−1 FWกิจกรรม Mg dechelatase ถูก assayed โดยกระบวนการแก้ไขตาม Vicentini et al. (1995) ประกอบด้วยส่วนผสมของปฏิกิริยา 2790 μL 50 มม.ทริสเรทติ้ง – HCl บัฟเฟอร์ (pH 9.0 ที่มี 0.1% (v/v) Triton X-100), 10 μL ของ Chlin และ μL 200 ของเอนไซม์ดิบแยกเป็นปริมาณรวมของ 3 mL ส่วนผสม incubated ที่ 25 ° C นาน 30 นาที เพิ่มขึ้น 0.001 ในค่าที่ 687 nm ใน 30 นาทีถูกกำหนดเป็นหนึ่งหน่วย (U) ของเอนไซม์ กิจกรรมถูกแสดงเป็น U min−1 g−1 FW

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม chlorophyllase ถูกกำหนดตามวิธีการอธิบายโดย Hornero เม็นเดสและMínguez-Mosquera (2002) และอาเมียร์-Shapira et al, (1987) กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ผสมปฏิกิริยาที่มี 0.1 ไมครอน Chl วิธีการแก้ปัญหาอะซีโตน 100 มิลลิเมตร Tris-HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.5) และการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ในอัตราส่วน 1: 5: 5 ถูกจัดทำขึ้น ส่วนผสมที่ถูกบ่มในอ่างน้ำที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดยนอกเหนือจาก 4 มลอะซีโตนเย็น ส่วนที่เหลืออีก (ไม่มีการลดคุณภาพ) CHLs ถูกสกัดด้วย 4 มลเฮกเซน ส่วนผสมที่ถูกกวนอย่างจริงจังจนก่ออิมัลชันและจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 ° C กิจกรรม chlorophyllase ได้รับการวิเคราะห์โดยการวัดการดูดกลืนแสงที่ 667 นาโนเมตรของเฟสอะซิโตนที่ต่ำกว่า ปริมาณ chlorophyllide (Chlide) สร้างขึ้นได้รับการพิจารณาโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของ 7.49 × 10-2 M-1 ซม-1 และกิจกรรมของเอนไซม์ที่ถูกแสดงเป็น Chlide มิลลิโมนาที 1 กรัม-1 FW.

กิจกรรม Mg-dechelatase ได้รับการวิเคราะห์โดย การปรับเปลี่ยนขั้นตอนตาม Vicentini et al, (1995) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 2790 ไมโครลิตร 50 มิลลิ Tris-HCl บัฟเฟอร์ (pH 9.0 ที่มี 0.1% (v / v) Triton X-100), 10 ไมโครลิตรของ Chlin และ 200 ไมโครลิตรของสารสกัดจากเอนไซม์ในปริมาณรวมของ 3 มล ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที เพิ่มขึ้น 0.001 ในการดูดกลืนแสงที่ 687 นาโนเมตรใน 30 นาทีได้รับการกำหนดให้เป็นหนึ่งหน่วย (U) ของเอนไซม์ กิจกรรมได้รับการแสดงเป็น U Min-1 G-1 FW

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมคลอโรฟิลเลสถูกกำหนดตามวิธีการที่อธิบายโดย ndez é hornero-m และเอ็ม โดมิงเกซ mosquera ( 2002 ) และ มีร์ shapira et al . ( 1987 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ปฏิกิริยาผสมที่ประกอบด้วยμ 0.1 M CHL สารละลายอะซิโตน , 100 มม. นอกจากนี้ – HCl บัฟเฟอร์ pH 8.5 ) และสารละลายเอนไซม์ ในอัตราส่วน 1:5:5 ที่เตรียมไว้ ส่วนผสมจะถูกเลี้ยงในอ่างน้ำที่ 50 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยนอกเหนือจาก 4 ml เย็นสารอะซิโตน ที่เหลือ ( ไม่เสื่อม ) chls ถูกสกัดด้วยเฮกเซน 4 ml . ส่วนผสมอย่างกวนจนเกิดอิมัลชัน และระดับที่ 10 × G สำหรับ 5 นาทีที่ 4 องศา คลอโรฟิลเลสกิจกรรมซีรั่มโดยวัดการดูดกลืนแสงที่ 667 nm ของล่าง ) เฟส ปริมาณคลอโรฟิลไลด์ ( chlide ) สร้างขึ้นถูกกำหนดโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของ 7.49 × 10 − 2 m − 1 cm − 1 และกิจกรรมเอนไซม์แสดงเป็นมิลลิโมล chlide มิน− 1 G − 1 FWกิจกรรม dechelatase มก. ซีรั่มโดยดัดแปลงขั้นตอนตาม vicentini et al . ( 1995 ) ปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 2790 μลิตร 50 mm สำหรับบัฟเฟอร์ pH 9.0 และกรดไฮโดรคลอริกที่มี 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Triton X-100 ) , 10 μ chlin ลิตร และ 200 μ L ของเอนไซม์สกัดในปริมาณรวม 3 มิลลิลิตร ผสมส่วนผสมที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 30 นาทีการเพิ่มขึ้นของค่าการดูดกลืนแสง 0.001 ในที่คุณ nm ใน 30 นาทีถูกกำหนดเป็นหนึ่งหน่วย ( U ) ของกิจกรรมของเอนไซม์ กิจกรรม แสดงเป็น ยู มิน − 1 G − 1 FW