Chemicals L(1)-Ascorbic acid, thiob

Chemicals L(1)-Ascorbic acid, thiobarbituric acid(TBA), sodium dodecyl sulfate (SDS), cytochrome C, allopurinol, trolox, hypoxanthine, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), diethylenetriamine pentaacetic acid (DETAPAC) and xanthine were purchased from Sigma Chemical Co. (U.S.A.). Anhydrous iron(II) chloride was purchased from Wako Pure Chemical Ind., Ltd. (Japan). KH2PO4 was purchased from Ferak Chemical Co. (Germany). 5,5-Dimethyl1-pyrroline N-oxide (DMPO) and xanthine oxidase were purchased from Labotec Co., Ltd. (Tokyo, Japan) and Boehringer Mannheim, respectively. Test Animals Male Wistar Albion rats, 4—6 weeks old, were purchased from the National Laboratory Animal Breeding and Research Center of the National Science Council of Taiwan. They were housed in an air-conditional room with the environment maintained at 2263°C in temperature, 5565% in humidity, and a 12h dark–light cycle. The rats were fed with a standard laboratory diet and were allowed access to tap water ad libitum. Preparation of Liver Homogenate Liver homogenate was prepared according to the method of Masaol et al.16) with minor modification. Rats weighing between 180 to 230g were sacrificed. The liver was quickly removed and cut into pieces. The liver sample was then homogenized in 150mM Tris–HCl (pH 7.2) with a disperser (Ultra-Turrax T25, IKA-Labortechnik) at 205003g for 3min to give a 20% (w/v) liver homogenate. The liver homogenate was fur
ther centrifuged at 5003g for another 10min. The supernatant of liver homogenate was collected, and the amount of protein was determined using a DCTM Protein Assay kit (BioRad) according to the protocols recommended by the manufacturer. Anti-lipid Peroxidation Assay The anti-lipid peroxidation activity of extracts and pure compounds from T. chebula was evaluated according to the previously described procedures.17,18) Briefly, a reaction mixture contained 250 m l of rat liver homogenate (50mg of protein), 100 m l of Tris–HCl buffer (pH 7.2), 50 m l of 0.1mM ascorbic acid, 50 m l of 4mM FeCl2, and then 50 m l of tested extract was mixed in a capped tube and incubated at 37°C for 1h. After incubation, 500 m l of 0.1N HCl, 200 m l of 9.8% SDS, 900 m l de-ionized water and 2ml of 0.6% TBA was successively added. The mixture was vigorously shaken before it was placed into a boiling water bath (95°C) for 30min. After cooling, 5ml n-BuOH was added. The mixture was then centrifuged at 10003g at a temperature of 25°C