2.6. a-Glucosidase inhibitory assay

2.6. a-Glucosidase inhibitory assay
This assay was carried out to investigate the in vitro inhibitory activity of EESS on sucrase and maltase (aglucosidases). Although a-glucosidase isolated from yeast is extensively used as a screening material for a-glucosidase inhibitors, the results did not always agree with those obtained in mammals. Therefore, we used a small intestine homogenate of a mouse as a-glucosidase solution because we speculated that it would better reflect the in vivo state.The inhibitory effect was measured by slightly modifying the method used by “Dahlqvist” [24]. After 20 hours of fasting, part of the animals’ small intestine immediately below the duodenum and immediately above the cecum was cut, rinsed with ice-cold saline, and homogenized with 12 mL of maleate buffer (100 mM, pH 6). The homogenate was used as a-glucosidase solution. The assay mixture consisted of 100 mM maleate buffer (pH 6), 2% (w/v) of each sugar substrate solution (100 ml), and the sample
extract (20e640 mg/mL). The mixture was preincubated for 5 minutes at 37_C, and the reaction was initiated by adding crude a-glucosidase solution (50 ml), followed by incubating the mixture again for 10 minutes at 37_C. The amount of glucose released in this reaction was determined by a commercially available glucose estimation kit (Span Diagnostic Ltd., Mumbai, India). The rate of carbohydrate decomposition was calculated as a percentage ratio to the amount of glucose obtained when the carbohydrate was completely digested. The rate of prevention was calculated by the following formula: Inhibition rate (%)Z[{(amount of glucose produced by the
positive control) e (amount of glucose produced by the addition of EESS) e (glucose production value in blank)/ (amount of glucose produced by the positive control)}]_100.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การทดสอบลิปกลอสไขได้ Glucosidaseวิเคราะห์นี้ถูกดำเนินการตรวจสอบในลิปกลอสไขกิจกรรมของ EESS sucrase และ maltase (aglucosidases) แม้ว่าแยกต่างหากจากยีสต์เป็น glucosidase อย่างกว้างขวางใช้เป็นวัสดุคัดกรองสำหรับ inhibitors ที่ glucosidase ผลลัพธ์ได้ไม่เสมอกันกับผู้รับในการเลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้น เราใช้ homogenate ลำไส้เล็กของเมาส์เป็นโซลูชันที่ glucosidase เนื่องจากเราคาดว่า มันจะดีขึ้นถึงสถานะในสัตว์ทดลอง ลิปกลอสไขผลถูกวัด โดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยวิธีการใช้ "Dahlqvist" [24] หลังจากชั่วโมง 20 ศีล ส่วนหนึ่งของสัตว์ลำไส้เล็กด้าน ล่าง duodenum และทันที เหนือ cecum มีตัด rinsed ด้วยน้ำเกลือฉ่ำ แล้ว homogenized เป็นกลุ่ม มี 12 mL maleate บัฟเฟอร์ (100 มม. pH 6) Homogenate ถูกใช้เป็นโซลูชันที่ glucosidase วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 100 มม. maleate บัฟเฟอร์ (pH 6), 2% (w/v) แก้ปัญหาแต่ละพื้นผิวน้ำตาล (100 มล.), และตัวอย่างแยก (20e640 mg/mL) ส่วนผสมคือ preincubated 5 นาทีที่ 37_C และเริ่มปฏิกิริยา โดยการเพิ่มน้ำมันได้-glucosidase โซลูชัน (50 มล.), ตาม ด้วย incubating ส่วนผสมอีก 10 นาทีที่ 37_C จำนวนกลูโคสออกในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนด โดยชุดประเมินในเชิงพาณิชย์มีกลูโคส (จำกัดการวินิจฉัยระยะ มุมไบ อินเดีย) อัตราการแยกส่วนประกอบของคาร์โบไฮเดรตถูกคำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์อัตราส่วนจำนวนกลูโคสที่ได้รับเมื่อคาร์โบไฮเดรตถูกย่อยอย่างสมบูรณ์ อัตราป้องกันถูกคำนวณ โดยใช้สูตรต่อไปนี้: อัตราการยับยั้ง (%) Z [{ (จำนวนกลูโคสผลิตโดยการอี positive control) (ยอดของกลูโคสที่ผลิต โดยการเพิ่ม EESS) อี (กลูโคสผลิตค่าปล่อย) / (จำนวนกลูโคสผลิต โดยควบคุมบวก) }] _100

