Laboratory analysts were blinded to

Laboratory analysts were blinded to the case-control status of
all samples.

The applied methodology for the analysis of ZON and
its five metabolites is described in a previously published study
(Belhassen et al., 2014).

In brief, urine samples were thawed completely
at room temperature, centrifuged at 4050g for 10 min to sediment particulate matter and 10 mL were taken to carry out the
analysis.

Each sample was spiked with 100 lL of the surrogate
(400 ng mL1) and 100 lL of enzyme solution (b-glucuronidase/
sulfatase).

The enzyme solution was prepared daily by dissolving
3.32 mg of b-glucuronidase/sulfatase (3  106 U g solid1) in 1mL
of 1 M ammonium acetate buffer (pH 5.0).

25 lL of 4-methylumbelliferyl
glucuronide/4-methylumbelliferyl sulfate/13C4-4-methylumbelliferone
standard mixture (4 lgmL1) was also added to
determine the extent of deconjugation.

After mixing, the sample
was incubated at 37 C for 24 h.

Next, analytes were extracted from
the samples by adding 15 mL of ethyl acetate/formic acid (99:1, v/
v) and shaking for 30 min.

The mixture was centrifuged for 10 min
at 4050g. Subsequently, the extracts were evaporated to dryness at
room temperature under a nitrogen stream.

The residue was dissolved
with 400 lL of a mixture of Milli-Q water/MeOH (50:50,
v/v) and placed in a 1.5 mL Eppendorf tube.

500 lL of hexane
was added and the mixture was centrifuged for 15 min at
24960g.

Finally, the underlying aqueous phase was separated and
10 lL injected into the ultra high performance liquid chromatograph
(UHPLC) system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

นักวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการได้รับการตาบอดสถานะกรณีการควบคุมของ
กลุ่มตัวอย่างทั้งหมด. วิธีการที่ใช้ในการวิเคราะห์ ZON และห้าสารที่อธิบายไว้ในการศึกษาที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้(Belhassen et al., 2014). ในช่วงสั้น ๆ ตัวอย่างปัสสาวะถูกละลายอย่างสมบูรณ์ที่อุณหภูมิห้องหมุนเหวี่ยงที่ 4050g เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อให้ตะกอนอนุภาคและ 10 มลถูกนำไปดำเนินการวิเคราะห์. ตัวอย่างแต่ละคนถูกแทงด้วย 100 lL ของตัวแทน(400 มิลลิลิตรจำนวน 1) และ 100 lL ของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ (ข -glucuronidase / sulfatase). การแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ที่ได้รับการจัดทำขึ้นเป็นประจำทุกวันโดยการละลาย3.32 มิลลิกรัมของ B-glucuronidase / sulfatase (3? U 106 กรัมของแข็ง 1) ใน 1 มล1 M แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ (pH 5.0). 25 lL ของ 4 Methylumbelliferyl glucuronide / 4 Methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13C4-4-methylumbelliferone ส่วนผสมมาตรฐาน (4 lgmL? 1) ถูกเพิ่มเข้ามานอกจากนี้ยังกำหนดขอบเขตของ deconjugation. หลังจากผสมตัวอย่างถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง. ถัดไปวิเคราะห์ได้ ที่สกัดจากตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มลเอทิลอะซิเต / กรด (99: 1, v / v.) และการสั่นสะเทือนเป็นเวลา 30 นาทีส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4050g ต่อจากนั้นสารสกัดระเหยจนแห้งที่อุณหภูมิห้องภายใต้กระแสไนโตรเจน. ที่เหลือก็เลือนหายไปกับ 400 lL ส่วนผสมของน้ำพัน-Q / เมธานอล (50:50, v / v) และวางไว้ในหลอด 1.5 มิลลิลิตร Eppendorf . 500 lL ของเฮกเซนถูกเพิ่มเข้ามาและส่วนผสมที่ถูกปั่น 15 นาทีที่24960g. สุดท้ายเฟสน้ำต้นแบบถูกแยกออกและ10 lL ฉีดเข้าไปใน Chromatograph ของเหลวสมรรถนะสูงเป็นพิเศษ(UHPLC) ระบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นักวิเคราะห์ห้องปฏิบัติการไปเพื่อควบคุมสถานะของ

ทุกตัวอย่าง ใช้วิธีการวิเคราะห์และ metabolites ของซน
5 อธิบายไว้ในก่อนหน้านี้เผยแพร่การศึกษา
( belhassen et al . , 2010 ) .

สรุปได้ว่า ตัวอย่างปัสสาวะถูกละลายอย่างสมบูรณ์
ที่อุณหภูมิ ห้อง ระดับที่ 4050g สำหรับ 10 นาทีถึงตะกอนอนุภาคและ 10 มิลลิลิตร นำมาดำเนินการ
การวิเคราะห์

แต่ละตัวอย่างถูกด้วย 100 จะของตัวแทน
( 400 กรัมมิลลิลิตร  1 ) และ 100 จะของสารละลายเอนไซม์ ( b-glucuronidase /
ซัลฟาเทส ) .

สารละลายเอนไซม์ที่เตรียมไว้ทุกวัน โดยละลาย
3.32 มิลลิกรัม / b-glucuronidase ซัลฟาเทส ( 3  106 U G แข็ง  1 ) ใน 1ml
ของ 1 M แอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) .

25 จะ 4-methylumbelliferyl
glucuronide / 4-methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13c4-4-methylumbelliferone
ส่วนผสมมาตรฐาน ( 4 lgml  1 ) ยังเพิ่ม

กำหนดขอบเขตของ deconjugation

หลังจากผสมตัวอย่าง
ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง 

ต่อไป สารสกัดจาก
ตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มิลลิลิตร / กรดเอทิลอะซิเตท ( 99:1 , V /
V ) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาที

ผสมคือระดับ 10 นาที
ที่ 4050g .ภายหลังจากถูกระเหยแห้งที่อุณหภูมิห้องภายใต้ไนโตรเจนกระแส


กาก
400 จะละลายผสม milli-q / ปริมาณน้ำ 100%
, v / v ) และอยู่ในหลอด 1.5 ml เพนดอร์ฟ

500 จะของเฮกเซน
เพิ่มและผสม อยู่ที่ระดับ 15 นาทีที่ 24960g


สุดท้าย ( เฟสน้ำถูกแยกออกและ
10 จะถูกฉีดเข้าไปในการปฏิบัติงานสูงยิ่งยวด ของเหลว โครมาโตกราฟ
( uhplc ) ระบบ