for 25min to remove flocculent precipitate. The lipid peroxide concentration was determined by MDA-TBA adduct (completion of malondialdehyde with thiobarbituric acid) at 532nm using a Hitachi U-2000 spectrophotometer. The concentration of the extracts and pure compounds of T. chebula that inhibited the production of 50% lipid peroxide (IC50) was calculated as previously described.19) Anti-superoxide Formation Assay The anti-superoxide formation activity of T. chebula was evaluated by spectrophotometric measurement of the formation of uric acid from the xanthine/xanthine oxidase system.20,21) The samples were first dissolved with DMSO, then diluted to the desired concentration with 50mM of KH2PO4 (pH57.8) solution. 50 m l of the sample solution, 400 m l of 0.1mM xanthine in 50mM of KH2PO4 (pH57.8) solution, and 530 m l of de-ionized H2O were added into the tube. The mixture was vigorously shaken. 20 m l of 1 unit xanthine oxidase solution in 1ml of de-ionized H2O was then added. After vigorous mixing, the solution was screened for 2min at 295nm. The IC50 of each sample was calculated from the regression line. Free Radical Scavenging Activity Assay Free radical scavenging activity was assayed spectrophotometrically by the cytochrome C reduction method as described by McCord and Fridovich22) and Yu et al.23) When xanthine oxidase converts xanthine to uric acid, the superoxide anion produced would reduce ferricytochrome C to ferrocytochrome C. Since ferrocytochrome C shows a maximum absorption at 550nm, the amount of superoxide anion can be evaluated indirectly by spectrophotometric measurement of ferrocytochrome C. Therefore, the superoxide anion scavenging activity of T. chebula can be evaluated using the cytochrome C reduction method. Samples were dissolved in DMSO and diluted to desired concentrations with 50mM of KH2PO4 (pH57.8) solution. Fifty microliters of sample solution, 400 m l of working solution (prepared by mixing 20ml of 0.1mM xanthine, 1ml of 0.1mM cytochrome C, 1ml of 0.1mM EDTA and 1ml of 50mM KH2PO4 together), 530 m l of de-ionized H2O and 20 m l of 1 unit xanthine oxidase solution (1 unit of xanthine oxidase in 1ml of de-ionized H2O) were mixed vigorously and then screened for 70s at 550nm. The IC50 of each sample was calculated from the regression line.19)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สารเคมี L (1) -วิตามิน thiobarbituric acid(TBA) โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS), เจาะจง C, allopurinol, trolox, hypoxanthine กรด ethylenediaminetetraacetic (EDTA), กรด pentaacetic diethylenetriamine (DETAPAC) และ xanthine ถูกซื้อจาก Sigma เคมีจำกัด (อเมริกา) Iron(II) รัสคลอไรด์ซื้อจาก ind.