with high MRJ-L levels to that in m

with high MRJ-L levels to that in macrophages with low MRJ-L levels.
The cells were infected with equal inocula of either high MOI (Fig. 3a)
or low MOI (Fig. 3b) of the macrophage-tropic (M-trophic) HIV-1 ADA
strain (Khanna et al., 2000). Interestingly, macrophages with high
MRJ-L levels consistently harbored higher levels of HIV-1 replication
than those with low MRJ-L levels (Fig. 3a). In the low MOI group, only
macrophages with high, but not low, MRJ-L levels showed detectable
HIV infection (Fig. 3b).
3.4. Depleting MRJ-L Reduces HIV-1 Infection in Macrophages
Based on the above results, we reasoned that siRNA-knock down of
MRJ-L should reduce HIV-1 replication. To address this, we knocked
down MRJ-L in macrophages with normally high expression levels
(from donor 6) (Fig. 4a, western blot, left). Indeed, knock down of
MRJ-L significantly reduced HIV-1 infection (Fig. 4a, virus replication
curves, right). Next, we examined how exogenous MRJ-L expression
would affect virus production in macrophages that naturally have low
levels of this protein. The macrophages from donors 4 and 8 contained
low levels of endogenous MRJ-L. We transduced these cells with a
lentiviral MRJ-L expression vector to raise their MRJ-L levels (Fig. 4b,
western blot, left). This increased MRJ-L expression enhanced HIV-1
replication (Fig. 4b). Thus, our results suggest that higher MRJ-L expression pivotally augments HIV-1 infection in macrophages.
3.5. MRJ-L Interacts With Vpr and is Required for Its Nuclear Entry
Vpr has been implicated in the nuclear import of the HIV-1 preintegration complex. Because MRJ is a molecular chaperone, we next examined if MRJ-L plays a role in assisting Vpr with nuclear entry. To do
this, we co-expressed GFP–Vpr and HA-tagged MRJ-L or MRJ-S in HeLa
cells. We observed that Vpr and MRJ-L co-localized in the nuclei of
cells while Vpr and MRJ-S were seen in the cytoplasm (Fig. 5a). GFP–
Vpr was found exclusively (100%, 30 out of 30) in the nucleus in
shRNA (Scramble) cells. When MRJ-L was knocked down in HeLa cells
(Fig. 5b, c), the majority (83%, 39 out of 47) of transfected GFP–Vpr became cytoplasmic rather than nuclear [Fig. 5c; compare shRNA (MRJ-L)
panels to shRNA (Scramble) panels]. These results indicate that MRJ-L
facilitates the nuclear localization of Vpr, a finding consistent with results reported previously on the interaction of MRJ-L with HIV-2 Vpx
