Digoxigenin (DIG)-labeled RNA probe

Digoxigenin (DIG)-labeled RNA probes used for in situ hybridization were synthesized by in vitro transcription with a DIG RNA labeling kit (Roche Diagnostics) using a 244-bp fragment (position 528–771 bp) of the crab Dmrt cDNA subcloned into pGEM-T Easy vectors (Promega) as a template. The transcriptions were performed from 1 mg of linearized plasmid using either T7 (antisense) or SP6 (sense) RNA polymerases. In situ hybridization was performed essentially as described previously (Qiu et al. 2008). Paraformaldehyde-fixed ovary samples were routinely embedded in paraffin, sectioned (5 μm), de-paraffinized, and then rehydrated. Gonad tissue sections were hybridized with DIGlabeled sense or antisense RNA probes, and hybridization signals were detected with alkaline phosphatase-conjugated anti-DIG antibody using a DIG Nucleic Acid Detection Kit
(Roche Diagnostics).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Digoxigenin (ขุด) -รบ RNA มีป้ายชื่อที่ใช้สำหรับใน situ hybridization ถูกสังเคราะห์ โดยการถอดรหัสกับอาร์เอ็นเอที่ขุดติดฉลากชุด (โรชวินิจฉัย) ใช้ส่วน 244-bp (bp ตำแหน่ง 528 – 771) ของ cDNA Dmrt ปูที่ subcloned ลงในเวกเตอร์ง่าย pGEM T (Promega) เป็นแม่แบบในหลอดทดลอง กันการดำเนินการจาก 1 mg ของ plasmid เส้นตรงแล้วใช้ใด T7 (antisense) หรือ SP6 (ความรู้สึก) อาร์เอ็นเอ polymerases ทำ in situ hybridization เป็นหลักตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (คู et al. 2008) ตัวอย่างรังไข่คง paraformaldehyde ประจำฝังในพาราฟิน จัดแบ่งเป็นส่วน ๆ (5 ไมครอน), de-paraffinized และ rehydrated แล้ว เนื้อเยื่อ gonad ส่วนถูกไฮบริด ด้วย DIGlabeled sense หรือ antisense RNA หัว และ hybridization สัญญาณพบกับอัลคาไลน์ฟอสฟาผันขุดต่อต้านแอนติบอดีโดยใช้ชุดการตรวจกรดนิวคลีอิกขุด(การวินิจฉัยโรช)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

digoxigenin (DIG) -labeled probes อาร์เอ็นเอที่ใช้สำหรับในแหล่งกำเนิดพันธุ์ถูกสังเคราะห์โดยถอดความในหลอดทดลองกับชุดติดฉลาก DIG อาร์เอ็นเอ (Roche Diagnostics) โดยใช้ชิ้นส่วน 244-BP (ตำแหน่ง 528-771 พี) ของปู Dmrt cDNA subcloned เข้า pGEM เวกเตอร์ -T ง่าย (Promega) เป็นแม่แบบ ทานได้ดำเนินการตั้งแต่วันที่ 1 มก. ของพลาสมิดเชิงเส้นโดยใช้ T7 (แอนตี้) หรือ SP6 (ความรู้สึก) polymerases RNA ในการผสมพันธุ์แหล่งกำเนิดได้ดำเนินการเป็นหลักตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Qiu et al. 2008) paraformaldehyde คงตัวอย่างรังไข่ถูกฝังอยู่ประจำในพาราฟินตัด (5 ไมครอน), de-paraffinized แล้วคืนรูป ส่วนเนื้อเยื่ออวัยวะสืบพันธุ์ถูกไฮบริดด้วยความรู้สึก DIGlabeled หรือแอนตี้ RNA โพรบและสัญญาณการผสมพันธุ์พบกับอัลคาไลน์ฟอสฟา-ผันป้องกัน DIG แอนติบอดีใช้ DIG นิวคลีอิกกรดตรวจหา Kit
(Roche Diagnostics)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

368 ( ขุด ) - ป้าย RNA probes สำหรับใช้ในชนิดที่สังเคราะห์โดยการถอดความด้วยขุด RNA ชุดฉลาก ( โรชวินิจฉัย ) โดยใช้ 244 ส่วน BP ( 528 ) ตำแหน่งแต่ BP ) ของ cDNA ของปูเป็นวัตถุดิบในผลิตภัณฑ์อาหารว่าง pgem-t เวกเตอร์ที่ง่าย ( promega ) เป็นแม่แบบ ใช้กันได้จาก 1 มิลลิกรัม ในช่วงการใช้ * * 3 ( antisense RNA ) หรือ sp6 ( ความรู้สึก ) polymerases . ใน situ hybridization แสดงหลักตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Qiu et al . 2008 ) พาราฟอร์มาลดิไฮด์คงที่ตัวอย่างตรวจในรังไข่ฝังตัวพาราฟิน , ตัด ( 5 μ M ) , เดอ paraffinized จากนั้นได้ทำการ รีไฮเดรทม . ต่อมบ่งเพศเป็นเนื้อเยื่อส่วนที่มี diglabeled antisense RNA probes หรือความรู้สึก และตรวจพบสัญญาณไฮบริด้วยอัลคาไลน์ ฟอสฟาเตสและแอนติบอดีต่อต้านการขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดขุดชุดตรวจกรดนิวคลีอิก( โรชวินิจฉัย )