เคมีบริสุทธิ์วาโกะ จำกัด (ประเทศญี่ปุ่น) KH2PO4 ซื้อจาก บริษัทเคมี Ferak (เยอรมนี) 5, 5-Dimethyl1-pyrroline N-ออกไซด์ (DMPO) และ xanthine oxidase ถูกซื้อจาก Labotec Co., Ltd. (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) และมานไฮม์ Boehringer ตามลำดับ ทดสอบสัตว์ชาย Wistar ทยาหนู 4-6 สัปดาห์ ซื้อพันธุ์สัตว์ห้องปฏิบัติการแห่งชาติและศูนย์วิจัยของคณะวิทยาศาสตร์ชาติของไต้หวัน พวกเขาได้อยู่ในห้องแอร์กับสภาพแวดล้อมที่ 2263 ° C อุณหภูมิ 5565% ความชื้น และวงจรมืด – แสง 12 ชม หนูถูกเลี้ยง ด้วยอาหารที่มีห้องปฏิบัติการมาตรฐาน และได้รับอนุญาตเข้าถึงประปา ad libitum เตรียมตับตับ Homogenate homogenate จัดเตรียมตามวิธีของ Masaol et al.16) กับ modification รอง ชั่งน้ำหนักระหว่าง 180 ถึง 230 กรัมหนูได้ sacrificed ตับออกได้อย่างรวดเร็ว และตัดเป็นชิ้น ตัวอย่างตับถูกแล้ว homogenized 150 มม.ทริ – HCl (ค่า pH 7.2) พร้อมเป็นฝอย (Ultra Turrax T25 สควิด Labortechnik) ที่จี 205003 3 นาทีเพื่อให้ homogenate 20% (w/v) ตับ Homogenate ตับถูกขนเธอเหวี่ยงที่ 5003g 10 นาที รวบรวม supernatant ของตับ homogenate และกำหนดปริมาณโปรตีนโดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน DCTM (BioRad) ตามโพรโทคอที่แนะนำ โดยผู้ผลิต ไขมันป้องกัน Peroxidation ทดสอบกิจกรรมไขมันป้องกัน peroxidation ของสารสกัดและสารบริสุทธิ์จาก T. chebula รับการประเมินตาม procedures.17,18 ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้) Briefly ผสมปฏิกิริยาอยู่ l 250 เมตรของตับหนู homogenate (50 มิลลิกรัมโปรตีน) l 100 เมตรของทริสเรทติ้ง – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.2), 50 m l ของกรดแอสคอร์บิค 0.1mM, l 50 เมตร 4 มม. FeCl2 แล้ว l 50 เมตรการทดสอบสารสกัดผสมในหลอด capped และได้รับการกกที่ 37° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากบ่ม 500 m l 0.1N HCl, l 200 เมตร 9.8% SDS, 900 m l น้ำไม่แตกตัวเป็นไอออน และ 0.6% TBA อย่างต่อเนื่องเพิ่ม 2ml ส่วนผสมถูกจังเขย่าก่อนวางในน้ำน้ำเดือด (95° C) สำหรับ 30 นาที หลังจากเย็น 5 มล. n BuOH ถูกเพิ่ม ส่วนผสมถูกแล้วเหวี่ยงที่ 10003 กรัมที่อุณหภูมิ 25° C เป็นเวลา 25 นาทีเพื่อเอาตะกอน flocculent กำหนดไขมันเปอร์ออกไซด์ความเข้มข้น โดยเตอร์ MDA TBA adduct (จบ malondialdehyde thiobarbituric กรด) ที่ 532nm โดยใช้ spectrophotometer ฮิตาชิ U-2000 ความเข้มข้นของสารสกัดและสารบริสุทธิ์ของ T. chebula ที่ยับยั้งการผลิตของเปอร์ออกไซด์ไขมัน 50% (IC50) คำนวณเป็นก่อนหน้านี้ described.19) ซูเปอร์ออกไซด์ป้องกันก่อตัวทดสอบประกอบ ด้วยการก่อตัวของกรดยูริกจาก system.20,21 oxidase xanthine/xanthine spectrophotometric วัดกิจกรรมซูเปอร์ออกไซด์ป้องกันการก่อตัวของ T. chebula) ตัวอย่างได้เลยละลายกับ DMSO แล้วเจือจางให้ความเข้มข้นที่ต้องการกับ 50 มม.