(Cheng et al., 2008).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีระดับสูง MRJ L ที่ในบังเอิญ MRJ L ระดับต่ำเซลล์ติดเชื้อ inocula เท่าของใดอยสูง (Fig. 3a)หรือต่ำอย (Fig. 3b) ของ ADA macrophage tropic (M-trophic) เอชไอวี-1ต้องใช้ (คันนาและ al., 2000) บังเอิญเป็นเรื่องน่าสนใจ มีสูงระดับ MRJ L harbored ระดับสูงของเอชไอวี-1 จำลองอย่างต่อเนื่องกว่าผู้มีระดับต่ำ MRJ L (Fig. 3a) ในต่ำอยกลุ่ม เท่านั้นบังเอิญมีระดับสูง แต่ไม่ ต่ำ MRJ L ที่แสดงให้เห็นว่าสามารถตรวจสอบได้เชื้อเอชไอวี (Fig. 3b)3.4 การพึ่ง MRJ L ลดบังเอิญติดเชื้อเอชไอวี-1เรายึดตามผลลัพธ์ข้างต้น reasoned นั้น siRNA-เคาะลงของMRJ L ควรลดจำลองเอชไอวี-1 ที่อยู่นี้ เราโบว์ลิ่งลง MRJ-L ในบังเอิญนิพจน์ปกติสูงมีระดับ(จากผู้บริจาคที่ 6) (Fig. 4a เวสเทิร์นคืนในตา ซ้าย) แน่นอน เคาะลงของSignificantly MRJ L ลดติดเชื้อเอชไอวี-1 (Fig. 4a ไวรัสจำลองเส้นโค้ง ขวา) ถัดไป เราตรวจสอบนิพจน์ MRJ L วิธีบ่อยจะส่งผลต่อการผลิตไวรัสในบังเอิญที่ธรรมชาติได้ต่ำระดับของโปรตีนนี้ บังเอิญจากผู้บริจาค 4 และ 8 ประกอบด้วยระดับต่ำสุดของ endogenous MRJ L. เรา transduced เซลล์เหล่านี้มีการเวกเตอร์นิพจน์ MRJ L lentiviral ยกระดับความ MRJ L (Fig. 4bตะวันตกคืนในตา ซ้าย) นิพจน์นี้ MRJ L เพิ่มเพิ่มเอชไอวี-1จำลองแบบ (Fig. 4b) ดังนั้น ผลของเราแนะนำว่า นิพจน์ MRJ L สูงมาย augments บังเอิญติดเชื้อเอชไอวี-13.5. MRJ L โต้ตอบกับ Vpr และจำเป็นสำหรับรายการเป็นนิวเคลียร์Vpr มีการเกี่ยวข้องในการนำนิวเคลียร์ของ preintegration เอชไอวี-1 ที่ซับซ้อน เนื่องจาก MRJ chaperone โมเลกุล เราถัดไปตรวจสอบถ้า MRJ L มีบทบาทสนับสนุน Vpr รายการนิวเคลียร์ จะทำอย่างไรนี้ เราแสดงร่วม GFP – Vpr และแท็กฮา MRJ-L หรือ S MRJ ใน HeLaเซลล์ เราสังเกตว่า Vpr และ MRJ L ร่วมเป็นภาษาท้องถิ่นแอลฟาของเซลล์ขณะ Vpr และ MRJ S ที่เห็นในไซโทพลาซึม (Fig. ของ 5a) GFP –พบ Vpr เฉพาะ (100%, 30 จาก 30) ในนิวเคลียสในเซลล์ shRNA (แปลงข้อมูล) เมื่อถูกโบว์ลิ่งลง MRJ L ในเซลล์ HeLa(Fig. 5b, c), กลายเป็นส่วนใหญ่ (83%, 39 ของ 47) transfected GFP – Vpr cytoplasmic แทนนิวเคลียร์ [Fig. 5c เปรียบเทียบ shRNA (MRJ-L)ติดตั้งกับแผง shRNA (แปลงข้อมูล)] ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า MRJ Lช่วยแปลนิวเคลียร์ของ Vpr, finding ที่สอดคล้องกับผลรายงานก่อนหน้านี้ในการโต้ตอบของ MRJ-L กับเอชไอวี-2 Vpx(Cheng et al., 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่มีระดับสูง MRJ-L เพื่อว่าในขนาดใหญ่ที่มีระดับต่ำ MRJ-L.
เซลล์มีการติดเชื้อ inocula เท่าเทียมกันของทั้ง MOI สูง (รูป. 3a)
หรือต่ำ MOI (รูป. 3b) ของ macrophage เขตร้อน (M-โภชนาการ ) เอชไอวี 1 ADA
ความเครียด (คันนา et al., 2000) ที่น่าสนใจที่มีขนาดใหญ่สูง
ระดับ MRJ-L เก็บงำระดับที่สูงขึ้นอย่างต่อเนื่องของการจำลองแบบเอชไอวี 1
กว่าผู้ที่มีระดับ MRJ-L ต่ำ (รูป. 3a) ในกลุ่ม MOI ต่ำเพียง
ขนาดใหญ่ที่มีความสูง แต่ไม่ต่ำระดับ MRJ-L แสดงให้เห็นว่าการตรวจพบ
การติดเชื้อเอชไอวี (รูป. 3b).
