The plant material (leaves,fresh we

The plant material (leaves,
fresh weight 11.5 kg) was extracted with hot MeOH
(20 1 x 2). The MeOH extract was coned under red.
pres. and the viscous concentrate (900 g) was partitioned
between Hz0 and n-BuOH. The n-BuOHsoluble
phase (420 g) was passed through a Diaion
HP-20 column with increasing amounts of MeOH in
H,O. The 80% MeOH and MeOH eluate frs were
combined and chromatographed on silica gel eluting
with a stepwise gradient mixture of CHCl,-MeOH
(9: I; 4: 1; 2: 1) and, finally, with MeOH. Frs with the
same TLC profile were combined. Five frs (1-V) were
recovered. Frs 111-V mainly contained steroidal saponins.
Fr. III was subjected to silica gel CC eluting
with CHCI,-MeOH (5: 1; 4: 1; 3: 1) and ODS silica gel
CC with MeOH-H,O (17:3; 4: 1) to give 5 (48.7 mg),
and 1 and 3 with a few impurities. Final purification
of 1 was established by prep. HPLC using MeOHH,
O (9: l), and that of 3 by prep. TLC developing
with CHCl,-MeOH-H20 (30: 10: 1) to yield l(328 mg)
and 3 (48.4 mg), respectively, as pure compounds. Fr.
V was further fractionated by subjecting it to ODS
silica gel CC with MeOH-H20 (7: 3) into four frs V(ak
V(d). Fr. V(b) was chromatographed on silica gel eluting
with CHCl,-MeOH-H,O (20: 10: 1) to yield 8 (43.0
mg). Fr. Vc was subjected to a silica gel column eluting
with CHClx-MeOH-Hz0 (25: 10: 1) to yield 7 (300
mg). Fr. Vd was subjected to silica gel CC eluting
with CHCI,-MeOH (4: 1) and ODS silica gel CC with
MeOH-Hz0 (7:3; 3:2) and MeCN-H,O (1:3; 1:4) to
collect 4 (123 mg), 2 and 9 with a few impurities, a
mixture of 12 and 13, and a mixture of 6, 10 and 11.Purification of 2 and 9 was achieved by means of prep.
HPLC using MeOH-Hz0 (9: 1) for 2 and MeCN-H,O
(1:3) for 9 to furnish 2 (55.3 mg) and 9 (39.4 mg),
respectively. Separation of 12 and 13 was carried out
by prep. HPLC using MeCN-H,O (1:4) to yield 12
(47.2 mg) and 13 (22.0 mg). The mixture of 6, 10 and
11 was subjected to prep. HPLC using MeCN-Hz0
(1: 3) to result in the isolation of 6 (39.3 mg), 10 (I 70
mg) and 11 (87.6 mg) as pure compounds.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุโรงงาน (ใบไม้น้ำหนัก 11.5 กิโลกรัมสด) ถูกสกัด ด้วยน้ำร้อนทานอ(20 1 x 2) สารสกัดจากทานอเป็น coned ภายใต้สีแดงมีกั้น pres. และข้นข้น (900 กรัม)ระหว่าง Hz0 และ n BuOH N-BuOHsolubleส่งผ่าน Diaion เป็นระยะ (420 กรัม)HP-20 คอลัมน์เพิ่มจำนวนทานอในH โอ 80% ทานอและทานอ eluate frsรวม และ chromatographed อยู่ในเจล elutingด้วยการผสมผสานระหว่างไล่ระดับ stepwise CHCl, -ทานอ(9: ฉัน 4:1; 2:1) และ สุดท้าย ทานอ Frs กับการมีรวมโพรไฟล์เดียวกัน TLC มี frs 5 (1 V)กู้คืน Frs 111-V มีอยู่ส่วนใหญ่ steroidal saponinsคุณพ่อ III ถูกยัดเยียดให้ซิลิก้าเจล