ของ KH2PO4 โซลูชัน (pH57.8) 50 m l ของตัวอย่าง 400 m l ของ xanthine 0.1 มม. 50 มม.ของ KH2PO4 (pH57.8) และการแก้ไขปัญหา 530 ม l ของ H2O ไอออนไม่มีเพิ่มลงในหลอด อย่างจริงจังถูกเขย่าส่วนผสม จากนั้นมีเพิ่ม 20 m l 1 หน่วย xanthine oxidase โซลูชันใน 1 มิลลิลิตรของ H2O ไม่แตกตัวเป็นไอออน หลังจากผสมแข็งแรง การแก้ปัญหาถูกตรวจสำหรับ 2 นาทีที่ 295nm IC50 ของแต่ละอย่างได้คำนวณจากเส้นถดถอย กิจกรรม scavenging รุนแรง scavenging กิจกรรมทดสอบฟรีถูก assayed spectrophotometrically โดยวิธีเจาะจง C ลดตามที่อธิบายไว้ โดยนวัติและ Fridovich22) และ Yu et al.23) เมื่อ xanthine oxidase แปลง xanthine กรดยูริก ไอออนซูเปอร์ออกไซด์ที่ผลิตจะลด ferricytochrome C ferrocytochrome c ตั้งแต่ ferrocytochrome C แสดงการดูดซึมสูงสุดที่ 550nm จำนวนซูเปอร์ออกไซด์ไอออนสามารถประเมินทางอ้อม โดยวัด spectrophotometric ของ ferrocytochrome c ดังนั้น ไอออนซูเปอร์ออกไซด์ที่ scavenging กิจกรรมของ T. chebula สามารถถูกประเมินโดยใช้วิธีเจาะจง C ลด ตัวอย่างละลายใน DMSO และเจือจางให้ความเข้มข้นที่ต้องการกับ 50 มม.ของ KH2PO4 โซลูชัน (pH57.8) Microliters 50 ของตัวอย่าง 400 m l ทำงานแก้ปัญหา (เตรียมผสม 20ml ของ xanthine 0.1mM, 0.1mM เจาะจง C, 1 มิลลิลิตร EDTA 0.1 มม. และ 50 มม. KH2PO4 1 มิลลิลิตร 1 มิลลิลิตรรวม), 530 ม l ไม่แตกตัวเป็นไอออน H2O และผสมอย่างจริงจังแล้ว ฉายสำหรับ 70 ที่ 550nm 20 m l 1 หน่วย xanthine oxidase โซลูชัน (xanthine oxidase ใน 1 มิลลิลิตรของไอออนลบ H2O 1 หน่วย) คำนวณ IC50 ของตัวอย่างแต่ละ line.19 ถดถอย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารเคมี L (1) กรด -Ascorbic กรด thiobarbituric (TBA) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) cytochrome C, allopurinol, Trolox, hypoxanthine กรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) diethylenetriamine กรด pentaacetic (DETAPAC) และ xanthine ที่ซื้อมาจากซิกเคมี จำกัด (USA) เหล็กไฮดรัส (II) คลอไรด์ที่ซื้อมาจาก Wako เพียวเคมี Ind. จำกัด (ญี่ปุ่น) KH2PO4 ซื้อจาก Ferak เคมิคอล จำกัด (เยอรมนี) 5,5-Dimethyl1-pyrroline N-ออกไซด์ (DMPO) และ xanthine oxidase ที่ซื้อมาจาก Labotec จำกัด (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และ Boehringer Mannheim ตามลำดับ สัตว์ทดลองชายวิสตาร์อัลเบียนหนู 4-6 สัปดาห์เก่าที่ซื้อมาจากพันธุ์ห้องปฏิบัติการแห่งชาติสัตว์และศูนย์วิจัยของสภาวิทยาศาสตร์แห่งชาติของไต้หวัน พวกเขาถูกตั้งอยู่ในห้องพักมีเงื่อนไขกับสภาพแวดล้อมเก็บรักษาไว้ที่ 2263 องศาเซลเซียสอุณหภูมิ 5565% ในที่มีความชื้นและ 12h วงจรเข้มแสง หนูที่ถูกเลี้ยงด้วยอาหารที่มีห้องปฏิบัติการที่ได้มาตรฐานและได้รับอนุญาตให้เข้าถึงประปาโฆษณา