A direct ELISA assay for quantitati

A direct ELISA assay for quantitative determination of the inhibitory potency of
small molecules inhibitors for JNK3

The c-jun N-terminal kinase 3 (JNK3) is a promising drug target for the treatment of neurological disorders.
Here we report a direct ELISA including the optimization of a nonradioactive immunosorbent JNK3 activity
assay to determine inhibitory potency of small-molecule inhibitors. Based on our previous JNK3 assay
and our recently optimized p38 mitogen activated protein kinase (MAPK) protocol for monitoring the
phosphorylation of activating-transcription factor 2 (ATF-2), we present a rapid and straightforward
alternative to conventional radioactive and indirect ELISA kinase assays. To validate the assay with the
optimized assay conditions we used reference compounds and achieved well comparable IC50 results to
published data. The use of a linked monoclonal antibody increased the specificity and the sensitivity of
the assay, reducing the required antibody concentration by approximately 100-fold. The novel protocol is
an accurate, easy-to-handle and robust screening assay for JNK3 and the assay performance was reduced
from 7.5 to 3 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทดสอบ ELISA โดยตรงสำหรับการกำหนดศักยภาพลิปกลอสไขของเชิงปริมาณinhibitors โมเลกุลขนาดเล็กสำหรับ JNK3Kinase เทอร์มินัล N c-3 jun (JNK3) เป็นเป้าหมายยาเสพติดสัญญาสำหรับการรักษาโรคระบบประสาทที่นี่เรารายงานการ ELISA โดยตรงรวมถึงการเพิ่มประสิทธิภาพของ immunosorbent nonradioactive JNK3 กิจกรรมวิเคราะห์เพื่อกำหนดศักยภาพของลิปกลอสไขของ inhibitors โมเลกุลขนาดเล็ก ตามการวิเคราะห์ของ JNK3 ก่อนหน้านี้และโปรตีน kinase (MAPK) โพรโทคอลการตรวจสอบการเรียกใช้ mitogen p38 เพิ่มประสิทธิภาพล่าสุดของเราphosphorylation ของ transcription เปิดคูณ 2 (ATF-2), เรานำเสนอ ได้อย่างรวดเร็ว และตรงไปตรงมาทางเลือกแบบทางอ้อม และกัมมันตรังสี ELISA kinase assays การตรวจสอบวิเคราะห์ด้วยการปรับเงื่อนไขการทดสอบเราใช้สารอ้างอิง และบรรลุผลลัพธ์ IC50 อย่างดีเทียบเท่ากับเผยแพร่ข้อมูล การใช้แอนติบอดี monoclonal เชื่อมโยงเพิ่มที่ specificity และความไวของการทดสอบ การลดความเข้มข้นของแอนติบอดีที่ต้องการโดยประมาณ 100-fold โพรโทคอนวนิยายเป็นทดสอบการคัดกรองถูกต้อง จัดการง่าย และมีประสิทธิภาพ JNK3 และทดสอบประสิทธิภาพลดลงจาก 7.5 กับ 3 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทดสอบ ELISA โดยตรงสำหรับการกำหนดปริมาณของความแรงในการยับยั้งของ
สารยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็กสำหรับ JNK3 C-มิถุนายนไคเนส N-มินัล 3 (JNK3) เป็นเป้าหมายยาเสพติดที่มีแนวโน้มในการรักษาความผิดปกติของระบบประสาท. ที่นี่เรารายงาน ELISA โดยตรงรวมทั้งการเพิ่มประสิทธิภาพ ของอิมมูโน nonradioactive กิจกรรม JNK3 ทดสอบเพื่อตรวจสอบความแข็งแรงของการยับยั้งสารยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็ก ขึ้นอยู่กับการทดสอบ JNK3 เราก่อนหน้านี้และเมื่อเร็ว ๆ นี้ดีสุดของเรา p38 mitogen โปรตีนไคเนสเปิดใช้งาน (MAPK) โปรโตคอลสำหรับการตรวจสอบphosphorylation ของปัจจัยการเปิดใช้งานการถอดความ-2 (ATF-2) เรานำเสนออย่างรวดเร็วและตรงไปตรงทางเลือกที่จะ ELISA ธรรมดากัมมันตรังสีและทางอ้อมการตรวจไคเนส . ในการตรวจสอบการทดสอบที่มีเงื่อนไขการทดสอบที่ดีที่สุดที่เราใช้สารอ้างอิงและประสบความสำเร็จเป็นอย่างดีผล IC50 เทียบเคียงได้กับข้อมูลที่เผยแพร่ ใช้แอนติบอดีที่เชื่อมโยงเพิ่มความจำเพาะและความไวของการตรวจสอบปริมาณการลดความเข้มข้นของแอนติบอดีที่จำเป็นโดยประมาณ 100 เท่า โพรโทคอนวนิยายเรื่องนี้ถูกต้องทดสอบการตรวจคัดกรองที่ง่ายต่อการจัดการและมีประสิทธิภาพสำหรับ JNK3 และประสิทธิภาพการทดสอบลดลง7.5-3 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โดยวิธี ELISA สำหรับการวิเคราะห์ปริมาณความแรงของโมเลกุลขนาดเล็ก สามารถยับยั้งการ jnk3


ถูก c-jun ไคเนส 3 ( jnk3 ) เป็นเป้าหมายของยาที่มีแนวโน้มสำหรับการรักษาความผิดปกติทางระบบประสาท .
ที่นี่เรารายงานโดยตรงรวมทั้งการเพิ่มประสิทธิภาพของ nonradioactive ELISA และการทดสอบเพื่อตรวจสอบความแรง jnk3 กิจกรรม
อาหารยา โมเลกุลเล็กตาม jnk3
( ก่อนหน้านี้ของเราและของเราเพิ่งปรับ P38 ปรากฎเปิดโปรตีนไคเนส ( mapk ) โปรโตคอลสำหรับการตรวจสอบ
ฟอสโฟริเลชันของการถอดความปัจจัย 2 ( atf-2 ) เราเสนอทางเลือกอย่างรวดเร็วและตรงไปตรงมา
แบบกัมมันตรังสีและวิธี indirect ELISA พบว่าวิธี . การตรวจสอบการทดสอบกับ
ที่ดีที่สุดในเงื่อนไขที่เราใช้สารอ้างอิงและบรรลุผล ic50 ได้ดีเทียบเท่ากับ
เผยแพร่ข้อมูล การใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีเชื่อมโยงเพิ่มความจำเพาะและความไวของ
( ลดใช้แอนติบอดีความเข้มข้นประมาณ 100 เท่า โปรโตคอลใหม่
ถูกต้องที่ง่ายและมีประสิทธิภาพสำหรับการคัดกรองการทดสอบประสิทธิภาพและการทดสอบ jnk3 ลดลงจาก 7.5 3 H .