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 -glucosidase ทดสอบการยับยั้ง
การทดสอบนี้ได้รับการดำเนินการในการตรวจสอบในหลอดทดลองยับยั้งของ EESS ใน sucrase และ maltase (aglucosidases) แม้ว่า-glucosidase ที่แยกได้จากยีสต์ใช้อย่างกว้างขวางเป็นวัสดุสำหรับการตรวจคัดกรองสารยับยั้ง-glucosidase ผลไม่เคยเห็นด้วยกับผู้ที่ได้รับในการเลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้นเราจึงใช้ homogenate ลำไส้เล็กเมาส์เป็นวิธีแก้ปัญหา-glucosidase เพราะเราคาดการณ์ว่าจะดีขึ้นสะท้อนให้เห็นในร่างกาย state.The ผลยับยั้งโดยวัดจากการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยวิธีการที่ใช้โดย "Dahlqvist" [24] หลังจาก 20 ชั่วโมงของการอดอาหารเป็นส่วนหนึ่งของลำไส้เล็กสัตว์ทันทีด้านล่างลำไส้เล็กส่วนต้นและทันทีที่ลำไส้ใหญ่ส่วนต้นข้างต้นถูกตัดล้างด้วยน้ำเกลือเย็นและปั่นกับ 12 มิลลิลิตรของ buffer maleate (100 มิลลิพีเอช 6) homogenate ถูกใช้เป็นวิธีการแก้ปัญหา-glucosidase ส่วนผสมทดสอบประกอบด้วย 100 มิลลิ maleate บัฟเฟอร์ (pH 6), 2% (w / v) การแก้ปัญหาของแต่ละพื้นผิวน้ำตาล (100 มล.) และตัวอย่าง
สารสกัด (20e640 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ส่วนผสมที่ถูก preincubated 5 นาทีที่ 37_C และปฏิกิริยาได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่มวิธีการแก้ปัญหาน้ำมันดิบ-glucosidase (50 มล.) ตามด้วยการบ่มส่วนผสมอีกครั้งเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37_C ปริมาณของน้ำตาลกลูโคสการปล่อยตัวในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดโดยชุดการประมาณค่าระดับน้ำตาลในเชิงพาณิชย์ (ช่วงวินิจฉัย จำกัด มุมไบประเทศอินเดีย) อัตราการสลายตัวของคาร์โบไฮเดรตที่คำนวณเป็นอัตราส่วนร้อยละของปริมาณของน้ำตาลกลูโคสคาร์โบไฮเดรตได้รับเมื่อถูกย่อยสลายอย่างสมบูรณ์ อัตราของการป้องกันที่คำนวณได้จากสูตรต่อไปนี้: อัตราการยับยั้ง (%) Z [{(จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดย
ควบคุมบวก) จ (จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดยนอกเหนือจาก EESS) จ (มูลค่าการผลิตกลูโคสในว่างเปล่า) / (จำนวนของน้ำตาลกลูโคสที่ผลิตโดยการควบคุมบวก)}] _ 100

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 a-glucosidase ยับยั้ง (
) นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาประสิทธิภาพในการยับยั้งกิจกรรมของ eess บนซูเครส และมอลเตส ( aglucosidases ) แม้ว่า a-glucosidase แยกจากยีสต์เป็นอย่างกว้างขวางใช้เป็นวัสดุสำหรับการคัดกรอง a-glucosidase inhibitors ผลลัพธ์ไม่ได้มักจะเห็นด้วยกับผู้ที่ได้ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ดังนั้นเราใช้แยกลำไส้เล็กของหนูเป็น a-glucosidase ทางออกเพราะเราคาดการณ์ว่ามันจะดีขึ้นสะท้อนให้เห็นถึงฤทธิ์ในการยับยั้งต่อรัฐ ได้เล็กน้อย การใช้วิธี " dahlqvist " [ 24 ] หลังจาก 20 ชั่วโมง การอดอาหาร เป็นส่วนหนึ่งของสัตว์ ลำไส้เล็ก ลำไส้เล็กทันทีด้านล่างและด้านบนทันที ลำไส้ใหญ่ส่วนต้นถูกตัดล้างด้วยน้ำเกลือที่เย็นและน้ำแข็งบด , 12 ml ของมาลีเบัฟเฟอร์ ( 100 มม. , pH 6 ) การแยกใช้เป็น a-glucosidase โซลูชั่น วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วยบัฟเฟอร์มาลีเ 100 มิลลิเมตร ( pH 6 ) , 2% ( w / v ) ของแต่ละแผ่น โซลูชั่น น้ำตาล ( 100 ml ) และตัวอย่าง
สกัด ( 20e640 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) ส่วนผสมสำหรับ 5 นาทีที่ 37_c preincubated ,และปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยการเพิ่มโซลูชั่น a-glucosidase ดิบ ( 50 ml ) ตามด้วยไข่ผสมอีกครั้งสำหรับ 10 นาทีที่ 37_c ปริมาณของกลูโคสออกในปฏิกิริยานี้ถูกกำหนดโดยการใช้ในเชิงพาณิชย์กลูโคส Kit ( ช่วงวินิจฉัยจำกัด , มุมไบ , อินเดีย )อัตราการสลายคาร์โบไฮเดรตได้คำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ อัตราส่วนของปริมาณกลูโคสที่ได้รับเมื่อคาร์โบไฮเดรตถูกย่อยอย่างสมบูรณ์ . อัตราการป้องกันถูกคำนวณโดยสูตรต่อไปนี้ : การยับยั้ง ( % ) Z [ { (
ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดยควบคุมบวก ) E ( ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดยการเพิ่มของ eess ) E ( ค่าการผลิตกลูโคสในที่ว่างเปล่า ) / ( ปริมาณกลูโคสที่ผลิตโดยควบคุมบวก ) } ] _100 .