libitum น้ำ การเตรียมการของตับตับ homogenate homogenate ถูกจัดทำขึ้นตามวิธีการของ Masaol et al.16) ที่มี Modi เล็กน้อย Fi ไอออนบวก หนูชั่งน้ำหนักระหว่าง 180 ถึง 230 กรัมเป็น Fi sacri ced ตับจะถูกลบออกได้อย่างรวดเร็วและหั่นเป็นชิ้น ตัวอย่างตับทำให้เป็นเนื้อเดียวกันแล้วใน 150mm Tris-HCl (pH 7.2) ด้วยการกระจาย (อัลตร้า Turrax T25, IKA-Labortechnik) ที่ 205003g สำหรับ 3min ที่จะให้ส่วนลด 20% (w / v) homogenate ตับ homogenate ตับถูกขน
Ther หมุนเหวี่ยงที่ 5003g สำหรับ 10min อื่น ใสของ homogenate ตับถูกเก็บรวบรวมและปริมาณของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน DCTM (BioRad) ตามโปรโตคอลแนะนำโดยผู้ผลิต ป้องกัน lipid peroxidation Assay กิจกรรม peroxidation ป้องกันไขมันของสารสกัดและสารบริสุทธิ์จาก T. chebula ถูกประเมินตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า procedures.17,18) ชั้น Brie Y ซึ่งมีส่วนผสมที่มีปฏิกิริยา 250 มิลลิลิตร homogenate ตับหนู (50mg ของโปรตีน) 100 มิลลิลิตร Tris-HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.2) 50 มล. ของวิตามินซี 0.1mm 50 มิลลิลิตร 4mm FeCl2 แล้ว 50 มล. ของสารสกัดจากการทดสอบได้รับการผสมในหลอดปกคลุมและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1H หลังจากการบ่ม 500 มิลลิลิตร 0.1N HCl 200 มล. 9.8% SDS 900 มล. น้ำบริสุทธิ์และ 2ml 0.6% TBA ถูกเพิ่มเข้ามาอย่างต่อเนื่อง ส่วนผสมที่ถูกเขย่าแรง ๆ ก่อนที่จะถูกวางลงในอ่างน้ำเดือด (95 ° C) สำหรับ 30 นาที หลังจากเย็น 5ml N-BuOH ถูกเพิ่มเข้ามา ส่วนผสมที่ถูกปั่นแล้ว 10003g ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 25 นาทีในการลบชั้น occulent ตะกอน ความเข้มข้นของไขมันเปอร์ออกไซด์ถูกกำหนดโดย MDA-TBA ดึงเข้าหากัน (เสร็จสิ้นการ Malondialdehyde กับกรด thiobarbituric) ที่ 532nm ใช้ spectrophotometer Hitachi U-2000 ความเข้มข้นของสารสกัดและสารบริสุทธิ์ของ T. chebula ที่ยับยั้งการผลิตไขมันเปอร์ออกไซด์ 50% (IC50) ที่ถูกคำนวณเป็น described.19 ก่อนหน้านี้) การก่อตัวต่อต้าน superoxide Assay กิจกรรมป้องกันการก่อตัวของ superoxide ตัน chebula ถูกประเมินโดย วัดสเปกของการก่อตัวของกรดยูริคจาก xanthine / xanthine oxidase system.20,21) ในกลุ่มตัวอย่างแรกละลายกับ DMSO เจือจางแล้วกับความเข้มข้นที่ต้องการด้วย 50mm ของ KH2PO4 (pH57.8 วิธีการแก้ปัญหา) 50 มล. ของการแก้ปัญหาตัวอย่าง 400 มิลลิลิตร 0.1mm xanthine ใน 50mm ของ KH2PO4 (pH57.8) วิธีการแก้ปัญหาและ 530 มล. ของไอออน H2O ถูกเพิ่มลงในหลอด ส่วนผสมที่ถูกเขย่าแรง ๆ 20 มล. 1 หน่วยการแก้ปัญหา xanthine oxidase ใน 1ml ของไอออน H2O ถูกบันทึกแล้ว หลังจากที่แข็งแรงผสม, การแก้ปัญหาคือการคัดเลือกสำหรับ 2min ที่ 295nm ค่า IC50 ของแต่ละตัวอย่างที่คำนวณได้จากเส้นถดถอย อนุมูลอิสระขับกิจกรรม Assay