CC elutingมี CHCI, -ทานอ (5:1; 4:1; 3:1) และ ODS ซิลิกาเจCC กับทานอ-H, O (17:3; 4:1) ให้ 5 (48.7 มิลลิกรัม),1 และ 3 มีกี่สิ่งสกปรกด้วย สุดท้ายฟอก1 ได้ก่อตั้งขึ้น โดยเตรียม HPLC ที่ใช้ MeOHHO (9: l), และที่ 3 โดยเป็นการเตรียมการ TLC ที่พัฒนามี CHCl, -ทานอ - เอท 20 (30:10:1) ให้ l (328 mg)และ 3 (48.4 มิลลิกรัม), ตามลำดับ เป็นสารประกอบบริสุทธิ์ คุณพ่อV เพิ่มเติมถูกแบ่ง ด้วยแล้วก็กดชัตเตอร์ไป ODSซิลิก้าเจล CC กับทานอเอท 20 (7:3) ในสี่ frs V (akV(d) คุณพ่อ V(b) ได้ chromatographed ในซิลิก้าเจล elutingมี CHCl, -ทานอ - H, O (20:10:1) ให้ผลผลิต 8 (43.0mg) คุณพ่อ Vc ถูกยัดเยียดให้เป็นเจลคอลัมน์ elutingกับ CHClx-ทานอ-Hz0 (25:10:1) ให้ 7 (300mg) คุณพ่อ Vd ถูกยัดเยียดให้ซิลิก้าเจล CC elutingมี CHCI, -ทานอ (4:1) และซิลิก้าเจล ODS CC ด้วยทานอ-Hz0 (7:3, 3:2) และ MeCN-H, O (1:3; 1:4) ให้4 (123 มิลลิกรัม), 2 และ 9 มีกี่สิ่งสกปรก การผสมผสานระหว่าง 12 และ 13 และส่วนผสม 6, 10 และ 11.ฟอก 2 และ 9 สำเร็จ โดยเตรียมHPLC ที่ใช้ทานอ-Hz0 (9:1) 2 และ MeCN-H, O(1:3) สำหรับ 9 ให้ 2 (55.3 มิลลิกรัม) และ 9 (39.4 มิลลิกรัม),ตามลำดับ ได้รับการดำเนินการแบ่งแยก 12 และ 13โดยเป็นการเตรียมการ HPLC ใช้ MeCN-H, O (1:4) ให้ผลผลิต 12(47.2 มิลลิกรัม) และ 13 (22.0 มิลลิกรัม) ผสมของ 6, 10 และ11 ถูกยัดเยียดให้ prep HPLC ที่ใช้ MeCN-Hz0(1:3) ทั้งแยก 6 (39.3 มิลลิกรัม), 10 (I 70มิลลิกรัม) และ 11 (87.6 มิลลิกรัม) เป็นสารบริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุจากพืช
(ใบน้ำหนักสด11.5 กิโลกรัม) ถูกสกัดด้วยเมธานอลร้อน
(20 1 x 2) เมธานอลสารสกัด coned ภายใต้สีแดง.
pres และข้นหนืด (900 กรัม)
กั้นระหว่างHz0 และ n-BuOH n-BuOHsoluble
เฟส (420 กรัม) ก็ผ่านไปผ่าน Diaion
คอลัมน์ HP-20
ที่มีจำนวนเพิ่มมากขึ้นของเมธานอลในเอชโอ 80% เมธานอลและ eluate เมธานอล FRS
ถูกรวมกันและchromatographed
บนซิลิกาเจลเคลือบที่มีส่วนผสมของการไล่ระดับสีแบบขั้นตอนCHCl, -MeOH
(9: ผม 4: 1; 2: 1) และในที่สุดด้วยเมธานอล Frs
กับรายละเอียดTLC เดียวกันมารวมกัน ห้า FRS (1-V)
ได้รับการกู้คืน Frs 111-V ส่วนใหญ่มี saponins steroidal.
คุณพ่อ ที่สามก็จะถูกซิลิก้าเจล CC eluting
กับ CHCI, -MeOH (5: 1; 4: 1 และ 3: 1) และซิลิก้าเจล ODS
CC กับเมธานอล-H, O (17: 3; 4: 1) เพื่อให้ 5 ( 48.7 มก.)
และ 1 และ 3 ที่มีสิ่งสกปรกไม่กี่ การทำให้บริสุทธิ์รอบชิงชนะเลิศวันที่ 1 ก่อตั้งขึ้นโดยเตรียม
โดยใช้วิธี HPLC MeOHH,
O (9: ลิตร) และที่ 3 โดยการเตรียมการ TLC
พัฒนากับCHCl, -MeOH-H20 (30: 10: 1) ให้ผลผลิตลิตร (328 มิลลิกรัม)
และ 3 (48.4 มก.) ตามลำดับในขณะที่สารบริสุทธิ์ อัสวี fractionated ต่อไปโดยหนอนบ่อนไส้มัน ODS ซิลิกาเจลเมธานอลกับ CC-H20 (7: 3) ​​เป็นสี่ FRS V (AK. V (ง) คุณพ่อ V (ข) ได้รับการ chromatographed บนซิลิกาเจลเคลือบด้วยCHCl - เมธานอล-H, O (20: 10: 1) ให้ผลผลิต 8 (43.0 มก.) คุณพ่อ Vc ยู่คอลัมน์ซิลิกาเจลเคลือบ. กับ CHClx-เมธานอล-Hz0 (25: 10: 1) ให้ผลผลิต 7 (300 มก. ) คุณพ่อ Vd ยู่ซิลิก้าเจลเคลือบซีซี. กับ CHCI, -MeOH (4: 1) และซิลิก้าเจล ODS CC กับเมธานอล-Hz0 (7: 3; 3: 2) และ MeCN-H, O (1: 3 1: 4) การเก็บ4 (123 มก.), 2 และ 9 ที่มีสิ่งสกปรกไม่กี่ที่มีส่วนผสมของ12 และ 13 และมีส่วนผสมของ 6, 10 และ 11.Purification 2 และ 9 ก็ประสบความสำเร็จด้วยวิธีการเตรียมHPLC ใช้เมธานอล-Hz0 (9: 1) สำหรับ 2 ท่านและ MeCN-H, O (1: 3) 9 ให้แก่ 2 (55.3 มก.) และ 9 (39.4 มก.). ตามลำดับแยก 12 และ 13 ได้ดำเนินการโดย. เตรียม HPLC ใช้ MeCN-H, O (1: 4) ที่จะให้ผลผลิต 12. (47.2 มก.) และ 13 (22.0 มก.) ส่วนผสมที่ 6, 10 และ11 ได้ภายใต้การเตรียม HPLC ใช้ MeCN-Hz0. (1: 3 ) ที่จะส่งผลในการแยก 6 (39.3 มก), 10 (ผม 70 มก.) และ 11 (87.6 มก.) เป็นสารบริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุปลูก ( ใบ สดน้ำหนัก 11.5 กิโลกรัม

) ถูกสกัดด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ร้อน ( 20 1 x 2 ) ปริมาณสารสกัดที่ได้ coned ภายใต้สีแดง ประธานและข้นหนืด

( 900 กรัม ) คือแยกระหว่าง hz0 และนอร์มัล - บิวทานอล . ขั้นตอน n-buohsoluble
( 420 กรัม ) คือผ่านคอลัมน์ diaion
hp-20 ด้วยปริมาณที่เพิ่มขึ้นของปริมาณใน
h , o . 80 % และมีปริมาณปริมาณสารละลาย ( eluate )
FRSรวมและ chromatographed บนซิลิกาเจล hexane
ที่มีส่วนผสมไล่ระดับแบบ chcl , - เมทิลแอลกอฮอล์
( 9 : 4 : 1 ; 2 : 1 ) และสุดท้ายด้วยเมทิลแอลกอฮอล์ . FRS กับ
เดียวกัน TLC โปรไฟล์อยู่รวมกัน ห้า FRS ( 1-v )
หาย FRS 111-v ส่วนใหญ่มีสเตียรอยด์ saponins .
เ 3 ภายใต้ซิลิกาเจล CC hexane
กับ chci , - เมทิลแอลกอฮอล์ ( 5 : 1 ; 2 : 1 ; 2 : 1 ) และ ODS ซิลิกาเจล
CC กับ meoh-h , O ( 17 : 3 ; 4 :1 ) เพื่อให้ 5 ( 48.7% มิลลิกรัม )
1 และ 3 ไม่ปลอม
บริสุทธิ์สุดท้าย 1 ก่อตั้งขึ้นโดยเทคนิคการเตรียมใช้ meohh
o , ( 9 : 1 ) และที่ 3 โดยมีการเตรียมการพัฒนา
กับ chcl , - meoh-h20 ( 30 : 10 : 1 ) ผลผลิต L ( 328 มก. )
3 ( 48.4 มิลลิกรัม ) ตามลำดับ เป็นสารประกอบบริสุทธิ์ เ
V ยังพบโดย subjecting มันบอก
ซิลิกาเจล CC กับ meoh-h20 ( 7 : 3 ) เป็นสี่ FRS V ( AK
V ( D ) เv ( B ) คือ chromatographed บนซิลิกาเจล hexane
กับ chcl , - meoh-h , O ( 20 : 10 : 1 ) ผลผลิตที่ 8 ( 43.0
มิลลิกรัม ) จาก VC ก็ต้องซิลิกาเจลคอลัมน์ hexane
กับ chclx-meoh-hz0 ( 25 : 10 : 1 ) ผลผลิต (
7 300 มก. ) ผลของซิลิกาเจลเป็นตัว CC hexane
กับ chci , - เมทิลแอลกอฮอล์ ( 4 : 1 ) และซิลิกาเจล CC ด้วย
meoh-hz0 ODS ( 7 : 3 ; 3 : 2 ) และ mecn-h , o ( 1 : 3 ; 1 : 4 )

เก็บ 4 ( 123 มิลลิกรัม )2 และ 9 ที่มีไม่กี่สิ่งสกปรก ,
ผสม 12 และ 13 และส่วนผสมของ 6 , 10 และ 11 . ฟอก 2 และ 9 คือความโดยวิธี HPLC การเตรียม
ใช้ meoh-hz0 ( 9 : 1 ) 2 และ mecn-h O
( 1 : 3 ) สำหรับ 9 วันที่ 2 ( 55.3 มก. ) และ 9 ( 39.4 มิลลิกรัม )
) การแยก 12 และ 13 ได้ดำเนินการเตรียมการ mecn-h
2 o ( 1 : 4 ) ผลผลิต 12
( 200 มิลลิกรัม ) และ 13 ( 22.0 มิลลิกรัม ) ส่วนผสมของ 10
611 ภายใต้การเตรียม HPLC โดยใช้ mecn-hz0
( 1 : 3 ) ผลในการแยก 6 ( 39.3 มิลลิกรัม ) , 10 ( ผม 70
มิลลิกรัม ) และ 11 ( 87.6 มก. ) เป็นสารประกอบบริสุทธิ์ .