Total RNA extraction and cDNA synth

Total RNA extraction and cDNA synthesis
The full length (6 cm) of tissue (containing both necrotic region and non-necrotic region) was used for RNA extraction
for both inoculated and mock-inoculated samples. Hevea brasiliensis synthesizes natural rubber, a secondary
metabolite (Chow et al. 2012), thus total RNA extraction was carried out according to protocol for RNA extraction for
plants rich in secondary metabolites (Ghangal et al. 2009). Total RNA from each condition was treated with DNase I
(Thermo Scientific, Helsinki, Finland) according to the manufacturer’s instructions. RNA quantification was carried out
using ND-2000 spectrophotometer (Nanodrop technologies). cDNA was synthesized by reverse transcription from
100 ng total RNA using whole transcriptome amplification (WTA) kit according to the manufacturer’s instructions
(Sigma-Aldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดและ cDNA การสังเคราะห์อาร์เอ็นเอทั้งหมดแบบยาว (6 เซนติเมตร) ของเนื้อเยื่อ (ประกอบด้วย necrotic ภูมิภาคและภูมิภาค-necrotic) ใช้สำหรับสกัด RNAสำหรับตัวอย่างทั้ง inoculated และ inoculated จำลอง ยางพาราต้นยางพาราสังเคราะห์ยางธรรมชาติ รองmetabolite (Chow et al. 2012), รวม RNA จึงแยกดำเนินการตามโพรโทคอลการสกัด RNA สำหรับพืชที่อุดมไปด้วยสารรอง (Ghangal et al. 2009) อาร์เอ็นเอทั้งหมดจากแต่ละเงื่อนไขได้รับการรักษากับ DNase ฉัน(วิทยาศาสตร์เทอร์โม เฮลซิงกิ ฟินแลนด์) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอนับได้ดำเนินการใช้ ND-2000 สเปค (Nanodrop เทคโนโลยี) เป็นสังเคราะห์ cDNA โดยถอดรหัสย้อนกลับจาก100 ฉบับรวมอาร์เอ็นเอโดยใช้ transcriptome ทั้งชุดขยาย (ดับเบิลยูทีเอ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต(Sigma Aldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัด RNA รวมและยีนสังเคราะห์
ความยาวเต็มรูปแบบ (6 ซม.) ของเนื้อเยื่อ (ที่มีทั้งเศษภูมิภาคและภูมิภาคที่ไม่ตาย) ถูกนำมาใช้ในการสกัด RNA
สำหรับทั้งตัวอย่างเชื้อและจำลองเชื้อ ยางพาราสังเคราะห์ยางธรรมชาติรอง
metabolite (Chow et al. 2012) ดังนั้นการสกัด RNA รวมได้ดำเนินการตามโปรโตคอลสำหรับการสกัด RNA สำหรับ
พืชที่อุดมไปด้วยสารทุติยภูมิ (Ghangal et al. 2009) RNA รวมจากแต่ละสภาพรับการรักษาด้วย DNase ฉัน
(Thermo Scientific, เฮลซิงกิ, ฟินแลนด์) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอปริมาณได้ดำเนินการ
โดยใช้ spectrophotometer ND-2000 (เทคโนโลยี Nanodrop) ยีนสังเคราะห์โดยถอดรหัสแบบย้อนกลับจาก
100 RNA รวม NG ใช้ทั้งยีนขยาย (WTA) ชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิต
(Sigma-Aldrich)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัด DNA และสังเคราะห์ cDNA รวมความยาวเต็ม ( 6 เซนติเมตร ) เนื้อเยื่อ ( ที่มีทั้งภูมิภาคที่และไม่เปื่อยภูมิภาค ) ถูกใช้ในการสกัดอาร์เอ็นเอทั้งไม่มีการเยาะเย้ยจากตัวอย่าง ยางพารา ยางสังเคราะห์ , มัธยมศึกษาเมตาโบไลท์ ( เชา et al . 2012 ) จึงรวมการสกัด RNA ได้ดำเนินการตามขั้นตอนในการสกัดอาร์เอ็นเอสำหรับพืชที่อุดมไปด้วยสาร secondary metabolites ( ghangal et al . 2009 ) อาร์เอ็นเอรวมจากแต่ละภาพจะได้รับการตรวจหา ADNase ฉัน( เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , เฮลซิงกิ , ฟินแลนด์ ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ซึ่งปริมาณถูกออกการใช้ nd-2000 Spectrophotometer ( nanodrop เทคโนโลยี ) ถูกสังเคราะห์โดยวิธี reverse transcription จาก100 ของทั้งหมด ซึ่งใช้ทั้งทราน ริปโตม amplification ( WTA ) ชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิต( ซิกม่า Aldrich )