2.4.4. Determination of free amino

2.4.4. Determination of free amino acid (FAA)
The FAAs was analysed, from extraction to chromatography,
according to the method described by Antoine, Wei, Littell, and
Marshall (1999) and FAA units expressed in mg/100 g. Ten grams
of shrimp and 40 mL of extracting solvent (75% methanol in distilled
deionized water) were homogenated, transferred to a
100 mL volumetric flask and stored for 60 min (or overnight) at
4 C. The contents of the flask were transferred to a 50 mL
centrifuge tube and centrifuged at 15,000 rpm for 40 min at 4 C.
The supernatant was filtered on PTFE 0.2 lm filter membrane
(Gelman Sciences), before derivatization. By way of
o-phthaldialdehyde (OPA) pre-column derivatization, the OPA
Thiol Reagent (OPT) was prepared 24 h prior to use by dissolving
27 mg of o-phthaldialdehyde in 500 lL of absolute alcohol. Then,
5 mL of 0.1 M sodium tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) (pH 9.5) was
added, followed by 50 lL of mercaptoethanol, then, mixed and
stored in the dark. The amino acid standards stock solution was
prepared by dissolving the equivalent of 2500 nmol of each amino
acid in 0.05 M NaH2PO4 buffer (pH 5.5) and then diluted for calibration
curve. Further, to 100 lL of amino acid standard or 189
diluted sample supernatant at High Pressure Liquid Chromatography
(HPLC), 400 lL of OPT was added, then the sample was manually
injected onto the column of HPLC system. Mobile phase A was
made up of 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 5.5), methanol,
and THF (80: 19:1). Mobile phase B was made up of 80% methanol
and 20% of the 0.05 M NaH2PO4 buffer. The pH of phosphate buffer
was adjusted to 5.5. The mobile phases were filtered under 0.2 lm
filter membranes (Gelman Sciences, Ann Arbor, MI) and degassed
by vacuum for 5 min. The HPLC column was an Ultrasphere ODS
5 lm particle size, 4.6 mm  25 cm (Beckman Instruments, Inc.,
Fullerton, CA). The gradient elution was generated using a Elite
LaChrom equipped with a L-7100 pump (LaChrom, Hitachi), oven
L-7350 (LaChrom, Merck), programmable fluorescence detector
with excitation monochromator setting of 330 nm as well as an
emission cutoff filter of 418 nm. The chromatographic data were
processed using software EZChrom Elite (Agilent Tech., Santa Clara,
CA 95051, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.4 การวิเคราะห์ปริมาณกรดอะมิโนฟรี (FAA)ปรับโครงสร้างของได้มาวิเคราะห์ จากสกัดการ chromatographyตามวิธีการอธิบายไว้ โดย Antoine, Wei, Littell และมาร์แชลล์ (1999) และ FAA แสดง มิลลิกรัม/100 กรัม 10 กรัมกุ้งและ 40 มล.การสกัดตัวทำละลาย (เมทานอล 75% ในกลั่นจุน้ำ) ถูก homogenated โอนย้ายไปขวดแก้ววัดปริมาตร 100 มิลลิลิตร และเก็บไว้สำหรับ 60 นาที (หรือหลาย) ที่ค. 4 เนื้อหาของขวดถูกย้ายไป 50 มิลลิลิตรเครื่องหมุนเหวี่ยงหลอด และเหวี่ยงที่ 15,000 rpm สำหรับ 40 นาทีที่ 4 cSupernatant ที่ถูกกรองบนไฟเบอร์ 0.2 lm ตัวกรองเมมเบรน(รีเกลแมนวิทยาศาสตร์), ก่อน derivatization ตามขวางของo-phthaldialdehyde (OPA) ก่อนคอลัมน์ derivatization, OPAรีเอเจนต์ thiol (OPT) ถูกเตรียม 24 ชั่วโมงก่อนใช้ยุบo phthaldialdehyde ใน 500 27 มิลลิกรัมจะดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์สัมบูรณ์ แล้ว5 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียม tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) ถูก (ค่า pH 9.5)เพิ่ม ตาม ด้วย 50 จะของ mercaptoethanol จากนั้น ผสม และเก็บไว้ในมืด เป็นการแก้ปัญหาการสต็อกของกรดอะมิโนมาตรฐานเตรียมยุบเทียบเท่ากับ 2500 