3.4 Depleting MRJ-L ลดการติดเชื้อเอชไอวี 1 ใน Macrophages
จากผลข้างต้นเราให้เหตุผลว่า siRNA-เคาะลงของ
MRJ-L ควรลดการจำลองแบบเอชไอวี-1 เพื่อแก้ปัญหานี้เราเคาะ
ลง MRJ-L ในขนาดใหญ่ที่มีระดับการแสดงออกสูงปกติ
(จากผู้บริจาคที่ 6) (รูป. 4a, ดวงตะวัน, ซ้าย) อันที่จริงเคาะลงของ
MRJ-L นัยสำคัญ Fi ด้วยกันลดการติดเชื้อ HIV-1 การติดเชื้อ (รูป. 4a, เชื้อไวรัส
เส้นโค้งขวา) ต่อไปเราจะตรวจสอบวิธีการแสดงออกภายนอก MRJ-L
จะส่งผลกระทบต่อการผลิตไวรัสในขนาดใหญ่ที่เป็นธรรมชาติมีต่ำ
ระดับของโปรตีนนี้ ขนาดใหญ่จากผู้บริจาคที่ 4 และ 8 มี
ระดับต่ำของภายนอก MRJ-L เรา transduced เซลล์เหล่านี้มี
การแสดงออก lentiviral MRJ-L เวกเตอร์ที่จะยกระดับ MRJ-L ของพวกเขา (รูป. 4b,
ดวงตะวัน, ซ้าย) นี้เพิ่มขึ้นการแสดงออก MRJ-L เอชไอวีเพิ่มขึ้น-1
การจำลองแบบ (รูป. 4b) ดังนั้นผลของเราแสดงให้เห็นว่าการแสดงออก MRJ-L สูง pivotally augments HIV-1 การติดเชื้อในแมคโครฟาจ.
3.5 MRJ-L โต้ตอบกับ Vpr และเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเข้านิวเคลียร์
Vpr มีส่วนเกี่ยวข้องในการนำเข้านิวเคลียร์ของเอชไอวี 1 preintegration ซับซ้อน เพราะ MRJ เป็นพี่เลี้ยงโมเลกุลเราต่อไปตรวจสอบถ้า MRJ-L มีบทบาทในการให้ความช่วยเหลือ Vpr กับรายการนิวเคลียร์ การทำเช่น
นี้เราได้ร่วมแสดงความ GFP-Vpr และ HA-ติดแท็ก MRJ-L หรือ MRJ-S ใน HeLa
เซลล์ เราสังเกตเห็นว่า Vpr และ MRJ-L ร่วมท้องถิ่นในนิวเคลียสของ
เซลล์ในขณะที่ Vpr และ MRJ-S ได้เห็นในพลาสซึม (รูป. 5A) GFP-
Vpr ถูกพบเฉพาะ (100%, 30 จาก 30) ในนิวเคลียสใน
shRNA (แย่ง) เซลล์ เมื่อ MRJ-L ก็ล้มลงในเซลล์ HeLa
(รูป. 5b, ค) ส่วนใหญ่ (83%, 39 จาก 47) ของ transfected GFP-Vpr กลายเป็นนิวเคลียสมากกว่านิวเคลียร์ [รูป 5c; เปรียบเทียบ shRNA (MRJ-L)
แผงเพื่อ shRNA (แย่ง) แผง] เหล่านี้ผลการวิจัยพบว่า MRJ-L
อำนวยความสะดวกในการแปลนิวเคลียร์ของ Vpr, ไฟ nding สอดคล้องกับผลการรายงานก่อนหน้านี้ในการทำงานร่วมกันของ MRJ-L ที่ติดเชื้อ HIV-2 VPX
(Cheng et al., 2008)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กับระดับ mrj-l สูงในแมคโครฟาจที่มีระดับต่ำ mrj-l .
