2.6.3. TTGE analysisPCR products ob

2.6.3. TTGE analysis

PCR products obtained from the V3 region amplification as described above were subjected to TTGE analysis. TTGE was performed by using the Dcode universal mutation detection system (Bio-Rad). Polyacrylamide (8%) gels were prepared and run with 1× TAE buffer (40 mM Tris base, 20 mM glacial acetic acid, 1 mM EDTA, pH 8.3) diluted from 50× TAE buffer. Gels were prepared with 8% (wt/vol) acrylamide stock solutions (acrylamide-bisacrylamide, 37.5:1) and a final urea concentration of 7 M. The final electrophoresis conditions were 70 V for 16 h with an initial temperature of 63 °C and a final temperature of 70 °C (the temperature was increased 0.4 °C per h). Samples (20 μl) of PCR products were deposited in wells. A magnetic stirrer was used to mix the buffers and improve the temperature gradient homogeneity. After runs, gels were stained for 30 min with ethidium bromide (0.5 μg/ml of 1× TAE buffer), rinsed for 20 min in 1× TAE buffer, and photographed on a UV transillumination table.

3. Results and discussion

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6.3. TTGE วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ PCR จากการขยายสัญญาณภาค V3 ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นถูกต้องวิเคราะห์ TTGE TTGE ที่ดำเนินการ โดยใช้ระบบการตรวจสอบการกลายพันธุ์สากล Dcode (Bio Rad) เจ polyacrylamide (8%) ถูกเตรียม และทำงานกับ 1 × TAE บัฟเฟอร์ (40 มม.ทริฐาน 20 มม.กรดอะซิติกน้ำแข็ง EDTA 1 มม. ค่า pH 8.3) เจือจางจากบัฟเฟอร์ TAE × 50 เจมีเตรียม ด้วยโซลูชันหุ้นอะคริลาไมด์ 8% (wt/vol) (อะคริลาไมด์-bisacrylamide, 37.5:1) และความเข้มข้นของยูเรียที่สุดท้ายของ 7 M เงื่อนไขสุดท้ายอิได้ 70 V สำหรับ 16 ชม.อุณหภูมิเริ่มต้น 63 องศาเซลเซียสและสุดท้ายอุณหภูมิ 70 ° C (อุณหภูมิเพิ่มขึ้น 0.4 ° C ต่อชม.) ตัวอย่าง (20 μl) ของผลิตภัณฑ์ PCR ถูกฝากไว้ในบ่อ ใช้ช้อนคนเป็นแม่เหล็กผสมบัฟเฟอร์ และปรับปรุงรอยอุณหภูมิ หลังจากที่ทำงาน เจภาพ 30 นาทีกับโบรไมด์ ethidium (0.5 ไมโครกรัม/มล.ของบัฟเฟอร์ TAE × 1), ล้าง 20 นาทีในบัฟเฟอร์ TAE × 1 และถ่ายภาพบนตาราง transillumination UV3. ผล และการอภิปราย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6.3 TTGE วิเคราะห์ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ที่ได้รับจากภาคขยาย V3 ที่อธิบายข้างต้นถูกยัดเยียดให้ TTGE วิเคราะห์ TTGE ได้ดำเนินการโดยใช้ระบบการตรวจสอบการกลายพันธุ์สากล Dcode (Bio-Rad) อะคริเลต (8%) เจลได้จัดทำและทำงานด้วย 1 × TAE บัฟเฟอร์ (40 มิลลิเมตร Tris ฐาน 20 มิลลิเมตรน้ำแข็งกรดอะซิติก 1 มิ EDTA, ค่า pH 8.3) ปรับลดจาก 50 ×บัฟเฟอร์ TAE เจลได้จัดทำกับ 8% (น้ำหนัก / ปริมาตร) โซลูชั่นริลาไมด์หุ้น (acrylamide-bisacrylamide 37.5: 1) และความเข้มข้นของยูเรียสุดท้ายของ 7 เมตรเงื่อนไข electrophoresis สุดท้าย 70 V สำหรับ 16 ชั่วโมงที่มีอุณหภูมิเริ่มต้น 63 ​​° C และอุณหภูมิสุดท้ายของ 70 ° C (อุณหภูมิที่เพิ่มขึ้น 0.4 องศาเซลเซียสต่อชั่วโมง) ตัวอย่าง (20 ไมโครลิตร) ของผลิตภัณฑ์ PCR ถูกฝากไว้ในหลุม เครื่องกวนแม่เหล็กถูกใช้ในการผสมบัฟเฟอร์และปรับปรุงความสม่ำเสมอของอุณหภูมิการไล่ระดับสี หลังจากวิ่งเจลมีการย้อมเป็นเวลา 30 นาทีด้วย ethidium bromide (0.5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร 1 × TAE บัฟเฟอร์) ล้างเป็นเวลา 20 นาทีใน 1 × TAE บัฟเฟอร์และถ่ายภาพบนโต๊ะ transillumination ยูวี. 3 ผลการค้นหาและการอภิปราย