นาโนโมลของอะมิโนแต่ละกรดใน 0.05 M NaH2PO4 บัฟเฟอร์ (pH 5.5) และเจือจางแล้ว สำหรับการสอบเทียบเส้นโค้ง เพิ่มเติม 100 จะเกิดกรดอะมิโนมาตรฐาน หรือ 189เจือจางตัวอย่าง supernatant ที่ Chromatography ของเหลวความดันสูง(HPLC), 400 เพิ่มจะของเลือก แล้วเป็นตัวอย่างด้วยตนเองฉีดลงบนคอลัมน์ของระบบ HPLC มือถือเฟส A ถูกขึ้น 0.05 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 5.5), เมทานอลและเกี่ยวกับ THF (80:19:1) โทรศัพท์มือถือระยะ B ประกอบด้วยเมทานอล 80%และ 20% ของบัฟเฟอร์ NaH2PO4 0.05 M ค่า pH ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟตถูกปรับปรุงเป็น 5.5 ระยะเคลื่อนที่ได้กรองภายใต้ 0.2 lmกรองเยื่อ (วิทยาศาสตร์รีเกลแมน Ann Arbor, MI) และ degassedโดยเครื่องดูดฝุ่นสำหรับ 5 นาที คอลัมน์ HPLC เป็น ODS Ultrasphereขนาดอนุภาค lm, 4.6 มม. 25 ซม. (Beckman เครื่อง Inc., 5ฟุลเลอร์ CA) สร้างใช้ยอดการชะไล่ระดับLaChrom พร้อมปั๊ม L-7100 (LaChrom ฮิตาชิ), เตาอบL-7350 (LaChrom เมอร์ค), เครื่องตรวจจับสารเรืองแสงที่สามารถตั้งโปรแกรมได้โดยตั้งค่า monochromator กระตุ้นที่ 330 nm เช่นเดียวกับกรองตัดปล่อยของ 418 nm ข้อมูลโครมาได้ประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ EZChrom Elite (Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลาราทาง CA ที่ 95051 สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.4 ความมุ่งมั่นของกรดอะมิโนอิสระ (FAA)
Faas ได้รับการวิเคราะห์จากการสกัดเพื่อโครมาโต,
ตามวิธีการอธิบายโดยแอนทอนเหว่ย Littell และ
มาร์แชลล์ (1999) และหน่วยงานที่แสดงในจอห์นฟามก. / 100 กรัม สิบกรัม
กุ้งและ 40 มิลลิลิตรในการสกัดด้วยตัวทำละลาย (75% เมทานอลในการกลั่น
น้ำปราศจากไอออน) ถูก homogenated, โอนไปยัง
100 มลขวดปริมาตรและเก็บไว้เป็นเวลา 60 นาที (หรือข้ามคืน) ที่
4 องศาเซลเซียส เนื้อหาของขวดที่ถูกโอนไปยัง 50 มล
หลอด centrifuge และหมุนเหวี่ยงที่ 15,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 40 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส.
ใสถูกกรองเมมเบรนใน PTFE กรอง 0.2 LM
(Gelman วิทยาศาสตร์) ก่อนอนุพันธ์ โดยวิธีการของ
O-phthaldialdehyde (OPA) อนุพันธ์ก่อนคอลัมน์ OPA
Thiol Reagent (OPT) กำลังเตรียมพร้อม 24 ชั่วโมงก่อนที่จะใช้โดยการละลาย
27 mg ของ O-phthaldialdehyde 500 LL ของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่แน่นอน จากนั้น
5 มิลลิลิตร 0.1 M โซเดียม tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) (pH 9.5) คือ
เพิ่มตามด้วย 50 LL ของ mercaptoethanol แล้วผสมและ
เก็บไว้ในที่มืด วิธีการแก้ปัญหามาตรฐานกรดอะมิโนหุ้นถูก
จัดทำขึ้นโดยการละลายเทียบเท่า 2500 nmol ของอะมิโนแต่ละ
กรดใน 0.05 M NaH2PO4 บัฟเฟอร์ (pH 5.5) และปรับลดสำหรับการสอบเทียบแล้ว
โค้ง นอกจากนี้ถึง 100 LL มาตรฐานกรดอะมิโนหรือ 189
เจือจางตัวอย่างสารละลายที่ความดันสูง Liquid Chromatography
(HPLC) 400 LL ของการเลือกถูกเพิ่มเข้ามาแล้วตัวอย่างที่ถูกตนเอง
ฉีดลงบนคอลัมน์ของระบบ HPLC เฟสมือถือที่ถูก
สร้างขึ้นจาก 0.05 M บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 5.5), เมทานอล
และ THF (80: 19: 1) มือถือเฟส B ถูกสร้างขึ้นจากเมทานอล 80%
และ 20% ของบัฟเฟอร์ 0.05 M NaH2PO4 ค่า pH ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์
ปรับ 5.5 ขั้นตอนที่มือถือถูกกรองภายใต้ 0.2 LM
เยื่อกรอง (Gelman วิทยาศาสตร์ Ann Arbor, MI) และ degassed
โดยสูญญากาศเป็นเวลา 5 นาที คอลัมน์ HPLC เป็น Ultrasphere ODS
5 LM อนุภาคขนาด 4.6 มม? 25 ซม. (เบคค์เครื่องดนตรี, Inc,
Fullerton, CA) ชะลาดถูกสร้างขึ้นโดยใช้ยอด
LaChrom พร้อมกับปั๊ม L-7100 (LaChrom ฮิตาชิ), เตา
L-7350 (LaChrom เมอร์ค) ตรวจจับการเรืองแสงโปรแกรมได้
ด้วยการตั้งค่าการกระตุ้น monochromator 330 นาโนเมตรเช่นเดียวกับ
ตัวกรองการปล่อยตัดของ 418 นาโนเมตร ข้อมูลโครมาถูก
ประมวลผลโดยใช้ซอฟแวร์ยอด EZChrom (Agilent Tech., ซานตาคลารา,
CA 95051, USA)