เซลล์ติดเชื้อ inocula เท่ากัน ทั้งสูง มท. ( รูปที่ 3A )
( รูปที่ 3B ) หรือต่ำ มัวของแมคโครฟาจร้อน ( m-trophic ) HIV-1 สายพันธุ์เอ
( กานน et al . , 2000 ) น่าสนใจ แมคโครฟาจที่มีระดับ mrj-l สูงสม่ำเสมอ harbored
ระดับที่สูงขึ้นของ HIV-1 ซ้ำ
มากกว่าผู้ที่มีระดับต่ำ mrj-l ( รูปที่ 3 )ในต่ำ โดยกลุ่ม , macrophages เท่านั้น
มีสูง แต่ไม่ต่ำ mrj-l ระดับ พบตรวจพบการติดเชื้อเอชไอวี ( รูปที่ 3B )
.
3.4 . ใช้ mrj-l ลดการติดเชื้อใน macrophages
จากผลข้างต้น เราให้เหตุผลว่าบริษัทเคาะลงของ
mrj-l ควรลดไม่ซ้ำ ไปที่อยู่นี้เราล้มลงในแมโครเฟจด้วย
mrj-l ปกติสูงระดับการแสดงออก
( จากผู้บริจาค ( รูปที่ 6 ) 4A ,Western blot , ซ้าย ) แท้ เคาะลงของ
mrj-l signi จึงลดลงอย่างมีนัยสําคัญเมื่อลดการติดเชื้อ HIV-1 ( รูปที่ 4A , ไวรัส
โค้งขวา ) ต่อไป เราจะตรวจสอบวิธีการแสดงออกภายนอก mrj-l
จะส่งผลกระทบต่อการผลิตไวรัสแมโครเฟจที่เป็นธรรมชาติมีระดับต่ำ
ของโปรตีนนี้ ที่แมคโครฟาจจากผู้บริจาค 4 และ 8 อยู่ในระดับต่ำ mrj-l.

เรา transduced เซลล์เหล่านี้ด้วยlentiviral mrj-l นิพจน์เวกเตอร์ที่จะเพิ่มระดับของ mrj-l ( รูป 4b
, Western blot , ซ้าย ) นี้เพิ่มในการเพิ่ม mrj-l การแสดงออก
( รูปที่ 4B ) ดังนั้นจากผลการศึกษาการแสดงออก mrj-l สูงกว่า pivotally augments การติดเชื้อใน macrophages .
3.5 . mrj-l และโต้ตอบกับ vpr ที่จําเป็นสําหรับรายการ
ของนิวเคลียร์vpr เข้าไปพัวพัน กับเข้าของอาวุธนิวเคลียร์ใน preintegration ซับซ้อน เพราะ mrj เป็นคนคุมโมเลกุล เราถัดไปตรวจสอบถ้า mrj-l บทบาท ในการช่วยเหลือ vpr นิวเคลียร์รายการ ทำ
นี้เราร่วมแสดง vpr – GFP และฮาแท็ก mrj-l หรือ mrj-s ใน Hela
เซลล์ เราพบว่า vpr mrj-l Co และแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในนิวเคลียสของเซลล์ในขณะที่ vpr mrj-s
และพบใน cytoplasm ( ฟิค5A ) GFP )
vpr พบเฉพาะ ( 100% 30 30 ) ในนิวเคลียสใน
shrna ( แย่ง ) เซลล์ เมื่อ mrj-l ถูกล้มลงในเซลล์ Hela
( มะเดื่อ 5B , C ) ส่วนใหญ่ ( 83% 39 จาก 47 ) transfected GFP – vpr กลายเป็นนี้มากกว่านิวเคลียร์ [ รูปที่ 5 ; เปรียบเทียบ shrna ( mrj-l )
แผง shrna ( แย่ง ) แผง ] ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า mrj-l
ในภาษาท้องถิ่นของ vpr นิวเคลียร์ ,จึงสอดคล้องกับผลลัพธ์การส่งแบบรายงานก่อนหน้านี้ในการ mrj-l กับ hiv-2 vpx
( เฉิง et al . , 2008 ) .