ฤทธิ์จับอนุมูลอิสระได้รับการวิเคราะห์โดย spectrophotometrically cytochrome วิธีลด C ตามที่อธิบาย McCord และ Fridovich22) และยูเอ al.23) เมื่อ xanthine oxidase แปลง xanthine กรดยูริค, แอนไอออน superoxide ที่ผลิตจะลด ferricytochrome C ถึง ferrocytochrome ซีตั้งแต่ ferrocytochrome C แสดงให้เห็นถึงการดูดซึมสูงสุดที่ 550nm ปริมาณของไอออน superoxide สามารถได้รับการประเมินโดยอ้อมโดยการวัดสเปกของ ferrocytochrome ซีดังนั้น superoxide ไอออนกิจกรรมไล่ที chebula สามารถประเมินได้โดยใช้วิธีการลด cytochrome ซี ตัวอย่างที่ถูกละลายใน DMSO และเจือจางความเข้มข้นที่ต้องการด้วย 50mm ของ KH2PO4 (pH57.8) วิธีการแก้ปัญหา ห้าสิบไมโครลิตรของการแก้ปัญหาตัวอย่าง 400 มล. ของการแก้ปัญหาการทำงาน (จัดทำขึ้นโดยการผสม 20ml ของ 0.1mm xanthine, 1ml ของ 0.1mm cytochrome C, 1ml ของ 0.1mm EDTA และ 1ml 50 มม KH2PO4 ร่วมกัน) 530 มล. ของ H2O de-แตกตัวเป็นไอออนและ 20 มล. 1 หน่วยการแก้ปัญหา xanthine oxidase (1 หน่วย oxidase xanthine ใน 1ml ของไอออน H2O) ถูกผสมอย่างจริงจังแล้วคัดกรอง 70s ที่ 550nm ค่า IC50 ของแต่ละตัวอย่างที่คำนวณได้จาก line.19 ถดถอย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารเคมี l ( 1 ) - กรดแอสคอร์บิค เท่ากับ acid ( TBA ) , โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) , ไซโตโครม ซี นอลสารไฮโปแซนทีน , , acid ( EDTA ) , บอนออกสนาม ( detapac ) และแซนทีน ซื้อมาจาก Sigma Chemical Co . ( USA ) เหล็ก ( II ) รัสคลอไรด์ถูกซื้อจาก Wako บริสุทธิ์เคมี Ind . , Ltd . ( ญี่ปุ่น ) kh2po4 ซื้อมาจาก ferak Chemical Co . ( เยอรมนี ) 5,5-dimethyl1-pyrroline n-oxide ( dmpo ) ของเอนไซม์ที่ถูกซื้อจาก labotec Co . , Ltd . ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) และ Boehringer Mannheim , ตามลำดับ สัตว์ทดลองเพศผู้ , หนู , 4-6 สัปดาห์ ซื้อมาจากศูนย์วิจัยและบำรุงพันธุ์สัตว์ของห้องปฏิบัติการแห่งชาติสภาวิทยาศาสตร์แห่งชาติของไต้หวัน พวกเขาถูกตั้งอยู่ในเครื่องปรับอากาศห้องที่มีสภาพแวดล้อมที่ 2263 ° C ในการรักษาอุณหภูมิ 5565 % ความชื้น และ 12 มืดและแสงรอบ หนูถูกเลี้ยงด้วยอาหารทดลองมาตรฐานและได้รับอนุญาตการเข้าถึงโฆษณาแตะสูตรน้ำ การเตรียมการของตับตับเตรียมแยกแยกตามวิธีการของ masaol et al . 16 ) กับผู้เยาว์ Modi จึงไอออนบวก หนูหนักระหว่าง 180 กับ 230g ซาคริจึงเป็น CED . ตับจะถูกลบออกได้อย่างรวดเร็ว และตัดเป็นชิ้น ตับบดตัวอย่างแล้วใน 150mm ทริส– HCl ( pH 7.2 ) ด้วยการกระจาย ( Ultra turrax t25 , อิกะ labortechnik ) ที่ 205003g สำหรับ 3min ให้ 20 % ( w / v ) ตับอน . ตับมีปริมาณขนส่วนระดับที่ 5003g สำหรับวันอื่น นำตับแยกเก็บข้อมูล และปริมาณของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้ dctm โปรตีน 3 ชุด ( biorad ) ตามระบบแนะนำโดยผู้ผลิต วิธีป้องกันไขมัน peroxidation lipid peroxidation ป้องกันกิจกรรมของสารสกัดบริสุทธิ์และสารประกอบจาก chebula ประเมินตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . 17,18 ) บรีfl Y , ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 250 M L ของตับหนู ( 50 ปริมาณของโปรตีน ) , 100 M L ของทริส– HCl บัฟเฟอร์ pH 7.2 ) 50 เมตร ลิตร - วิตามินซี , 50 M L ของ 4mm fecl2 แล้ว 50 M L ทดสอบสารสกัดผสมในฝาครอบท่อและบ่มที่ 37 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากบ่ม , 500 m l 0.1n HCl , 200 M L 9.8 % SDS , 900 M L de ionized น้ำและ 2ml 0.6 % เปลี่ยนแปลงเพิ่มอย่างต่อเนื่อง ส่วนผสมจะถูกแรงเขย่าก่อนที่จะถูกวางลงในอ่างน้ำเดือด ( 95 องศา C ) เป็นเวลา 30 นาที หลังจากเย็น 5ml นอร์มัล - บิวทานอลเป็นเพิ่ม ส่วนผสมก็ 10003g ไฟฟ้าที่อุณหภูมิ 25 ° C 25min ลบfl occulent ตะกอน ไขมันเปอร์ออกไซด์ความเข้มข้นถูกกำหนดโดย mda-tba ปุ่มตัวเลือก ( ความสมบูรณ์ของมาลอนไดอัลดีไฮด์กับเท่ากับ acid ) ที่บริษัท ฮิตาชิ u-2000 532nm โดยใช้วัสดุ ความเข้มข้นของสารสกัดบริสุทธิ์และสารประกอบของ chebula ที่ยับยั้งการผลิตลิปิดเปอร์ออกไซด์ 50% ( ic50 ) คำนวณได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . 19 ) การต่อต่อต้านการต่อต้านซุปเปอร์ออกไซด์ กิจกรรมของ chebula ประเมินโดยการวัดการสร้างกรดยูริกจากแซนทีน / ระบบไบ 20,21 ) ของเอนไซม์ . กลุ่มตัวอย่าง จึงตัดสินใจเดินทางไปละลายกับ DMSO แล้วเจือจางในความเข้มข้นที่ต้องการกับ 50mm ของ kh2po4 ( ph57.8 ) โซลูชั่น 50 M L ของโซลูชันตัวอย่าง 400 M l - แซนทีนใน 50mm ของ kh2po4 ( ph57.8 ) โซลูชั่นและมี M L ของ De ionized H2O ที่ถูกเพิ่มลงในหลอด . ส่วนผสมจะถูกแรงสั่นสะเทือน 20 M L 1 หน่วยของเอนไซม์โซลูชั่นใน 1ml De ionized H2O ก็เพิ่ม หลังจากที่แข็งแรงผสมสารละลายจาก 2min ที่ 295nm . การ ic50 ของแต่ละตัวอย่างที่คำนวณได้จากสมการเส้น กำจัดอนุมูลอิสระวิธีกำจัดอนุมูลอิสระซีรั่มนี้โดยมั่มวิธีลดตามที่อธิบายไว้โดย McCord fridovich22 ) และยู et al . 23 ) เมื่อของเอนไซม์แปลงแซนทีนให้กรดยูริก , Superoxide anion ผลิตจะลด ferricytochrome C C C ferrocytochrome ตั้งแต่ ferrocytochrome แสดงการดูดซึมสูงสุดที่ 550nm , เงินของ Superoxide anion สามารถประเมินทางอ้อมโดยการวัด ferrocytochrome C ดังนั้น ) , Superoxide anion การกิจกรรมของ chebula สามารถประเมินโดยใช้มั่มวิธีลด . ตัวอย่างที่ถูกละลายใน DMSO เพื่อลดปริมาณที่ต้องการและกับ 50mm ของ kh2po4 ( ph57.8 ) โซลูชั่น 50 ตัวเลขของโซลูชันตัวอย่าง 400 M L ทำงานแก้ปัญหา ( ที่เตรียมโดยการผสมของหลอดของ 0.1 , 0.1 1ml ของไซโตโครม ซี 1ml ของ 0.1mm EDTA 1ml 50 มม. และ kh2po4 ด้วยกัน ) 530 m l de บริสุทธิ์ H2O และ 20 M L ของสารละลายเอนไซม์แซนทีน 1 หน่วย ( 1 หน่วยของเอนไซม์ใน 1ml ของ De ionized H2O ) ผสมอย่างแข็งขันแล้วจาก 70 ใน 550nm . การ ic50 ของแต่ละตัวอย่างที่คำนวณได้จากสมการบรรทัดที่ 19 )